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1、实验一实验一 大、小鼠的给药、采大、小鼠的给药、采 血、麻醉和解剖血、麻醉和解剖小鼠尾静脉注射小鼠尾静脉注射（给药方法之二）（给药方法之二）n固定器固定小鼠固定器固定小鼠n消毒尾部，扩张血管，左右两侧的静脉消毒尾部，扩张血管，左右两侧的静脉n将尾巴成一个适宜注射的角度，将尾巴成一个适宜注射的角度，1ml注射注射器平行向心方向刺入静脉血管器平行向心方向刺入静脉血管n干棉球压迫止血干棉球压迫止血n注意排除气泡注意排除气泡n注射点由尾部远端注射点由尾部远端尾静脉尾静脉小鼠眼底静脉丛采血小鼠眼底静脉丛采血n一人徒手固定小鼠于桌面上，使眼球充一人徒手固定小鼠于桌面上，使眼球充分向外突出分向外突出n将注射
2、器针头从内眼角位置插入眼球和将注射器针头从内眼角位置插入眼球和眼眶之间，进针约眼眶之间，进针约0.5cm（1ml注射器）注射器）n另一人慢慢抽动针管采血另一人慢慢抽动针管采血n注意要将小鼠固定好，防止其头动注意要将小鼠固定好，防止其头动小鼠麻醉方法小鼠麻醉方法n腹腔麻醉：进针点为右下腹腔，进针角腹腔麻醉：进针点为右下腹腔，进针角度为与身体成度为与身体成4545度，深度约度，深度约1cm1cm。n麻药：麻药：麻醉药为麻醉药为3.5%3.5%水合氯醛，剂量按水合氯醛，剂量按小鼠体重小鼠体重0.1ml/10g0.1ml/10g，20g20g的小鼠为的小鼠为0.2ml0.2ml小鼠心脏采血小鼠心脏采血
3、n右下腹腔麻醉（麻醉药为右下腹腔麻醉（麻醉药为3.5%3.5%水合氯醛水合氯醛，剂，剂量按量按0.1ml/10g)n待其麻醉后，仰卧位固定在解剖板上待其麻醉后，仰卧位固定在解剖板上n胸骨左侧，腋窝平行线下胸骨左侧，腋窝平行线下2-3肋骨间，小鼠心肋骨间，小鼠心搏动最强处斜行刺入（搏动最强处斜行刺入（1ml注射器）注射器）n缓慢抽动针管采血缓慢抽动针管采血n取血量多时采用（同样适用于大鼠）取血量多时采用（同样适用于大鼠）大鼠心脏采血大鼠心脏采血n麻醉：右下腹腔，麻醉药为麻醉：右下腹腔，麻醉药为3 3 3.5%3.5%水合氯醛水合氯醛，剂量按大鼠体重剂量按大鼠体重0.1ml/10g0.1ml/10
4、g，n心脏采血方法同小鼠心脏采血方法同小鼠大鼠心脏采血大鼠心脏采血大体解剖观察及绘图大体解剖观察及绘图 1. . 将将SDSD大鼠用大鼠用3 3 3.5%3.5%水合氯醛水合氯醛腹腔麻醉，按腹腔麻醉，按0.1ml/10g0.1ml/10g体重。体重。2 . 2 . 待大鼠麻醉后，腹部朝上固定于解剖板。待大鼠麻醉后，腹部朝上固定于解剖板。3. 3. 用用10cm10cm剪刀从下腹部向上剪开皮肤，打开剪刀从下腹部向上剪开皮肤，打开腹腔，观察腹腔内脏器，观察大鼠肝脏时特腹腔，观察腹腔内脏器，观察大鼠肝脏时特别注意大鼠无胆囊。别注意大鼠无胆囊。4. 4. 用用14cm14cm剪刀打开胸腔，观察胸腔脏器
5、。剪刀打开胸腔，观察胸腔脏器。5. 5. 根据大体解剖所见，绘图。根据大体解剖所见，绘图。解剖观察解剖观察操作项目操作项目n小鼠：灌胃、尾静脉注射、眼底静小鼠：灌胃、尾静脉注射、眼底静脉丛采血脉丛采血n大鼠：心脏采血大鼠：心脏采血* *、麻醉后解剖观察、麻醉后解剖观察实验二 1.模拟肿瘤（组织块）移植 2.裸鼠与正常小鼠免疫器官的比较实验目的实验目的n了解实验裸小鼠和了解实验裸小鼠和KMKM鼠的胸腔结构鼠的胸腔结构n了解正常的胸腺结构与不增殖胸腺基的形态了解正常的胸腺结构与不增殖胸腺基的形态n掌握正确的胸腺摘除方式掌握正确的胸腺摘除方式n掌握组织块皮下移植的基本技术掌握组织块皮下移植的基本技术
6、实验原理实验原理哺乳动物的胸腺是哺乳动物的胸腺是T T淋巴细胞分化成熟的场所，而淋巴细胞分化成熟的场所，而T T淋巴细胞是参与宿主对异体的组织或细胞排斥的主要淋巴细胞是参与宿主对异体的组织或细胞排斥的主要成分，裸鼠胸腺的原基从第三咽囊起不能发育，因此，成分，裸鼠胸腺的原基从第三咽囊起不能发育，因此，裸鼠囊状很小的胸腺残基保持终身。裸鼠囊状很小的胸腺残基保持终身。胸腺的不增殖导致成熟的胸腺的不增殖导致成熟的T T淋巴细胞数大量减少，其淋巴细胞数大量减少，其结果是裸鼠机体不能排斥同种异体和异种间的组织器结果是裸鼠机体不能排斥同种异体和异种间的组织器官移植。官移植。人类的肿瘤能在裸鼠的体内生长，使裸
7、鼠作为一种人类的肿瘤能在裸鼠的体内生长，使裸鼠作为一种疾病模型的载体，广泛地运用于研究人类移植性肿瘤疾病模型的载体，广泛地运用于研究人类移植性肿瘤生长和转移。生长和转移。影响被移植的动物组织或细胞成活的因素影响被移植的动物组织或细胞成活的因素组织的相容性组织的相容性宿主对移植物的血供宿主对移植物的血供供体组织或细胞的活性供体组织或细胞的活性其他因素其他因素模拟移植物的选择模拟移植物的选择n肾脏组织是哺乳动物中血供较好、活力肾脏组织是哺乳动物中血供较好、活力较强的组织较强的组织实验步骤实验步骤 1 (麻醉解剖小鼠）麻醉解剖小鼠）n分别将裸鼠和分别将裸鼠和KMKM鼠腹腔注射鼠腹腔注射3.5%3.5
8、%水合氯醛，水合氯醛，按按0.1ml/10g0.1ml/10g体重。体重。n待小鼠麻醉后，腹部朝上固定于小鼠固定板待小鼠麻醉后，腹部朝上固定于小鼠固定板上。上。n以以3%3%碘酒棉球和碘酒棉球和75%75%酒精棉球进行皮肤消毒；酒精棉球进行皮肤消毒；同时，对裸鼠腋部进行消毒。同时，对裸鼠腋部进行消毒。n用直头剪刀于用直头剪刀于KMKM小鼠生殖口上端切一小口，小鼠生殖口上端切一小口，沿腹部两侧作弧型切开，直至胸膈肌根部。沿腹部两侧作弧型切开，直至胸膈肌根部。实验步骤实验步骤 2(观察胸腺观察胸腺)n观察膈肌形状后，于两侧根部分别切一观察膈肌形状后，于两侧根部分别切一小口，将膈肌横向切开，绞断肋骨
9、，直小口，将膈肌横向切开，绞断肋骨，直至锁骨，然后掀起胸骨，暴露整个胸腔。至锁骨，然后掀起胸骨，暴露整个胸腔。n直视心脏，在心脏的上部，主动脉弓处，直视心脏，在心脏的上部，主动脉弓处，有两片乳白色蝴蝶状的小片，即为胸腺。有两片乳白色蝴蝶状的小片，即为胸腺。实验步骤实验步骤 3（取肾脏组织）（取肾脏组织）n用圆头镊将肠道拨向对侧，暴露肾脏。用圆头镊将肠道拨向对侧，暴露肾脏。n用眼科剪刀取下肾脏，剥去肾包膜，放用眼科剪刀取下肾脏，剥去肾包膜，放入盛有生理盐水的培养皿中。入盛有生理盐水的培养皿中。n用剪刀将肾脏分解为若干用剪刀将肾脏分解为若干2 2* *3mm3mm组织小组织小块，取边缘整齐、色泽红
10、润为佳。块，取边缘整齐、色泽红润为佳。n将一小块肾组织放入套筒针内备用。将一小块肾组织放入套筒针内备用。实验步骤实验步骤 4（组织移植）（组织移植）n选取组织的目标区域，常用区域为肋侧选取组织的目标区域，常用区域为肋侧（近腋窝处（近腋窝处 ）。）。n在离目标区域中心点在离目标区域中心点1-2cm1-2cm处，用眼科处，用眼科小剪刀作一小剪刀作一2-3mm2-3mm切口。切口。n用套筒针在切口处刺入皮下直至目标中用套筒针在切口处刺入皮下直至目标中心区域，将组织块推入，并迅速拔出。心区域，将组织块推入，并迅速拔出。实验步骤实验步骤 5n麻醉、解剖裸鼠，与麻醉、解剖裸鼠，与KMKM鼠比较胸腺的区鼠比较胸腺的区别别n裸鼠胸腺只剩残基，基本上看不到裸鼠胸腺只剩残基，基本上看不到实验报告要求实验报告要求:n完成实验指导上第完成实验指导上第3、13、16页三份实页三份实验报告验报告n在实验报告的实验结果一项中完成小鼠在实验报告的实验结果一项中完成小鼠解剖图、大鼠解剖图解剖图、大鼠解剖图注意事项注意事项:n实验时请不要戏弄动物、防止被动实验时请不要戏弄动物、防止被动物咬伤，防止动物逃逸物咬伤，防止动物逃逸n实验结束后请把器械清洗干净，整实验结束后请把器械清洗干净，整理齐全理齐全