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1、丁苯酞对AD大鼠模型海马BACE及NEP活性含量的影响 丁苯酞注射的出厂价格丁苯酞对AD大鼠模型海马BACE及NEP活性含量的影响 丁苯酞注射的出厂价格 摘要：目的 探讨丁苯酞对AD大鼠模型海马组织分泌酶（BACE）和中性内肽酶（NEP）活性含量的影响。方法 选用健康雄性Wistar大鼠40只，随机分为4组，假手术组、模型组、丁苯酞低剂量组、丁苯酞高剂量组。采用大鼠海马立体定向注射凝聚态A1-40诱导AD模型，灌胃时间为4周，以ELISA 法测定海马组织匀浆中-分泌酶及中性内肽酶的活性含量。结果 用药组大鼠海马组织-分泌酶的活性含量没有明显降低，与模型组之间差异无统计学意义（P0.05）；用药
2、组大鼠海马组织中性内肽酶的活性含量明显升高，与模型组比较差异有统计学意义（P1。A在颞叶、海马的沉积可引起细胞内钙稳态失衡、氧化应激、炎症免疫、细胞凋亡、线粒体损伤、胆碱能系统的损伤等，最终引起神经元的丧失，产生记忆力及认知的下降。因此，A在AD的发病中起着关键性作用，而减少A沉积成为治疗AD的一条重要途径。丁苯酞可以减少AD模型大鼠海马A的沉积2，其可能机制之一是促进分泌酶的表达3，但丁苯酞是否会影响A代谢其他重要途径尚不清楚。分泌酶（BACE）是A产生过程中第一个限速酶，而中性内肽酶（NEP）是脑内重要的A降解酶。本实验通过检测影响A代谢BACE和NEP，探讨丁苯酞减少AD大鼠模型脑内A沉
3、积的可能机制。 1 材料与方法 1.1 动物与分组 健康雄性Wistar 大鼠40只（山西医科大学实验动物中心提供），体重280 g320 g。随机分为4 组：假手术组、模型组、丁苯酞低剂量组、丁苯酞高剂量组，每组各10只，自由进食、饮水，自然昼夜节律光照。 1.2 药品、试剂与仪器 丁苯酞（恩必普，NBP）由石药集团恩必普药业有限公司提供；A1-40蛋白片段（北京博奥森）；大鼠脑内-分泌酶、中性内肽酶活性ELISA 试剂盒（美国R&D）；江湾1C型脑立体定位仪；FA 20XX/1104型电子天平（上海天平仪器厂）；玻璃匀浆器（天津科器集团公司）；离心机（LD5-2A，北京医用离心机厂）；电热
4、恒温培养箱Jc303型（上海成顺仪器仪表有限公司）；Wellscan MK-3 全自动多功能酶标仪（芬兰Labsystems Dragon公司）。 1.3 模型建立及给药 采用大鼠海马立体定向注射凝聚态A1-40诱导AD模型3。将丁苯酞溶于植物油中，制成浓度为10 mg/mL植物油与药物混合物进行灌胃；根据人和动物按体表面积折算的等效剂量，丁苯酞高剂量组按60 mg/kg给药，丁苯酞低剂量组按30 mg/kg给药，假手术组和模型组大鼠给予等体积植物油，造模手术后第一天即给药，灌胃共4周，均每日1次灌胃。 1.4 海马组织匀浆分泌酶及中性内肽酶的活性含量测定 灌胃满4周后处死大鼠，进行麻醉，快速
5、断头，在冰盘上迅速将两侧海马剥离（右侧海马用以分泌酶的检测，左侧海马用以中性内肽酶的检测），用冰冷的生理盐水冲净海马表面血迹，滤纸拭干，后以电子天平称重；按1 g10 mL冰水溶液中用玻璃匀浆器研磨制成匀浆，4 3 500r/min离心10 min，取上清液，制成10%海马脑组织匀浆。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠海马组织匀浆中分泌酶及中性内肽酶的活性含量。 1.5 统计学处理 计量资料以均数标准差（xs）表示。用SPSS 13.0软件处理，采用单因素方差分析。 2 结 果 2.1 分泌酶的活性含量（见表1） 与假手术组相比，模型组大鼠海马组织匀
6、浆中分泌酶的活性含量明显增加（P4，该途径不产生淀粉样蛋白，而产生可溶性蛋白sAPP5，这也是APP加工的主要途径。第二条是APP分别由分泌酶、分泌酶水解，该途径产生完整的A4,6。分泌酶作为A生成的限速酶，近年来已成为研究痴呆药物的重要靶标7。在临床研究中，Holsinger等8分析了21例AD患者脑脊液（CSF）中BACE的活性后，发现CSF中BACE活性增强。Zhong等9研究了80例痴呆患者，磁共振、免疫组化结果显示，痴呆组BACE浓度比对照组正常人群明显增高。分泌酶升高在A生成中起着重要作用。抑制分泌酶将会减少A生成。本实验结果显示，AD模型大鼠海马组织中分泌酶活性含量明显升高，但却
7、未发现丁苯酞能够减少其分泌酶的活性含量，丁苯酞抑制A沉积可能不通过减少分泌酶的活性含量这条途径。 AD的主要发病原因是A的不完全清除（大于98%的AD病例）10。NEP是脑内主要的A降解酶，位于细胞轴突和突触膜上，属Zn金属蛋白酶家族，是分子量约为186KDa的型跨膜糖蛋白，可降解A单体和寡聚体。其表达下调加剧A聚集，表达上调降低脑内A水平；NEP在AD患者脑内老年斑块区域含量最少，而脑周围的功能区域NEP 表达基本正常。因此，NEP的降低可以作为AD 早期发病的危险因素之一11，其升高则有利于A降解。本实验研究显示，模型组大鼠海马组织NEP含量明显降低，而用药组大鼠海马组织的中性内肽酶活性含
8、量明显增高，但尚未超过正常组，说明丁苯酞可能通过促进中性内肽酶的活性含量从而加速A的降解，减少A的沉积。 丁苯酞提取于芹菜籽，可能通过保护线粒体的机制改善AD患者的认知。有研究者间断向大鼠脑内注射A，制成AD模型大鼠并给予丁苯酞治疗，结果显示丁苯酞可以通过抑制细胞凋亡、过抗氧化、降低tau蛋白磷酸化等途径改善AD大鼠的认知能力12。丁苯酞可以成为治疗阿尔茨海默病潜在的治疗药物，并可能通过多机制、多靶点改善阿尔茨海默病记忆及认知功能。而减少A的沉积能从根本上抑制A的神经毒性。A有一个生成和降解的平衡过程，正是由于这个生成与降解的过程发生异常使A在脑部增多、沉积。丁苯酞可以减少A的沉积，改善AD模型大鼠的认知。其可能的机制之一是通过促进分泌酶的表达，将APP裂解为可溶性的APP片段sAPP，减少APP分解为A3。结合本实验，丁苯酞也可能通过促进中性内肽酶的活性含量，加速A的降解，从而恢复A生成和降解的平衡，即抑制A的生成，促进A的降解，最终减少A的沉积。但是否还有其他机制的参与有待更进一步的研究。 本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 3