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1、学习必备欢迎下载基因工程专题复习题 (1015 年高考题 ) 1、 （2010浙江高考 T2）在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是（）A. 用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸B. 用 DNA 连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体C. 将重组 DNA 分子导入烟草原生质体D. 用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞2、 （2010天津高考 T7）. 下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中 tetR表示四环素抗性基因， ampR表示氨苄青霉素抗性基因， BamHI 、HindIII、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答：（1）图中将人乳
2、铁蛋白基因插入载体，需用限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含的培养基上进行。（2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是（填字母代号） 。A.启动子 B. tetR C.复制原点 D. ampR （3）过程可采用的操作方法是（填字母代号）。A.农杆菌转化 B. 大肠杆菌转化 C.显微注射 D. 细胞融合（4）过程可采用的生物技术是。（5）对早期胚胎进行切割，经过程可获得多个新个体。这利用了细胞的性。（6）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用（填字母代号）技术。A.核酸分子杂交 B. 基因序列分析 C.抗原抗体杂交 D. PCR精选学习资料 -
3、 - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页，共 15 页学习必备欢迎下载3、 （2010福建高考 T32） 生物- 现代生物科技专题 红细胞生成素（ EPO ）是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。 由于天然 EPO 来源极为有限， 目前临床上使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细胞生成素（rhEPO ） ， 其简要生产流程如图。请回答：（1）图中所指的是技术。（2）图中所指的物质是，所指的物质是。（3）培养重组 CHO 细胞时，为便于清除代谢产物，防止细胞产物积累对细胞自身造成危害，应定期更换。（4） 检测
4、rhEPO的体外活性需用抗 rhEPO的单克隆抗体。分泌该单克隆抗体的细胞，可由 rhEPO免疫过的小鼠 B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成。4、(2010江苏高考 T27)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l 、图 2 中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：（1）一个图 1 所示的质粒分子经Sma 切割前后，分别含有个游离的磷酸基团。（2）若对图中质粒进行改造，插入的Sma 酶切位点越多，质粒的热稳定性越。（3）用图中的质粒和外源DNA 构建重组质粒，不能使用Sma 切割，原因是。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -
5、第 2 页，共 15 页学习必备欢迎下载（4）与只使用 EcoR I 相比较，使用 BamH 和 Hind 两种限制酶同时处理质粒、外源 DNA 的优点在于可以防止。（5） 为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合， 并加入酶。（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了。（7）为了从 cDNA 文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体中，然后在的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。5、(2011浙江高考 ) 将 ada(腺苷酸脱氨酶基因 ) 通过质粒 pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是( ) A.每个大肠杆菌
6、细胞至少含一个重组质粒B.每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点C.每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada D.每个插入的 ada 至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子6、(2011 山东高考 ) 人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示。(1) 卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可从已处死的雌鼠中获取。(2) 图中的高血压相关基因作为，质粒作为，二者需 用切 割 后 连 接 成 重 组 载 体 ， 该 过 程 与 质 粒 上 含 有有关。(3) 子代大鼠如果和， 即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关
7、基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型。(4) 在 上 述 转 基 因 大 鼠 的 培 育 过 程 中 ， 所 用 到 的 主 要 胚 胎 工 程 技 术是、早期胚胎培养和胚胎移植。7、(2012江苏高考 T32)图 1表示含有目的基因D的 DNA 片段长度 (bp 即碱基精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页，共 15 页学习必备欢迎下载对)和部分碱基序列 , 图 2 表示一种质粒的结构和部分碱基序列。 现有 Msp 、 BamH、Mbo 、Sma 4 种限制性核酸内切酶 , 它们识别的碱基序列和酶切位点分别为 CCG
8、G 、GGATCC、GATC 、CCCGGG 。请回答下列问题 : (1) 图 1 的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由连接。(2) 若用限制酶 Sma 完全切割图 1 中 DNA片段, 产生的末端是末端, 其产物长度为。(3) 若图 1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换 , 那么基因 D就突变为基因 d。从杂合子中分离出图1及其对应的 DNA 片段, 用限制酶 Sma 完全切割 , 产物中共有种不同长度的 DNA 片段。(4) 若将图 2中质粒和目的基因 D通过同种限制酶处理后进行连接, 形成重组质粒 ,那么应选用的限制酶是。在导入重组质粒后 , 为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌 ,
9、 一般需要用添加的培养基进行培养。 经检测 , 部分含有重组质粒 的 大 肠 杆 菌 菌 株 中 目 的 基 因D 不 能 正 确 表 达 , 其 最 可 能 的 原 因是。8、(2012天津高考 T7)生物分子间特异性结合的性质广泛用于生命科学研究。以下实例为体外处理“蛋白质-DNA复合体”获得 DNA片段信息的过程图。据图回答 : (1) 过程酶作用的部位是键, 此过程只发生在非结合区DNA, 过程酶作用的部位是键。(2) 两过程利用了酶的特性。(3) 若将得到的 DNA 片段用于构建重组质粒 , 需要将过程的测序结果与精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - -
10、 - - - - -第 4 页，共 15 页学习必备欢迎下载酶的识别序列进行比对 , 以确定选用何种酶。(4) 如果复合体中的蛋白质为RNA聚合酶 , 则其识别、结合的DNA序列区为基因的。(5) 以下研究利用了生物分子间特异性结合性质的有( 多选) 。A.分离得到核糖体 , 用蛋白酶酶解后提取rRNA B.用无水乙醇处理菠菜叶片 , 提取叶绿体基粒膜上的光合色素C.通过分子杂交手段 , 用荧光物质标记的目的基因进行染色体基因定位D.将抑制成熟基因导入番茄 , 其 mRNA 与催化成熟酶基因的mRNA 互补结合 , 终止后者翻译 , 延迟果实成熟9、(2013?广东高考 ?T3)从某海洋动物中
11、获得一基因,其表达产物为一种抗菌性和溶血性均较强的多肽P1。目前在 P1 的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的多肽药物,首先要做的是() A.合成编码目的肽的 DNA 片段B.构建含目的肽 DNA 片段的表达载体C.依据 P1 氨基酸序列设计多条模拟肽D.筛选出具有优良活性的模拟肽作为目的肽10、(2013? 安徽高考 ?T6)下图为通过 DNA 分子杂交鉴定含有某特定DNA 的细菌克隆示意图。下列叙述正确的是() A.根据培养皿中菌落数可以准确计算样品中含有的活菌实际数目B.外源 DNA 必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制C.重组质粒与探针能进行分子杂交是因为DNA 分子脱氧核糖和
12、磷酸交替连接D.放射自显影结果可以显示原培养皿中含有特定DNA 的细菌菌落位置11、 （2014天津卷） 4. 为达到相应目的，必须通过分子检测的是A.携带链霉素抗性基因受体菌的筛选B.产生抗人白细胞介素 8 抗体的杂交瘤细胞的筛选精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页，共 15 页学习必备欢迎下载C.转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定D.21 三体综合征的诊断12、 （2014广东卷）25 利用基因工程技术生产羧酸酯酶（CarE）制剂的流程如图14 所示，下列叙述正确的是（）多选题A、过程需使用逆转录酶B、过程需使用解旋酶和PCR 获
13、取目的基因C、过程使用的感受态细胞可用NaCl 溶液制备D、过程可利用 DNA 分子杂交鉴定目的基因是否已导入受体细胞13、 （2014海南卷） 31生物选修 3：现代生物科技专题 （15分）下面是将某细菌的基因A 导入大肠杆菌内，制备 “ 工程菌 ” 的示意图。请据图回答：获得 A 有两条途径：一是以 A 的 mRNA 为模板，在酶的催化下，合成互补的单链DNA ，然后在作用下合成双链 DNA ，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的氨基酸序列， 推测出相应的 mRNA 序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA 的序列，再通过化学方法合成所需基因。利用 PCR 技术扩增 DNA 时，需要
14、在反应体系中添加的有机物质有、4 种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的DNA 聚合酶，扩增过程可以在 PCR 扩增仪中完成。由 A 和载体 B 拼接形成的 C 通常称为。在基因工程中，常用Ca2处理 D，其目的是。14、 （2014 山东卷） 36.（12 分） 【现代生物科技专题】人组织纤精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页，共 15 页学习必备欢迎下载溶酶原激活物（ htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA 基因母羊的羊乳中获得。流程如下：（1）htPA 基因与载体用 _切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的
15、基因是否已插入受体细胞DNA ，可采用 _ 技术。（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其_。采集的精子需要经过 _ ，才具备受精能力。（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是_ 。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行_。 利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的_。（4）若在转 ht-PA 基因母羊的羊乳中检测到_ ，说明目的基因成功表达。15、 （2014 重庆卷） 4.题 4 图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述，正确的是A的构建需要限制性核酸内切酶和DNA 聚合酶参与B侵染植物细胞后，重组Ti 质粒整
16、合到的染色体上C的染色体上若含抗虫基因，则就表现出抗虫性状D只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异16、 （2014江苏卷） 23. 下列关于基因工程技术的叙述，正确的是A. 切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核苷酸序列B.PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA 聚合酶催化不同的反应精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页，共 15 页学习必备欢迎下载C.载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因D.抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达17、 （2014天津卷） 8.（12 分）嗜热土壤芽胞杆
17、菌产生的 -葡萄糖苷酶（ BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：.利用大肠杆菌表达 BglB 酶（1）PCR 扩 增bglB基 因 时 ， 选 用基因组 DNA 作模板。（2）右图为质粒限制酶酶切图谱。 bglB 基因不含图中限制酶识别序列。为使 PCR 扩增的bglB 基因重组进该质粒，扩增的bglB 基因两端需分别引入和不同限制酶的识别序列。（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为。18、 （2015天津） 8.（16 分）纤维素分子不能进入酵母细胞，为了使酵母菌能够利用环境中的纤维素为原料生产酒精，
18、构建了含3 种不同基因片段的重组质粒，下面是酵母菌转化及纤维素酶在工程菌内合成与运输的示意图。据图回答：（1）本研究构建重组质粒时看选用四种限制酶，其识别序列如下图，为防止酶切片段的自身环接，可选用的限制酶组合是_或_。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页，共 15 页学习必备欢迎下载(2) 设置菌株为对照，是为了验证_ 不携带纤维素酶基因。（3）纤维素酶基因的表达包括_ 和_ 过程，与菌株相比，在菌株、中参与纤维素酶合成和分泌的细胞器还有_ 。（4）在以纤维素为唯一C 源的培养基上分别培养菌株、，菌株_ 不能存活，原因是 _ 。
19、(5)酵母菌生产酒精的细胞部位是_ ，产生酒精时细胞的呼吸方式是_ ，在利用纤维素生产酒精时，菌株更具有优势，因为导入的中重组质粒含有 _ 。使分泌的纤维素酶固定于细胞壁，减少因培养液更新而造成的酶的流失，提高酶的利用率。答案和解析1、 （2010浙江高考 T2） 【规范解答】选 A。限制性核酸内切酶是用来切割DNA获取抗除草剂基因片段，而非烟草花叶病毒的核酸RNA ，A错误； DNA 连接酶可以将获取的目的基因和载体结合，构建基因的表达载体， B正确；获取的重组 DNA分子可以将其导入到烟草受体细胞中，目的基因会在其中表达， 使烟草具备抗除草剂的特性， 欲筛选出抗除草剂的转基因烟草，可以将烟
20、草放在含除草剂的培养基中培养，观察其是否能够正常生长，C 、D正确。2、 【参考答案】（1）.Hind 和 BamH 氨苄青霉素（2）A （3）C （4）胚胎移植技术（5）全能（6）C 3、 （2010福建高考 T32） 【规范解答】（1）图中的是扩增DNA 片段的过程，通常采用 PCR 技术；精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 9 页，共 15 页学习必备欢迎下载（2）图中的为从胚胎干细胞中提取的mRNA，利用 mRNA 可以通过反转录形成cDNA而获取目的基因；为目的基因导入到受体细胞后表达出的产物rhEPO ；（3）培养重组 CH
21、O 细胞时，会产生对细胞自身有危害的代谢产物，故应定期更换培养液； （4）小鼠 B淋巴细胞只能产生少量的抗体，骨髓瘤细胞具有连续增殖的能力，将小鼠 B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞具备了上述两种细胞的优良特性，就能产生大量的单克隆抗体。【参考答案】（1）PCR （2）mRNA rhEPO （3）培养液（4）杂交瘤4、(2010江苏高考 T27) 【规范解答】（1）该质粒为环状 DNA ，经 Sma 切割前，不含有游离的磷酸基团，经Sma 切割后形成平末端，含有2 个游离的磷酸基团。（2）Sma 识别的是 CCCGGG序列，切割在 C与 G之间，Sma 酶切位点越多，也就是 CG碱
22、基对越多， C与 G之间的氢键（ 3个）比 A与 T之间的氢键（ 2 个）数量多，所以 Sma I 酶切位点越多，质粒的热稳定性越高（3）据图 1 可知，Sma 切割位点在抗生素抗性基因（标记基因）中，据图2 可知，Sma 切割位点在目的基因中，因此使用Sma 切割会破坏质粒的抗性基因和外源 DNA 中的目的基因。（4）用同一种限制酶处理质粒和外源DNA ，再用 DNA连接酶连接时，往往会有三种连接形式： 目的基因质粒、 目的基因目的基因 （环化） 、质粒质粒（环化） ，后两种是我们不需要的，因而要进行筛选。用两种限制酶处理质粒和外源DNA ，因形成的末端不同，可避免上述情况的发生。（5）连接
23、质粒与目的基因的工具酶是DNA 连接酶。（6）抗生素抗性基因是标记基因的一种，标记基因的作用是供重组DNA 鉴定和筛选。（7）可根据目的基因是否表达成预期的蛋白质进行目的基因的检测，本题中预期的蛋白质是蔗糖转运蛋白， 因而可在以蔗糖为唯一含碳营养物质的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。【参考答案】（1）0、2（2）高（3）Sma 会破坏质粒的抗性基因和外源DNA 中的目的基因精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 10 页，共 15 页学习必备欢迎下载（4）质粒和含目的基因的外源DNA 片段自身环化（5）DNA连接（6）鉴定和筛选
24、含有目的基因的细胞（7）以蔗糖为唯一含碳营养物质5、(2011浙江高考 ) 【解析】选 C。A 项，ada 为目的基因，大肠杆菌为受体细胞，将目的基因导入大肠杆菌时， 如果能成功表达说明每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒； B项，要让目的基因与质粒形成重组质粒，两者必须用同种限制性核酸内切酶切割，所以每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点；C项，质粒作为运载体的条件之一是有多种限制性核酸内切酶的识别位点，但每种限制性核酸内切酶只有一个识别位点，只能插入一个目的基因(ada) ；D项，ada 导入大肠杆菌成功的标志是表达腺苷酸脱氨酶，因此每个插入的ada 至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子。6
25、、(2011山东高考 ) 【解析】本题主要考查基因工程和胚胎工程技术。(1) 获取卵母细胞的途径：从活体输卵管中采集，从已处死的雌鼠卵巢中获取。(2) 题干中论述：利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠，所以推测目的基因为与高血压相关的基因，质粒为载体， 两者必须用相同的限制性内切酶切割，有相同的黏性末端，才能连接，能被限制性内切酶切割，是因为具有限制性内切酶的切割位点。(3) 如果检测到相应蛋白质，即可在分子水平进行检测目的基因是否表达，如果检测已患高血压，即可在个体水平进行检测目的基因是否表达。(4) 在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是体外受精、早期胚胎培养和胚胎
26、移植。答案： (1) 卵巢 (2)目的基因载体同一种限制性内切酶限制性内切酶的切割位点(3) 检测到相应蛋白质出现高血压 (4)体外受精7、(2012 江苏高考 T3) 【精讲精析】 (1) 两条脱氧核苷酸链之间的碱基通过氢键相连 , 一条脱氧核苷酸链之间的碱基通过脱氧核糖- 磷酸- 脱氧核糖连接。(2) 根据限制酶 Sma 识别的碱基序列可知 , 限制酶 Sma 切割产生的末端为平末端, 在图 1 序列中共有 2 个 Sma 的切割位点 , 切割后形成 3 种不同长度的产物 ,分别为 537 bp、790 bp、661 bp。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 -
27、 - - - - - -第 11 页，共 15 页学习必备欢迎下载(3) 图 1 中有 Sma 的两个识别序列 , 完全切割后产生3 个不同长度的 DNA片段,若虚框中的碱基被T-A 替换, 则产生 2 个 DNA 片段, 其中 1 个 DNA 片段与上次切割的相同 , 因此经完全切割后共产生4 种不同长度的 DNA 片段。(4) 切割目的基因可选用限制酶BamH 和限制酶 Mbo , 但限制酶 Mbo 可将质粒中的抗生素 A抗性基因和抗生素B抗性基因都破坏 , 而限制酶 BamH 只破坏抗生素 A抗性基因 , 因此只能选用限制酶BamH ; 重组质粒中含有抗生素B抗性基因 ,因此可在含抗生素
28、B的培养基上培养。【参考答案】 (1) 脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖(2) 平537 bp、790 bp、661 bp (3)4 (4)BamH 抗生素 B 同种限制酶切割形成的末端相同, 部分目的基因 D与质粒反向连接8、(2012天津高考 T7) 【精讲精析】 (1)DNA酶作用于 DNA 分子后 , 若将 DNA分子切割成片段 , 应作用于磷酸二酯键 , 蛋白酶作用于蛋白质中的肽键。(2) 酶的作用特点是具有专一性。(3) 若用 DNA片段构建重组质粒 , 需要与限制性核酸内切酶切割的识别序列进行比对, 选用切割后获得的相同片段所对应的限制性核酸内切酶进行切割。(4)RNA 聚合酶特定结合启
29、动子中RNA聚合酶结合位点。(5) 蛋白酶特定处理蛋白质 ,DNA分子杂交和mRNA 与基因的互补都体现了碱基互补配对原则。【参考答案】 (1) 磷酸二酯肽(2) 专一性(3) 限制性核酸内切(4) 启动子 (或转录起始区 ) (5)A 、C、D 9、(2013?广东高考 ?T3) 【解析】选 C。本题考查蛋白质工程的设计流程相关知识。如果对多肽P1进行改造 ,首先根据预期功能设计多肽的分子结构,即根据 P1氨基酸序列设计多条模拟肽,再根据模拟肽的氨基酸序列合成编码模拟肽的DNA片段,从而构建含目的肽DNA 片段的表达载体 ,最后从表达产生的模拟肽中筛选出具有优良活性的模拟肽作为目的肽。10、
30、(2013? 安徽高考 ?T6) 【解析】选 D。本题主要考查细菌培养和基因工程等有关知识。 A 项,用取样调查法根据培养皿中菌落数只能估算推测出含有的活菌实精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 12 页，共 15 页学习必备欢迎下载际数目 ,故错误;B 项,外源 DNA 必须位于重组质粒的启动子和终止子之间,是转录形成 mRNA 的必要条件而不是复制的必要条件,故错误 ;C 项,DNA 杂交是通过碱基互补配对完成的 ,故错误 ;D 项,放射性标记的 DNA 探针能与相应的 DNA 杂交产生放射自显影 ,而只有特定的 DNA 才与探针相结
31、合 ,所以可以显示原培养皿中含有特定 DNA 的细菌菌落位置 ,故正确。11、 （2014 天津卷） 【答案】 B 【解析】可通过将受体菌接种在含链霉素的培养基中筛选携带链霉素抗性基因的受体菌， A错误；抗人白细胞介素的杂交瘤细胞应通过抗原-抗体杂交技术筛选产生， B正确；在棉花田中人工放入害虫可检验转基因抗虫棉的抗虫效果，C错误；可利用显微镜检测21 三体综合征， D错误。12、 （2014广东卷）【答案】 AD 【解析】过程是以RNA 为模板合成 DNA 的过程，即逆转录过程，需要逆转录酶的催化， 故 A 正确；过程表示利用 PCR 扩增目的基因， 在 PCR 过程中，不需要解旋酶，是通过
32、控制温度来达到解旋的目的，故B 错；利用氯化钙处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞，故C 错；检测目的基因是否成功导入受体细胞的染色体 DNA 中，可以采用 DNA 分子杂交技术，故D 正确13、 （2014 海南卷） 【答案】 （1）逆转录酶DNA 聚合酶氨基酸脱氧核苷酸（2）引物（目的基因或 A 基因）模板（3）基因表达载体（4）使其成为感受态细胞，使大肠杆菌更容易吸收重组DNA 分子【解析】 （1）利用逆转录法合成目的基因的过程是：以mRNA 为模板，在逆转录酶的催化作用下合成单链DNA， 然后在 DNA 聚合酶作用下，合成双链 DNA分子；根据蛋白质工程合成目的基因的过程是：根据目标蛋白质
33、的氨基酸序列，推测相应的 mRNA 序列，然后按照碱基互补配对原则， 推测 DNA 中脱氧核苷酸的排列顺序，通过化学方法合成。 （2）PCR过程中需要酶、底物、模板、引物和能量等条件。（3）目的基因和运载体结合，形成基因表达载体。 （4）有利用大肠杆菌做受体细胞时， 需要先用 Ca2+处理，使之成为感受态细胞， 有利于吸收重组 DNA 分子14、 （2014山东卷） 【答案】 （1）同种限制性核酸内切酶 （或同种限制酶）； DNA分子杂交（或核酸探针）精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 13 页，共 15 页学习必备欢迎下载（2）超数排
34、卵；获能（处理）（3）显微注射法；性别鉴定；全能性（4）htPA（或人组织纤溶酶原激活物）【解析】 （1）用同种限制酶切割质粒和含有htPA 基因的 DNA 片段可产生相同的黏性末端， 便于构建基因表达载体； 通常采用 DNA 分子杂交技术来检测目的基因是否已插入受体细胞DNA 。（2）为获得更多的卵母细胞，通常对供体母羊注射促性腺激素使其超数排卵；采集的精子需要经过获能处理才具备受精能力。（3）通常用显微注射法将重组表达载体导入动物的受精卵；为了获得母羊，移植前需要对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定；早期胚胎细胞具有全能性，可利用胚胎分割和胚胎移植技术获得多个转基因个体。（4）ht PA
35、基因的表达产物为人组织纤溶酶原激活物，若在转基因母羊的羊乳中检测到人组织纤溶酶原激活物，说明目的基因成功表达。15、 （2014重庆卷） 【答案】 D 【解析】构建载体需要限制酶和DNA 连接酶，A 错误；侵染植物细胞后，重组 Ti 质粒上的 T-DNA 整合到的染色体上， B 错误；染色体上含有目的基因，但目的基因也可能不能转录或者不能翻译，或者表达的蛋白质不具有生物活性，C 错误；植株表现出抗虫性状，说明含有目的基因，属于基因重组，为可遗传变异，D 正确。16、 （2014江苏卷） 【答案】 D 【解析】限制性核酸内切酶大多是特异性识别6个核苷酸序列，但也有识别序列由 4、5或8个核苷酸组
36、成的， A错误；PCR 中耐高温的 DNA 聚合酶只是在延伸阶段发挥催化作用， B项错误；载体质粒上抗生素抗性基因可作为标记基因，供重组DNA 的鉴定和选择，不是抗生素合成基因，C 错误；目的基因导入了受体细胞不一定就都能正常表达， D正确。17、 （2014天津卷）【答案】 （1）嗜热土壤芽孢杆菌（2）Nde BamH（3）转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB 酶（4）失活B （5）A、C 精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 14 页，共 15 页学习必备欢迎下载【解析】（1）bglB 基因存在于嗜热土壤芽孢杆菌基因组中，故应以该菌
37、的基因组 DNA 为模板进行基因扩增。（2）目的基因与质粒进行重组时，需将目的基因插入到启动子和终止子之间，且应靠近启动子和终止子，结合示意图可知，应在扩增的bglB 基因两端分别引入 Nde和 BamH两种限制酶的识别序列。（3）该基因表达载体中含有bglB 基因，其可表达产生 -葡萄糖苷酶，其可分解纤维素，这样大肠杆菌就获得了分解纤维素的能力。（4）由图 2 可知， BglB 酶在 80保温 30 分钟后，该酶就会失活；由图1可知，当温度为 6070时，酶活性较高，而由图 2 可知 70时保温 30 分钟，酶活性开始减弱，而60保温 30 分钟后酶活性基本不发生变化，由此可知为高效利用 B
38、glB 酶降解纤维素，反应温度最好应控制在60，故选 B。（5）在 bglB 基因扩增过程中加入诱变剂进行诱变处理，相比于诱变剂直接处理嗜热土壤芽孢杆菌，针对性更强；基因突变是不定向的；由于PCR 过程基因扩增即 DNA 复制快速进行，发生突变后可进行快速积累，进而便于筛选；基因突变可能导致氨基酸数目的改变，如突变后的密码子变为终止密码子，可导致蛋白质合成提前终止，进而导致氨基酸数目变少。18、 （16 分）（1） B（或 C）C(或 B) (2)质粒 DNA 和酵母菌基因组(3)转录翻译内质网、高尔基体（4）缺少信号肽编码序列，合成的纤维素酶不能分泌到细胞外，细胞无可利用的碳源(5)细胞质基质无氧呼吸A 基因片段精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 15 页，共 15 页