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1、如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流膜片钳之仪器操作与维护篇【精品文档】第 10 页膜片钳之仪器操作与维护篇1、电极一旦拉制成功后，其尖端必须作进一步的处理。目的之一是为了减小电极内部与溶液之间的电容，即在电极末梢前数微米处，涂敷一层疏水材料，如硅酮树脂（Sylgard）。这种物质能够防止液膜爬上电极。另一目的是为了对电极尖端作优化处理，如同热抛光的方法使电极尖端光滑、周围均匀，以提高实验过程中的封接成功率。2、关于电极的问题a. 洁净的电极是封接的关键。电极需要在使用前拉制完成放在密闭容器中，通常在12小时内用掉比较好；b. 内液（确切的说是电极液）需要过滤；c. 在电极入水之前可以加一
2、个正压，可以吹开电极尖端的液体及灰尘；d. 如果不用灌流的话，最好bath solution也要过滤。e、电极拉制成功以后，常置于一有盖的容器内，2-3小时内必须使用，电极使用前要进行充灌。在充灌前，电极内液要用0.2um的滤膜或滤纸进行过滤。利用玻璃管的虹吸作用，溶液可从电极尖端吸入，也可利用5ml注射器在尾端加负压以实现充灌，随后电极从尾端充灌。电极内液不能漏到夹持器，会使其内表面变湿形成薄膜从而产生热噪声，在充灌时，电极内出现的气泡可以通过轻敲电极而消失。3、降低噪声的关键是地线和屏蔽，第一地线接地要好；第二要注意将一些容易产生噪声的设备屏蔽好，比如显微镜灯光的电源、电动微超的马达、监视
3、和记录的电脑以及一些可能产生噪声的电源线，总之你可以用排除法一一试验，肯定会降低噪声的，一般降低到几个pA/fA级即可。另外，你的负压也可以用一个“U”形管通过3通管加上。我认为屏蔽很重要哦，以前我在实验中，常遇到电极入水后方波有50HZ干扰，有时还跳动，很是心烦，想了很多办法就是去不掉，包括接地线，镀银丝、参比电极，清洗Holder等等，甚至怀疑仪器有问题，感到有些绝望了！后来发现灌流时干扰明显，把灌流装置控制电源搬到法拉第笼子外，一切就ok了！而且发现只要有电源线进入屏蔽笼，即使没有通电，也有交流干扰，所以所有进入屏蔽笼的电源线都应该用屏蔽线（而不是一般电线）。我体会到在膜片钳实验中一定要
4、“消灭”各种干扰，这样结果才可靠，而消除干扰靠什么？It is 屏蔽！你可以用做铁笼子的铁丝网罩住显微镜电源，若没有屏蔽线，可以用保鲜用的锡纸包裹导线，只要是pA/fA就可以做了！4、关于干扰的问题我有以下几点看法：a、屏蔽室是必要的，尽管有时候看起来作用不大，但是如果外界的电磁干扰很大，这时候它的作用就显示出来了。b、避免干扰的一个原则就是要将屏蔽室内外的各个可能产生电磁干扰的仪器一定要接地，有时候一个仪器有好几个零部件，有些部件之间是绝缘的，此时就要将绝缘的部分分别都接地。c、同一个部件不要重复接地，有时候也可能产生干扰的。d、关于显微镜的问题：屏蔽到是没有必要，只要两根线就解决了1）将显
5、微镜的灯罩打开，在内部的螺丝上接出一根线2）在显微镜的臂上的螺丝上接一根线e、此外，浴槽电极与灌流液一定要接触良好，否则的话也会出现干扰的，有时候开始还挺好，几乎没有干扰，但是在记录的过程中自己什么也没有动，就突然出现干扰了，很大的一部分原因就在此。这个问题曾经也是困扰了我好长时间，体会很深的。f、接地线到是没有特殊的要求，只要一般的电线就可以了g、不要让液体流出来（包括灌流和引流的液体），淌到实验台上或是地面上，这也是产生干扰的一个重要的原因。h、我也很赞成开心果果的意见，实验台和实验仪器一定要整齐有序，恐怕每个实验室也都是这样要求的吧5、屏蔽线就是用铜网屏蔽电源线，电子市场有卖的。一般用两
6、相线，外面包有一层铜网，需要注意的是：（1）电线规格，我们用的电线直径0.75，这对220V足够了，太细满足不了仪器负荷。（2）屏蔽线的连接，一端接插头的零线，另一端接仪器的外壳（零线），且插座零线要接地（不能虚设）。（3）电线接头处要连接紧密，并用热缩管套牢。 6、只要灌流装置电源线没有很好屏蔽，即使拔掉插头，仍然有干扰，不信你试着在有干扰时把灌流装置搬离法拉第笼子，看看有什么效果？这种方法就叫排除法（把法拉第笼里的有可能产生干扰的东西一件一件地搬出来，逐渐排除）。浴槽电极与灌流液一定要接触良好，否则的话也会出现干扰的，我也遇到过这种情况，建议大家在实验前把浴槽电极固定好。7、我认识美国KA
7、NSAS大学 的一位做膜片钳的教授，他说他的实验室就不用屏蔽，已经运转了十多年了，也没有什么问题。他建议我们也不要用屏蔽，我不知道这样做是否可行，或者国外的实验室本身就与国内不同，他们能不用屏蔽，但我们就不行。说实话，我也认为没有屏蔽怎么可能，但的确开始的时候是没有噪音干扰的，后来也出现了一些噪音，我想屏蔽的作用应该是不可忽视的！8、硫酸镁和氯化钙其实都是ACSF中的成分，只是我们先把他们配成水溶液，因为如果以固体形式和ACSF中的其他成分一起配制，会产生碳酸镁和碳酸钙沉淀。9、前两天在安装HOLDER的时候，把银丝弄断了，我去外面的金银商店做了一根，好象比以前的粗一些，弹性不是很好，镀银以后
8、装上去使用，想问问各位，这样是不是回对实验本身产生影响呢？膜片钳的每一部分最好都是厂家的原装产品，尽管银丝是很普通的东西，但在作工和规格上应该还是有差异的。你可以向厂家说明一下情况，向他们索要或购买比较好。10、玻璃微电极：常用尖端0.5-5m，向细胞内插入时，需小于0.5m（细胞直径的1/101/100），且尖端的倾斜度应相当缓和，一般微电极可分为金属微电极和玻璃微电极两类。金属微电极，现多用镀铂钨丝电极（platinum-plated tungsten electrode），在钨丝上镀铂，可极大改善电极的电学特性，噪声可大大降低，加之机械强度大，适合长期体外记录（par D， Gaudre
9、au H. Projection cells and interneurons of the lateral and basolateral amygdala: distinct firing patterns and differential relation to the thera and delta rhythms in conscious cats. J Neursci, 1996,16(10):3334-3350现要也常用镀银碳纤维电极。玻璃微电极记录易受机械位移的影响，加之尖端的电解质会漏出或堵塞，不适合半小时以上的长时间记录，玻璃微电极可分单管和多管微电极。11、毛坯管在国外多
10、用Pyrex管，国内多用GG-17和95料玻管。细胞外记录多采用外径1.5-2mm玻璃，细胞内记录则采用外径1mm细玻管，内外径之比约为2：3或5：6，长6-8cm。拉制前必须经过清洁处理。玻璃毛坯管分为两类：软玻璃（苏打玻璃、电石玻璃）和硬玻璃（硼酸玻璃、铝硅玻璃、石英玻璃）。软玻璃熔点低，易于抛光处理，拉制成功后，有1-2M的电阻，这种电极常用于作全细胞记录，其串联电阻或说得确切一点，噪声高低是一个限制因素。软玻璃较大的介电松弛特性，有时也产生电容瞬态分量，从而影响电容补偿的效果。硬质玻璃微电极拉制成具有较窄的末梢，因而具有较高的电阻。硬质玻璃具有较好的噪声和介电松弛特性；介电损失参数，这
11、个参数描述玻璃的交流电导率。软玻璃在1KHZ的电导率，足以构成膜片记录中的主要热噪声源。硅硼和铝硅玻璃的介质损失低，是低噪声记录的理想电极玻璃。石英玻璃特别适用于作低噪声记录，但需要激光源进行拉制。12、清洁液：用等量的（250ml）王水（可反复应用）。一般毛坯管捆成把放入清洁液中1-2h，取出自来水冲洗20-30min，再放入无水酒精中洗 涤，再放入盛满蒸馏水烧杯中加热煮沸10min，倒去蒸馏水，再换新蒸馏水反复3次，再放入烤箱中烤干，备用，切不可用市售的洗涤剂，以防降低电极充灌液的表面张力而影响冲灌。13、充灌液常用3mol/L KCl，为避免Cl-扩散，也可用2mol/L醋酸钾或柠檬酸钾
12、充灌，也有人用0.5-1mol/L NaCl（低浓度）充灌可降低噪音。细胞外记录时，最后再用3-4mol/L NaCl +2%旁胺天蓝溶液定位。在膜片钳中还常加钙螯合剂，如EGTA。阻抗与不同组织相关。注：微电极中高浓度充灌液易蒸发，造成电极回路的开路，因此常在微电极插入Ag-AgCl丝或铂金丝后，在微电极尾部开口处涂上一层凡士林，防止水分蒸发。离体标本的灌流注，如ACSF。其中缓冲液成分有两种，一是重碳酸盐（bicarbonate）：温度低（4），配方有利于降低组织兴奋性。二是磷酸盐缓冲液和HEPES缓冲液：其优点是接近于 人体环境。各种缓冲液一般都先配母液，临用前一天，或临用前稀释。14、
13、电生理实验中噪声和干扰的形成和排除。（一）来源。1干扰信号与生物电生理信号的鉴别。准确区分生物电信号与干扰的伪迹是电生理实验的先决条件。2来源。主要有三个方面：其一。物理性干扰。1）静电和电磁的干扰：实验室附近高压电，室内日光灯可产生50Hz的静电干扰，尤其是交流电，尤其是50Hz频率干扰最大（电子设备为50Hz）。其特点是幅度大，波形规则。2）噪声干扰：电子元件本身产生杂乱无章电压和电流称噪声，一般与放大器内部元件的质量与性能有关。其二。接地不良。1）地线电阻应小。2）仪器故障。产生漏电电流，在地线上形成电位差，产生干扰。3）地线行走过程中打圈，形成线圈，易接受电场和磁场的干扰。4）各仪器设
14、备应采用一点接地的方式，若采用多点接地，形成大地回路，也会引起干扰。5）地线过长与电源线形成交流环路。6）误用市电三孔中性线作为大地线（中性线上有4-5A电流）。其三。生理性干扰。1）大脑电活动时，眨眼、眼球运动均对脑电具有干扰作用。2）实验中环境温度过低，动物寒战、抖动，引起肌电的发放而干扰记录，或因呼吸运动引起记录部位机械位移引起干扰信号。3）心电干扰，频率与心电一致。（二）排除。1物理性干扰。1）屏蔽法：用于低频电和静电干扰，屏蔽线分布电容较大，线与线之间不可平行排列，更不可为了美观而将多线扎在一起，这会加大分布电容，易偶合高频干扰噪声。2）远离法。3）改变位置法。依电流方向相反，产生反
15、向磁场的原理，改变各个仪器的位置或放大器输入的方位，会使干扰磁场抵消，微电极放大器探头阻抗高，易引入干扰，实验前可反复调整其方向和位置。4）微电极记录时尽量减少微电极本身的阻抗，减少输入阻抗及干扰信号在这个阻抗上形成干扰电压降，微电极到探头的连线5cm。5）用监听器监听噪声，以便及时排除。2仪器质量，尽量改进。3接地不良。地线应尽量短粗，不能与电源线平行或打圈，不 要接在电源线的中性线 上，地线单独埋设，埋置处应较潮湿，附近无大型变压电动机，并在坑内加些食盐。4检查各仪器 是否漏电。5慢生物电变化时用乏极化电极，实验对象宜安静，勿受振动。15、细胞内微电极记录多用幼年离体标本，其原因：1）幼年
16、动物骨骼骨化不完全，结缔组织少，神经组织易于分离，标本耐缺氧能力强，有的标本可存活数小时至数天，但标本也可能发育不完全，如背根和脑干到脊髓的投射纤维要到三周动物才完全。神经纤维髓鞘化不全，其药理作用与成年动物也不同。从实验角度上讲，脊髓背腹根短，不利于电生理刺激记录。小鼠一般应小于15g，制备标本才 有可能成功，而这样小鼠背腹根神经节不利于电生理实验。最适合的动物是金黄地鼠（hamster），介于大小鼠之间，制备标本活性很好，可能与其冬眠习性有关，而且其脊髓背腹根长达20-25mm，利于电生理记录。动物选择仍依实验而定，同一标本，不同中枢结构对缺氧耐受力也不同。金黄地鼠，若观察脊髓背角神经元活
17、动，可用150-160g体重的鼠均可，但要研究腹角神经元，则体重不宜超过30g。16、膜片钳实验封接过程中，防震台非常重要，电极抖动主要与台子有关，而与橡皮管关系不大。橡皮管的长度与粗细和封接的难易有较大关系，应该是越近holder时，管径越细，且管子不应该太长。如果太长，给的负压就更易分散（相当于表面积大，单位负压就很小）。我们实验室用的是一种硅胶管，从老师德国带回来的，不过我见过其它实验室用一般的硅胶管做DRG细胞，也挺好的。17、我们这个软件是华中随机器送的呀。每次电压钳转成电流钳都需要面板和软件一起调，protocol的holding电压要手动调节，加了一个searcih模式，还好，省
18、着每次用offset找基线了。不过，我感觉最大的优点是干扰好像和axon差不多，平时好像还要好一点。pc2c刚拿到手，用的还不熟。只是觉得没有表显示电流很不方便。电压表始终显示holding电压，与设置的电压一致，意义不大呀。18、我想做膜片钳实验，要买试剂不知道西安哪个公司的好，还便宜，另外我要买CsOH和玻璃微电极，西安有吗？怎么查不到呢？ CsOH最好买Sigma公司的，可以从华美等公司订，但价格确实比较高，1200/50g。玻璃电极一般要到上海买，可以从网络上查找，然后邮购。19、CsOH与CsCl均购自美国Sigma公司，其代码是多少？不好意思，查了半日也没查到，而且发现sigma的
19、同一个产品常有好几个代码，由于以前实验室没做过这方面的工作，而且本人也没做过patch ，所以总担心买到的试剂不好用。同一个药，不同的代码有什么区别吗？ FW 代码 包装CsCl氯化铯Sigma168.4C-301150gCsOH氢氧化铯Sigma167.9C-851850g 一般不同的代码是适用于不同的纯度，或用于不同的实验如：细胞培养等。我实验中用的Sigma代码：CsOH C8518 50g FW 167.9 、CsCl C3139 FW 168.4、BaCl2 B075020、请问,各位,我们用的200的放大器，为什么总是超载呢？是软件设置的问题，还是硬件的问题我用的也是200B，以前
20、我也碰到过overload的情况，提供几个方面的原因供你参考：1）.保证电极拉制质量，没有断头、过粗现象。2）.holder和参比电极的银丝要镀得均匀，时间过久则需要重新镀银。3）.接地良好。4）.细胞外液、电极内液配制合理，渗透压、PH保证在正常范围内，并用滤膜过滤去除杂质细菌。5）.入水后适当调节液接电位（我的offset值就调在45之间），如果是这方面原因，那么肯定会恢复正常的。21、请教战友：做脑片膜片钳暂时没有振动切片机，可以用别的切片机替代吗？或是有什么救急的办法？另外，请提供几个常用的切片机以供选择。1），对大部分脑组织来说，薄片标本必须用振动切片机来切。但是也有例外，比如海马脑
21、片可以用保险刀片手工切取。不知道你需要的标本部位；2），振动切片机国产的有浙江象山牌，10年前很多实验室都用这个，性能基本可以。但是不知道现在厂家倒闭了没有。因为现在绝大部分实验室用的都是进口的；3），进口振动切片机产品主要有：美国？公司；日本京都的堂坂株式会社（DTK-1500）和德国莱卡公司产品等；4），振动切片机是成功制备标本的关键设备，对其振动幅度，前进速度，摇摆幅度等都有严格的要求，基本没有救急的替代办法。22、实验室买了一套脑片膜片钳设备，主要的东东都有了，因为没有经验，不知是否缺什么外围设备（有时虽不贵却很重要），比如振动切片机，现把主要设备贴出来，请各位战友指点。1）.膜片钳放
22、大器EPC-10 Double2）.微操纵器PCS-54003）.微电极控制仪4）.PCS-5000 Steep/Shallow Headstage Bracket5）.脑片灌流设备6）. 脑片移动平台7）.IR1000红外CCD8）.BX51WI固定载物台正立显微镜9）.电极拉制仪、抛光仪10）.防震台、屏蔽网23、.我看了几个单位的PATCH ,他们都没有要外加的刺激器和示波器.仅有PATCH CLAMP(AXONPATCH200B和A/D(1322A)转换卡.我们想PATCH CLAMP里有方波刺激,电脑显示屏能代替示波器.于是我们也参照他们的线路联接.结果就是不能正常地测电阻.谁能告诉
23、我们AXONPATCH200B和A/D1322转换器正确的连接线路吗?1, 由PATCH CLAMP 和A/D组成的如何连接2. 由PATCH CLAMP 和A/D以及示波器组成的连线.1），要不要刺激器，取决于实验设计。如果只需要通过电极细胞内刺激，当然不需要刺激器。而如果需要在细胞外产生刺激（例如刺激突触前递质分泌），则非用不可；2），示波器显示变化比电脑快，有的实验室还用。这是各人习惯问题，有人说用示波器“太土”，是一种不了解情况的说法；3），接线方法有二：（1）彻底搞清法（费时，但对今后有好处）：仔细对照软件使用指南，上面有详细说明；（2）囫囵吞枣法（省事，立即可用）：照猫画虎，看别人
24、的连接方法，然后拷贝别人的程序，保证可以运行。是为抛砖引玉。24、PATCH实验中,用MODEL CELL 测试仪器时,CONFIGURE有三种,分别是BATH,CELL,PATCH三种状态,它们分别用MEMBRANE TEST AND SEAL TEST中的那种形式测试,AND WHY? 测试后达不到规定的大小10M 或10G,这又是何因所致呢?他们是模拟试验过程用 SEAL TEST 测定，检验机器状态。按说明书设置，仍不能达正常值，可以联系axon公司他们要序列号的25、我想问一下有经验的各位老师,电极拉制时想让电极尖端后面的肚子胖些,应该怎样调整参数,两步拉制仪,当尖端大小合适时是不是
25、应该把拉力增大才会让它胖起来呢 ? 把第一步拉的长度调短一些，拉力增大一些。如果口径大了，再把第二步温度调高些。26、做细胞贴附式单通道记录电极一定要抛光、一定要用硬玻璃吗另外硅酮树脂哪里买。谢谢据我所知，四军医大生理高天明（长江学者）那里作贴附式单通道，电极不抛光，也不涂硅酮树脂。但单通道一般用硬玻璃，因为软质玻璃电导较高，噪声比硬质玻璃大，而单通道电流小，最重要的是干扰要小。 27、电极老是堵，有脏东西，很难完全避免，大家有什么好办法吗？原因大概有两点：1） 浴液太脏；2）.电极液有未溶药物颗粒解决办法：1） 浴液太脏一般由于将细胞悬液加入浴槽时，最好先将细胞悬液离心去除消化过程中产生的其
26、它组织碎片；如果采用细胞铺片，最好预先用浴液将玻片漂一下，再放入浴槽。建议在电极入水前加12cm水柱的正压，让电极内的电极液有一种要流出的趋势，可以防止 浴液中的异物堵住电极尖端，细胞封接时再放掉正压。2）.可以在电极液灌注时在注射器前端加用过滤器将电极液中未溶药物颗粒滤掉。如果做全细胞膜片钳时电极液中需加能量物质，则最好是将不含能量电极液先过滤后再加能量物质，防止过滤时能量物质丢失。 28、请问电极在溶液中通电时，电极的表面产生气泡，如何消除这些气泡？我用的是Ag/Agcl电极。当我把电极放在溶液中时，一通电就会产生气泡，又没有好的试剂或者方法解除这个问题呢？是不是一定要用膜片钳才可以避免这
27、个问题的如果用的Ag/AgCl电极好的话，不应该产生气泡。是你的Ag电极表面的AgCl镀层不完整了，所以通电时，电解H2O，产生气体。把电极用砂纸打磨干净，重新镀AgCl。 29、我使用SUTTER公司的P-97拉制仪,南京六合生产的外径是1.6mm的玻璃毛坯管来拉制玻璃微电极,拉制程序如下：1）heat=RAMP+20 pull=15 velocity=75 time=1502）heat=RAMP+20 pull=15 velocity=75 time=1503）heat=RAMP pull=20 velocity=80 time=100但是玻璃微电极的电阻只有0.2M欧。我想拉制12M欧的
28、玻璃微电极进行细胞外记录，请教各位高手如何设置P-97拉制仪的拉制程序？ 你好，你所使用的程序是用来拉微电极(Microelectrode)的，不是来拉膜片钳电极的。拉膜片钳电极的时候，要把Pull=0，而后调节velocity，一般80左右，loop是1次。一般1次就可以了。但是sutter的说明书上说要3次的最好，照说明书调就可以了。我用heat=RAMP+15 pull=0 velocity=80 time=200，一般都在3-5之间。 30、哪位知道如何让电极镀氯化银？买一节5号电池,找一个培养皿,放一些NaCl溶液,把电极用一根导线连接到电池的正极,另一根导线连接电池的负极,将两根导
29、线的另一端同时放入NaCl溶液中,1-2分钟后,电机的尖端变黑就可以了 你用砂纸把银丝打磨一下再试。负极用一个铂金丝或干电池中的碳棒。我用碳棒效果很好的，用旧电池的原因是为了减小电流，这样镀的电极不易脱。电流尽量小，控制在1ma内，可以在电路中串联一个电阻和电流表。31、请问各位师兄，我在上海，要做钙通道，电极内液一定要加GTP吗?Tris碱、CsCl、CsOH、TEA(or TEACl)、4-AP、TTX在上海哪个公司能买到啊，最好是国产的。能不能提供一下联系方式或代理? 一查怎么都是进口的啊。据文献报道，做钙通道时基本都要加能量物质如MgATP,Na2ATP,等，防止出现rundown现象
30、，至于其他的那些试剂除了TTX，我都是选用sigma 公司的，国产的很难查到，查到了还是代理国外的，所以不如直接从sigma定购，估计一个月之内都可以到了。不过TTX倒是可以买国产的，河北水产研究所，200元/支，我一次买了五支，你可以和他们联系一下！ 32、我想使用的是南京六合生产的外径是1.5或1.8mm的玻璃毛坯管来拉制膜片钳电极,但是我试了很久都没有找到合适的拉制程序.有哪位高手使用的是SUTTER公司的P-97拉制仪,或者NARISHIGE公司的PC-10拉制仪,可以告知一下拉制程序怎么设置吗?谢谢!我们使用的是PIP5，程序如下A:1899度，即最高温度B:730度开始，逐渐降低至
31、针尖不断的最低温度 33、我是一名研究生,今年就要毕业了.最近导师布置了个任务,他想建立一个电生理实验室,要做摸片钳实验.要我查找所需仪器.因对电生理不熟.也没有找着合适的方案.马上就要毕业答辩了.时间很紧张.故求助高手帮忙.开展次实验所需的主要仪器、生产厂家、型号及大概价格。哪举办此向技术的学习班。其实你可以找一家代理公司，让他们给推荐，他们会给你一个详细的配置单及价格。我们这儿现有的一套是这样的。HEKA patch clamp ampilifer: EPC 10 doublesutter micromanipulator: MP-285inverted microscope: (哈，我们
32、是国产的。重光xds-1b)olympus ix71(single cell)puller: P-97IsoStation vibration:Newprot还有抛光仪，屏蔽笼。对于脑片膜片钳，需用正置红外显微镜，配震动切片机。 34、电极老是堵，有脏东西，很难完全避免，大家有什么好办法吗？首先，将电极毛坯用浓硝酸和无水乙醇洗干净，用去离子水冲洗干净烘干；再把灌注用的毛细管内外用去离子水洗干净；最后，使用的电极内液用22微米的濾膜过滤后使用。这样一般就可以避免电极内部脏了。 电极堵很常见，只要不影响电极入水电阻的大小，我认为不必要非得一尘不染。还有买来的电极我们只需用甲醇浸泡，不要用任何水冲洗
33、，直接放入50度烘箱中烘烤置干就可。有时做膜片嵌好象觉得任何步骤中的一步有问题，就是导致钳制不好，记不出电流的一个或几个原因，其实我们还是觉得关键在于细胞的状态至高无上。 35、请问！做干细胞向心肌细胞分化实验，想用TTX阻断逐渐分化的干细胞的TTX敏感性钠通道，但如何确定TTX加的量呢？若用膜片钳测不出某个细胞的钠电流，但怎么说明其他细胞也都被阻断了？请购卖日本光电公司的成套产品及监视系统，性能比较稳定、价格大约30万元左右。36、多管电极拉制仪介绍多管电极拉制仪（PV-4型，日本Narishige）为半自动电极拉制仪。需要设定的参数有：l HEATER：加热强度（10-15A）l MORT
34、OR：锁套旋转速度（使电极扭曲）37、三管给药电极制作:选用外径1.5mm，内径0.88mm，长度120mm的带芯玻璃电极毛胚，用胶布将3根捆绑在一起，上端固定于锁套，下端挂重物，调节旋纽（上下，前后，左右）使电极位于加热圈中心点，开电源，调节加热强度和锁套旋转速度，当电极变软后，稍加固定砝码，使电极扭成麻花状，直至断开，迅速下调加热丝，关闭电源。显微镜下观察，各管开口均匀平齐者用于实验。每根玻璃管尖端开口812 m。其中一管用于固定，其余管折出45度角，用于装药液。 38、电极老是堵，有脏东西，很难完全避免，大家有什么好办法吗？有几个方法可以避免,第一是下电极要快,早入液面,不要在空气中停留
35、太久.第二是可以对电极进行抛光处理,效果会好一些.我个人认为,还应该补充最重要的是:1电极内液一定要过滤;2避免在外液中将电极移动寻找细胞,最好先定好细胞,再下电极!3一般一根电极只用一个细胞,如果你接触上但没有封接上,最好做下一个细胞时换电极,因为可能你的尖端已经沾上脏东西了,除非你退出时电极阻抗没有变化;4可能还于你消化细胞有关,尽可能消化细胞干净,避免细胞因消化不净,表面粗糙,不过这样的细胞不但电极容易堵,而且也不易被sealed. 39、各位高手，本实验室刚买的一套设备， 膜片钳放大器是Axopatch 200B，采集卡是 digitizer 1200 ，软件是Axon公司的Pclam
36、p 8.0，请问各位有没有使用相似设备的，能把你们放大器和采集卡interface的线路连接告诉我吗？ 还有，我们的微操纵器是*的液压的，那个架子是怎么安装到显微镜上面去的？我们的显微镜是Olympus的。其实那么多接口，用到的并不多。信号线是使用BNC线将放大器的scaled output连接信号器的 ANALOG IN 任意接口，这是采集信号。将 放大器的 COMMAND INPUT（任意,分别对应于面板上两个旋钮，根据需要连接）连接信号器的 ANALOG OUT 1或2 。HEADSTAGE 接电极HEAD。最好能将放大器上的SIGNAL GROUND 和整台机器的公共接地端连接，抗干扰
37、。放大器连接电脑的接口用DIGITAL BOARD 。其他的就不用了。 40、用NARISHIGE的抛光仪，那么一般离电阻丝多远呢，多长时间，电流大小？玻璃电极抛光在显微抛光仪或其它类似设备上进行时以400-800倍的放大率观查电极尖端。热源通常是铂丝或铂-铱丝，为了防止金属蒸发到玻璃电极上，热丝通常在与玻璃电极靠近的点涂敷玻璃。由于玻璃电极尖端的开口刚好在观察的分辨率水平上，因此你可能看不到电极尖端形状的改变，而仅仅会看到电极尖端略为回缩变暗。如果想知道电极尖端是否被熔化而堵塞了，或者想知道尖端的直径，可以用一只小注射器产生空气压力，通过微电极往甲醇中吹气，观察气泡的状况。经过抛光处理后，玻
38、璃微电极表面变得更加宽阔和光滑。 而在涂敷硅酮树脂时，黏附于电极尖端附近的Sylgard的溶剂也会被抛光加热去除，从而保证封接的顺利进行。抛光时需注意：在靠近加热线圈的位置以较低的温度抛光电极，其电极尖端内径的玻璃面一般会是平行而且较为尖锐。而在离加热线圈较远的位置以较高的温度抛光电极，其电极尖端趋向于变圆且变得较钝。单通道和全细胞记录中应用的电极有所区别，反应在电极的抛光过程中也有所不同，具体如下：单通道记录时：膜片钳电极应接近加热丝，使接近尖端的玻璃层变厚变尖。电极入水电阻较高，容易得到较高阻抗的封接。全细胞记录时：膜片钳电极的玻璃壁应比单通道记录中所用的为细，且尖端较钝为好。尖端较细的电
39、极形成封接后不容易吸破。 41、屏蔽网、微操、防震台以及屏蔽笼内其他设备通过地线集线器连于放大器的SIGNAL GND,另外埋设了一根专用地线，是否要将SIGNAL GND与专用地线相连？SIGNAL GND和仪器的电源地实际是相通的，如果将SIGNAL GND与专用地线相连，是否会导致多点接地，引起环路干扰？正确的接地方法应该怎样接？Axon的200B的SIGNAL GND和仪器的电源地是不相通的。也有些牌子的放大器两者之间提供了一个连接片，连与不连供自己选择。看来，在减低干扰上，专家们也对SIGNAL GND和仪器的电源地是否应该相导通，没有统一意见。请教过一些电学专家，说地线只对50Hz之类的较低频干扰效果较好，而对于高频干扰没什么效果。你可以先比较一下SIGNAL GND与专用地线连与不连时，干扰的情况怎么样。如果连上差别不大，甚至干扰更大（我们实验室就是这样，可能引入了环路干扰），就不必连了。因为很多建筑的电源地是比较马虎的，你还可以不用电源地（电源三相插头的地线不连上），而只用专用地线试一试，看看效果是不是更好。