《微生物化验员应知应会学习资料共9页word资料.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物化验员应知应会学习资料共9页word资料.doc（9页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流微生物化验员应知应会学习资料【精品文档】第 9 页2012年应知应会学习资料微生物化验员二一二年十月目 录一、检测控制2二、食品安全风险监测3三、精密仪器管理3四、在线实验室管理5五、实验室安全及防护知识5六、微生物基本知识6七、微生物检验基本手段和准备工作6八、微生物检样的采集7九、食品微生物学常规检验技术8十、无菌间、实验室生物安全防护规则12一、 检测控制1、 原辅物料和产品需按照国家相关标准和研究院下发的企业标准实施检验，分公司因仪器配置不足原因不具备检测能力的项目需委托片区或质监部检测；2、 原料包材进货验收应录入原辅包材进厂验收自动化信息系统
2、（IQC系统）；成品报告单应及时录入成品报告单系统3、 不符合质量要求的原料，指不在标准明确的合格或受限使用范围、在标准中未规定可以调整等级的不合格原料，一律按不合格判定，不符质量要求的原辅材料仓库不入库、车间不领用；不合格产品不得发货。二、 食品安全风险监测宗总提出“构建企业自主食品安全风险监测和预警体系”1、 意义：保障食品安全是国际社会面临的共同挑战和责任。构建企业自主食品安全风险监测和预警体系，有利于早发现、早报告、早处置食品安全风险，积累食品安全管理经验，为食品安全风险评估和预警提供科学数据和实践经验，确保食品安全。 2、 目前的工作方向：每季制定各类产品和原料的食品安全风险监测计划
3、，通过市场抽样、分公司抽样、产品和原料留样检测，组织集团、片区、分公司检测人员实施三聚氰胺、黄曲霉毒素、铬等三十多项指标的风险检测，发现问题，及时预警。 3、 国内发生的食品安全事件1) 三聚氰胺事件：目前液态奶及奶粉的三聚氰胺限量值是（2.5mg/kg）2) 皮革奶事件：目前主要通过检测L-羟脯氨酸来判定。3) 黄曲霉毒素事件：乳及乳制品、婴幼儿配方食品的黄曲霉毒素M1的限量均为0.5g/kg.4) 毒胶囊事件：毒胶囊事件是制造过程中加入了（工业明胶）使得重金属（铬）超标。5) 伊利“汞”超标事件 三、 精密仪器管理宗总指出：“化验室管理需要加强，特别需做好高价值检验仪器的使用管理，提高操作
4、保养规范性，有效地提高公司质量监控水平。”(一) 仪器设备的使用维护1) 实验室指定专人为仪器设备管理员，统一负责实验室仪器的维护和管理，每台仪器设备应有具体保管人。2) 主要仪器设备应制定操作作业指导书，内容应包括：正确的操作顺序和方法，安全注意事项，维护保养方法。主要仪器包括乳成分分析仪、凯氏定氮仪、液相色谱仪、原子吸收光谱仪、原子荧光光度计、分光光度计、糖度仪、旋光仪、Hach浊度仪、旋转蒸发仪、实验室均质机、高速离心机等。）3) 仪器作业指导书和使用记录本应放在指定位置，便于使用和检查。4) 仪器设备使用者必须熟悉仪器设备的性能、操作规程以及维护保养办法。未获得上岗操作资格的人员不得擅
5、自使用。5) 仪器设备使用者应自觉爱护仪器设备，经常保持其整齐清洁。严格按作业指导书使用及维护仪器设备，填写仪器使用记录。6) 仪器使用前或使用过程中出现故障或显示结果可疑或检定证明其有缺陷时，应立即停止使用，加贴停用标识，故障仪器不得在实验中使用。7) 仪器设备需备有3个月耗材，以确保检测工作正常开展。(二) 精密仪器的使用维护需重点关注的精密仪器主要包括：1、 大型精密仪器，包括凯氏定氮仪、乳成分分析仪、液相色谱仪、原子吸收光谱仪、原子荧光光度计、气相色谱等；2、 实验室常用精密仪器，包括糖度计、分光光度计、pH计、旋光仪、Hach浊度仪、旋转蒸发仪、实验室均质机、高速离心机、耐破仪、边压
6、仪、涂膜厚度测定仪等。1.凯氏定氮仪：1）仪器（含消化炉）整体清洁，仪器外部及内腔无碱液残留；试剂桶清洁；2）消化管无缺口或裂缝；3）消化管横梁无破损或缺口，密封圈未老化；4）碱桶内无沉淀和絮状物；5）消化系统必须接尾气排放水抽泵；6）每周做一次蒸馏系统验证，每两周做一次全系统验证，回收率在99.0%-101.0%。2.乳成分分析仪：1）仪器整体清洁，仪器外部、内部腔体、管路无残留奶垢，均质器不漏液；2）每周对乳成分分析仪进行浸泡流管及硬件强力清洗，并在使用记录中记录强力清洗信息；3）每周三次对含乳产品进行蛋白含量单项比对校准并做好记录；4）产品模块定标样品数量应大于8个，且定标浓度范围需覆盖
7、可能涉及到的样品含量。3.液相色谱仪：1）仪器整体清洁，仪器外部、内部无积灰；2）标准品、备件、耗材需配备齐全，至少需备有三聚氰胺标准品，备有1根全新C18 长度150mm 色谱柱、1盒全新C18保护柱，安捷伦液相需备有色谱纯（HPLC级）异丙醇试剂；3）水相排气，安捷伦液相过滤白头压力不超过10bar，Waters液相在线滤芯压力不超过300psi。4.原子吸收光谱仪：1）仪器整体清洁，无积灰；2）实验用硝酸和高氯酸必须为优级纯，且有验收记录，验收标准为铬试剂空白2g/L，铅试剂空白3g/L；3）氩气纯度至少为99.99%；4）至少备有铅、铬标准品并有标准品证书；5）仪器至少每半月开机一次。
8、5.原子荧光光度计：1）仪器整体清洁，无积灰；2）氩气纯度至少为99.99%；3）至少备有砷、汞标准品并有标准品证书；4）仪器至少每半月开机一次。6.糖度计：1）要求防潮防尘，RFM340糖度计的吸水硅胶应保持兰色；2）ATAGO糖度计后部的过滤网应定期清洁；3）棱镜金属面应无划痕。7.分光光度计：1）样品室内应无积存的溢出溶液；2）光路及元件无明显腐蚀；3）不使用时样品室内应无样品；4）无样品时样品室盖应保持关闭；8.pH计：1）pH计显示数值应稳定，不能有大幅跳动情况；2）按键和旋钮使用正常；3）电极保持洁净，复合电极的外参比液为3mol/L氯化钾溶液，应保持有2/3以上；9.耐破仪（包材
9、检测）：1）硅油装量应在1/2以上；2）胶膜必须凸起成球面状，并略低于下夹盘表面；3）打开气源，气压应控制在0.3-0.4兆帕之间10.边压仪（包材检测）：1）应及时更换刀片（可观察所取待测试样是否有毛边）；2）配备专用导块11.涂膜厚度测定仪：1）开机后Error指示灯应在熄灭状态；2）仪器校准后，测样显示数值应稳定，不能有大幅跳动情况；3）检测夹具导电胶粒应无破损、无明显划痕；4）应备有校准板四、 在线实验室管理1、 各检测仪器和试剂瓶等要求分类摆放整齐；各仪器外表干净整洁、玻璃器皿干净、无破损；检测室台面、地面干净，无明显结垢情况。2、 在线使用的糖度计、分光光度计、pH计、离心机等使用
10、和维护正常，具体要求同实验室。五、 实验室安全及防护知识1、 实验室危险性种类1) 易燃、易爆危险2) 有毒气体危险3) 机械伤害危险4) 触电危险5) 放射性、微波辐射、电磁、电场等其他危险2、 实验室通用安全守则1) 实验室人员必须熟悉仪器、设备的性能和使用方法，按规定要求进行操作。2) 凡进行有危险性实验，实验人员应先检查防护措施，确证防护妥当后，才可进行操作。实验过程中操作人员不得擅自离开，实验完成后立即做好善后清理工作，并作出记录。3) 凡有毒或有刺激性气体发生的实验、应在通风柜内进行，做好个人防护、不得把头部伸进通风柜内。4) 凡接触或使用腐蚀和刺激性药品，如强酸、强碱、氨水、过氧
11、化氢、冰醋酸等，取用时尽可能佩带橡皮手套和防护眼镜，瓶口不要直接对着人，禁用裸手直接拿取上述物品。开启有毒气体容器时应带防毒面具。5) 不使用无标签（或标志）容器盛放的试剂、试样。6) 实验中产生的有毒、有害废液、废物应集中处理，不得任意排放或流入下水道。酸、碱或有毒物品溅落时，应及时清理及除毒。7) 严格遵守安全用电规程。不使用绝缘不良或接地不良的电气设备，不准擅自拆修电器。8) 安装能发生破裂的玻璃仪器时，要用布巾包裹。往玻璃管上套橡皮管时，管口应烧圆滑，并用水或甘油润滑，防止玻璃管破裂割伤手。9) 实验完毕，实验人员应养成洗手离开的习惯。实验室内禁止吸烟和存放食物、食具（食品感官鉴评实验
12、室例外）。10) 实验室应配备消防器材。实验人员要熟悉其使用方法并掌握有关的灭火知识。11) 实验结束，人员离室前要检查水、电、燃起和门窗，确保安全，并作好登记。3、 常见的实验室事故急救和处理1) 实验室灭火实验室灭火的原则是：移去或隔绝燃料的来源，隔绝空气（氧气）、降低温度。2) 化学物质中毒及灼伤的急救i. 有毒气体的中毒:常见有毒气体有氯气、硫化氢、氮氧化物、一氧化碳等。如果一旦发生中毒，要立即离开现场，将中毒者抬到空气新鲜处，报警或送医院急救。ii. 强酸、强碱灼伤：受到硫酸、盐酸、硝酸伤害时，立即用大量水冲洗，然后用2的小苏打水冲洗患部；受到NaOH、KOH 溶液伤害时，迅速用大量
13、水冲洗，再用2稀醋酸或2硼酸充分洗涤伤处。遇有衣服粘连在皮肤上，切忌撕开或揭开，以防破坏皮肤组织，大量冲水后再送医院由医生处理。3) 触电的急救遇到人身触电事故时，必须保持冷静，立即拉下电闸断电，或用木棍将电源线拨离触电者。千万不要徒手和脚底无绝缘体情况下去拉触电者。如人在高处，要防止切断电源后把人摔伤。脱离电源后，检查伤员呼吸和心跳情况。若呼吸停止，立即进行人工呼吸，并报警呼救。六、 微生物基本知识微生物（microorganism, microbe）是一些肉眼看不见的微小生物的总称。l 微生物种类繁多，至少有十万种以上。按其结构、化学组成及生活习性等差异可分成三大类。 l 真核细胞型微生物
14、：真菌属于此类型微生物。霉菌的繁殖方式为分生孢子；酵母为出芽繁殖。l 原核细胞型微生物：这类微生物种类众多，有细菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体和放线菌。细菌的繁殖方式为二分裂繁殖。l 非细胞型微生物：病毒属于此类型微生物。 l 微生物的特点：l 分布广，种类多（10万多种）l 生长旺，繁殖快l 适应性强，易变异l 代谢强，转化快七、 微生物检验基本手段和准备工作l 显微技术l 普通光学显微镜的结构和基本原理： 结构：光学显微镜是由光学放大系统和机械装置两部分组成。l 普通显微镜的使用方法 低倍镜观察：先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到
15、标本，再用细调对准焦距进行观察。 高倍镜观察：低倍镜对准焦点后，转换到高倍镜基本上也对准焦点，只要稍微转动微调即可。 油浸镜观察：油浸镜的工作距离很小，所以要防止载皮片和物镜上的透镜损坏。使用时，一般是经低倍、高倍到油浸镜。当高倍物镜对准标本后，再加油浸镜观察。载玻片上加油以后，将油浸镜下移到油滴中，到停止下降为止，然后用微调向上调准焦点。l 普通显微镜的保养观察完后，移去观察的载玻片标本。用过油浸镜的，应先用擦镜纸将镜头上的油擦去，再用擦镜纸蘸着二甲苯擦拭23次，最后再用擦镜纸将二甲苯擦去。转动物镜转换器，放在低倍镜的位置。将镜身向下降到最低位置，调节好镜台上标本移动器的位置，罩上防尘套。l
16、 染色技术除了观察活体微生物细胞的运动性和直接计算菌数外，绝大多数情况下都必须经过染色后，才能在显微镜下进行观察。 革兰氏染色法： 细菌先经碱性染料结晶紫染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性番红或石炭酸复红等进行复染。阳性菌仍带蓝紫色，阴性菌则被染上红色。 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤l 灭菌和消毒 消毒和灭菌两个词在实际使用中常被混用，其实它们的含义是有所不同的。消毒是指应用消毒剂等方法杀灭物体表面和内部
17、的病原菌营养体的方法；灭菌是指用物理和化学方法杀死物体表面和内部的所有微生物，使之呈无菌状态。l 物理方法 干热灭菌法：包括灼烧灭菌法和干热空气灭菌法,干热空气灭菌法是实验室中常用的一种方法，即把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温至160，恒温2小时即可。此法适用于玻璃器皿、金属用具等的灭菌。 湿热灭菌法: 在同样的温度下，湿热灭菌的效果比干热灭菌好，这是因为高温水蒸汽对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性而迅速死亡。 加压蒸汽灭菌法：这是发酵工业、医疗保健、食品检测和微生物学实验室中最常用的一种灭菌方法。它适用于各种耐热、体积大的培养基的灭菌，也适用于玻璃器皿、工作服等物品的灭菌。在加压
18、蒸汽灭菌中，要引起注意的一个问题是，在恒压之前，一定要排尽灭菌锅中的冷空气，否则表上的蒸汽压与蒸汽温度之间不具对应关系，这样会大大降低灭菌效果。l 化学方法一般化学药剂无法杀死所有的微生物，而只能杀死其中的病原微生物培养基制备在实验室中配制的适合微生物生长繁殖或累积代谢产物的任何营养基质，都叫做培养基(Media)。根据某种标准，将种类繁多的培养基划分为若干类型。根据培养基的物理状态来区分，可以分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。八、 微生物检样的采集1样品原则根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、微生物的危害程度等确定采样方案。应采用随机原则进行采样，确保所采集的样品具有代表性。采样
19、过程遵循无菌操作程序，防止一切可能的外来污染。样品在保存和运输的过程中，应该采取必要的措施防止样品中原有微生物的数量变化，保持样品的原有状态。2采样方案分为二级和三级采样方案。二级采样方案设有、和值，三级采样方案设有、和值。：同一批次产品应采集的样品件数；：最大可允许超出值的样品数；：微生物指标可接受水平的限量值；：微生物指标的最高安全限量值。注：按照二级采样方案设定的指标，在个样品中，允许有个样品其相应微生物指标检验值大于m。注2：按照三级采样方案设定的指标，在n个样品中，允许全部样品中相应微生物指标检验值小于或等于m值；允许有c个样品其相应微生物指标检验值在m值和M值之间；不允许有样品相应
20、微生物指标检验值大于M值。九、 食品微生物学常规检验技术关于GB 4789.1-2010食品微生物学检验 总则的新增的描述:与GB/T4789.1-2003相比新国标GB4789.1-2010总则增加了微生物实验室的基本要求，包括环境、人员、设备要求：病源菌应在二级安全实验室内进行；检验人员应具有相应的教育、微生物专业培训经历，具备相应的资质；实验设备应有日常性监控记录和使用记录；实验室应定期对实验人员进行技术考核和人员比对。菌落总数测定检验方法参见GB4789.2-2010食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定菌落总数的概念是什么？ 菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件
21、、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，36培养48h，能在PCA琼脂平板上生长的细菌菌落总数。菌落总数能不能代表所有细菌总数？ 由于菌落总数培养的条件（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）决定，厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数。为什么检测微生物要注意无菌操作？它包括哪些方面？ 操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用75%乙醇在包装开口处
22、擦拭后取样。操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。超净工作台的空气洁净度标准要求达到百级标准，即琼脂平板在工作台暴露30分钟，每个平板不得超过1个菌落。检测固体样品时，为什么取样时不应集中一点，宜多采几个部位？ 固体样品必须经过多点取样，才能使取样有代表性，使实验结果更接近真实值。为什么倾注培养基不宜过多或过少？ 倾注培养基的量规定不一，一般以15mL较为适宜，平板过厚可影响观察，太薄又易于干裂。针对不同的稀释度，怎样计算菌落总数？ 计数时应选取菌落数在30300之间的平板。若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每
23、克（毫升）中菌落总数结果。若有两个连续稀释度在适宜计数范围内时，只计数在30300个菌落数的平板，按如下公式计算：N=C/（n1+0.1 n2）dN 样品中菌落数C 平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和n1 适宜范围菌落数的第一稀释度（低）平板个数n2 适宜范围菌落数的第二稀释度（高）平板个数d 稀释因子（第一稀释度）若所有稀释度的平板上菌落数均大于300，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。若所有稀释度的平板菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1
24、乘以最低稀释倍数计算。若所有稀释度的平板菌落数均不在30300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。倾注用培养基为什么温度不能太高？ 倾注用培养基应在46水浴内保温，温度太高的培养基会导致微生物死亡，影响实验结果。当平板上有链状菌落或片状菌落生长时，应怎样计数？ 当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。如有片状菌落生长，该平板一般不宜采用，如片状菌落不到平板一半，而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2
25、代表全平板的菌落数。菌落数应怎样报告？ 菌落数在100以内时，按“四舍五入”方式修约，采用两位有效数字报告。大于或等于100时，前第3位数字采用“四舍五入”方式修约后，取前2位数字，后面用0代替位数来表示结果；也可用10的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”方式修约，采用两位有效数字。若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。l 大肠菌群测定检测标准参见：GB 4789.3-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数第一法 大肠菌群MPN计数1.样品的稀释固体和半固体样品：称取25g样品，放入盛有225 ml磷酸盐缓冲液或生理
26、盐水的无菌均质杯内，8000r/min10000 r/min均质1min2 min，或放入盛有225 ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min2 min，制成1：10的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品，置盛有225 ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。样品匀液的pH值应在6.57.5之间，必要时分别用1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸调节。用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入9 ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及
27、稀释液面），振摇试管或换用1支1ml无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀液，每递增稀释一次，换用一支1ml无菌吸管或吸头，从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min。2.初发酵试验每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤，每管接种1ml（如接种量超过1ml，则用双料LST肉汤），361培养24h2h，观察倒管内是否有气泡产生，如未产气则继续培养至48h2h。记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。未产气者为大肠菌群
28、阴性，产气者则进行复发酵试验。3.复发酵试验用接种环从所有48h2h内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物一环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤管中，361培养48h2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。4.大肠菌群最可能数的报告根据大肠菌群阳性管数，检索MPN表，报告每克（或毫升）样品中大肠菌群的MPN值。第二法 大肠菌群平板计数1.样品的稀释2 平板计数选取2个3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两个无菌平皿，每皿1ml，同时分别取1ml生理盐水加入两个无菌平皿做空白对照。及时将15ml20ml冷至46的结晶紫中性红胆盐琼脂约倾注于每个平皿中，小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝
29、固后，再加3ml4mlVRBA覆盖平板表层，翻转平板，置于361培养18h24h。3平板菌落数的选择选取菌落数在15150之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。4 证实试验从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，361培养24h48h，观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。5 大肠菌群平板计数的报告经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以8.3中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每克（或毫升）样品中大肠菌群。例：10-4样品稀释液1ml，在
30、VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100610104g（ml）=6.0105CFUg（ml）。l 霉菌和酵母菌及其检验l 检测标准参见：GB4789.15-2010，食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数l 霉菌和酵母菌落的形态区别？ 酵母菌是真菌中的一大类，通常是单细胞，呈圆形,卵圆形、腊肠形或杆状。 霉菌也是真菌，能够形成疏松的绒毛状的菌丝体的真菌称为霉菌。l 在霉菌和酵母计数中，主要使用哪些培养基？ 可以使用马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基（PDA）、孟加拉红（虎红）培养基l 霉菌及酵母菌落计数及报告应
31、注意哪几点？选取菌落数10-150之间的平板进行计数。一个稀释度使用两个平板，取两个平板菌落数的平均值，乘以稀释倍数报告。l 为什么霉菌及酵母的培养温度和检测菌落总数的培养温度不同？大多数霉菌和酵母在2530的情况下生长良好，因此培养温度28，而大多数细菌在36的情况下生长良好，因此培养温度3537。l 耐热芽孢菌的检验l 样品准备 在无菌操作条件下，将10mL室温状态下的待检样品加入一个灭菌试管中，盖好棉塞。 在同直径的试管中加入10mL同样室温状态下的水，并插入温度计。 将两试管同时放入100水浴中保温。当水中的温度达到100时开始计时。 计时达10分钟后，迅速将样品管取出，置于常温水中迅
32、速降温至室温。l 培养基准备 检查预先经过灭菌处理的锰盐营养琼脂培养基是否处于正常。（每1000mL营养琼脂加入无菌硫酸锰水溶液1mL。100mL蒸镏水溶解3.08g硫酸锰。） 将灭菌培养基加热融化后，在46水浴中保温用。l 接种培养 在无菌操作条件下，在一个灭菌平皿内倾入15mL锰盐营养琼脂培养基，并暴露至接种过程结束，标记后以作为环境对照样品。 在无菌操作条件下，用1mL的灭菌吸管移取1mL选定的样品稀释液或样品原样至灭菌平皿内。 同上对同一样品重复操作。即每个选定的样品稀释度做两个平皿。 按以上步骤，以1mL毫升无菌生理盐水作为空白操作对照。 在无菌操作条件下，将约15mL锰盐营养琼脂培
33、养基倾入样品平皿中，将平皿置于操作台面上轻轻转动，使样品和培养基混匀。 待琼脂凝固后，将平皿翻转，即保持有标记和培养基的一面向上。将所有平皿（包括空白和环境对照）置于551的恒温培养箱内，保温48小时。l 计数及报告 关于稀释倍数的选择可参考细菌菌落总数测定。l 芽孢总数测定的检验l 样品准备 在无菌操作条件下，将10mL室温状态下的待检样品加入一个灭菌试管中，盖好棉塞。 在同直径的试管中加入10mL同样室温状态下的水，并插入温度计。 将两支试管同时放入80水浴中保温，当水中的温度达到80时开始计时。 计时10分钟后，迅速将样品管取出，置于常温水中迅速降温至室温。l 培养基准备 检查预先经过灭
34、菌处理的锰盐营养琼脂（每1000mL营养琼脂加入无菌硫酸锰水溶液1mL。100mL蒸镏水溶解3.08g硫酸锰。）是否处于正常。l 接种培养 在无菌操作条件下，在一个灭菌平皿内倾入15mL锰盐营养琼脂培养基，并暴露至接种过程结束，标记后以作为环境对照样品。 在无菌操作条件下，用1mL的灭菌吸管移取1mL选定的样品稀释液或样品原样至灭菌平皿内。 同上对同一样品重复操作。即每个选定的样品稀释度做两个平皿。 按上述步骤，以1mL无菌生理盐水作为空白操作对照。 在无菌操作条件下，将约15mL锰盐营养琼脂培养基倾入样品平皿中，将平皿置于操作台面上轻轻转动，使样品和培养基混合均匀。 待琼脂凝固后，将平皿翻转
35、，即保持有标记和培养基的一面向上。 将所有平皿（包括空白和环境对照）置于361的恒温培养48小时。l 什么叫商业无菌检验罐头类食品经适度的热杀菌以后，不含有致病的微生物，也不含有在通常温度下能在其中繁殖的非致病性微生物，这种状态称作商业无菌。十、 无菌间、实验室生物安全防护规则l 无菌室内定期消毒灭菌：可以用喷洒3-5%石炭酸溶液并用2-3%来苏水擦洗桌面、凳子，用过氧化氢喷雾或熏蒸的方法空间消毒。l 无菌室内无菌状况定期检测：灭菌后的接种室内桌上放一套培养基平皿，暴露30分钟，盖上，37培养48小时，100级洁净区每个平皿的菌落不得超过1个菌落，10000级洁净区平均不得超过3个菌落，否则需
36、延长照射时间或加强其它措施。l 无菌室地面、台面、其它表面每日擦拭1次。超净台每日用75%酒精擦拭超净台消毒，每次使用前准备好物品，将超净台紫外灭菌30分钟后方可使用。l 从室外带入无菌室内的所有实验用物品要预先消毒。无菌操作前75%酒精消毒手掌、手背，进入无菌室人员需更换无菌衣、鞋，实验中需戴口罩、无菌帽，实验中不能聊天、喝饮料和做其他无关事务。无菌衣、鞋需定期消毒或用紫外灭菌。整个操作严格执行无菌操作。 l 所有准备进入无菌室工作的人员必需首先了解微生物培养的基本要求和操作规范，并进行必要的培训。在将进行传染性材料研究前，首先了解该微生物的传染特性、操作的注意点、防护措施和试验后的消毒处理
37、程序以及紧急情况发生时的应对措施。l 吸取菌液时，须用吸耳球或滴管吸取，不得直接用口接触吸管。l 接种针使用前后，必须用火焰灼烧灭菌，冷却后方可接种培养物。l 每次操作过程中，应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。l 灭菌后物品放在指定位置，注明灭菌日期，高压灭菌物品可存放7-14天，过期不能再用，需重新包装灭菌。 l 对待检样品和已检样品应标示区分。禁止交叉乱放，造成可能的污染。l 实验工作台应每日清理，若有污染发生应立即进行消毒；所有设备在使用后均必须及时清理和处理，以保持无污染状态。垃圾带出无菌室。l 具有传染性的毒种、菌种和标本必须保存在专用冰箱内，并由专人保管。l 采用过氧化氢溶液对小空间进行气雾熏蒸同样有效，但需要专门的蒸汽发生设备。