实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应.doc
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1、.*实验 蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。熟悉蛋白质的沉淀反应,进一步熟悉蛋白质的有关反应。二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用,产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同,颜色反应亦不完全相同。颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应,因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。另外,颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。蛋白质是亲水性胶体,在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关,但其稳定性是有条件的,相对的。如果条件发生了变化,破坏了蛋白质的稳定性,蛋白质就会从溶液中沉淀出来。三、实验
2、仪器1、吸管 2、滴管 3、试管 4、电炉 5、pH试纸 6、水浴锅7、移液管 四、实验试剂1、卵清蛋白液:鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍,3-4层纱布过滤,滤液放在冰箱里冷藏备用。2、 0.5%苯酚:1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。3、Millons试剂:40g汞溶于60ml浓硝酸(水浴加温助溶)溶解后,冷却,加二倍体积的蒸馏水,混匀,取上清夜备用。此试剂可长期保存。4、尿素晶体5、1%CuSO4:1g CuSO4晶体溶于蒸馏水,稀释至100ml6、10%NaOH:10g NaOH溶于蒸馏水,稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液:0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml
3、.9、 冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液:100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。12、硫酸铵晶体:用研钵研成碎末。13、95%乙醇。14、醋酸铅溶液:1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液:10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液:100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。18、1%醋酸溶液。五、实验步骤蛋白质的颜色反应(一) 米伦(Millons)反应1、苯酚实验:取0.5%苯酚溶液1ml于试管中,加Millons试剂0.5ml,电炉小心加热观察颜色变化。2、蛋白质实验:取2ml蛋白液,加Millons试剂0.5ml,出现白色的蛋白质
4、沉淀,小心加热,观察现象。(二) 双缩脲反应1、取少量尿素晶体放在干燥的试管中,微火加热熔化,至重新结晶时冷却。然后加10%NaOH溶液1ml,摇匀,再加2-4滴1% CuSO4溶液,混匀,观察现象。 2、取蛋白液1ml,加10%NaOH溶液1ml,摇匀,再加2-4滴1% CuSO4溶液,混匀,观察现象。(三) 黄色反应取一支试管,加入1ml蛋白液及浓硝酸5滴。加热,冷却后注意颜色变化。然后再加入10%NaOH溶液1ml,观察颜色有什么变化。(四) 茚三酮反应取蛋白液1ml于试管中,加4-8滴茚三酮溶液,加热至沸,即有蓝紫色出现。蛋白质的沉淀(一)蛋白质的盐析作用1、试管中加蒸馏水3ml,加固
5、体硫酸铵至饱和。另一支试管加蛋白液2ml,再加入饱和硫酸铵溶液2ml,摇匀静置观察现象。 2、将上述混合液过滤。向滤液中逐渐加入少量固体硫酸铵,直至饱和为止,此时析出为清蛋白。再加入少量蒸馏水,观察沉淀是否溶解。(二)有机溶剂沉淀蛋白质试管中加蛋白液1ml,加晶体氯化钠少许,溶解后加95%乙醇3ml,摇匀,观察现象。(三)重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质1、取试管2支,各加蛋白液2ml,一支管中滴加1%醋酸铅溶液,另一支管中滴加1%硫酸铜溶液,至有沉淀产生。2、取一支试管加蛋白液2ml,再加入10%三氯乙酸1ml,充分混匀,观察结果。(四)生物碱试剂沉淀蛋白质取一支试管,加入蛋白液2ml及醋酸4
6、-5滴,再加饱和苦味酸数滴,观察现象。六、实验结果蛋白质的颜色反应(一) 米伦(Millons)反应1、苯酚实验: 溶液即出现玫瑰红色。2、蛋白质实验:出现白色的蛋白质沉淀,小心加热后凝固的蛋白质出现红色。(二) 双缩脲反应1、有紫色出现。2、溶液有蓝紫色出现(三) 黄色反应先有黄色沉淀生成,加入10%NaOH溶液1ml后颜色变为橘黄色。(四) 茚三酮反应有蓝紫色出现。蛋白质的沉淀(一)蛋白质的盐析作用1、有蛋白析出。2、有蛋白质析出,加水后可复溶。(六)有机溶剂沉淀蛋白质取一试管加蛋白液1ml,加入晶体氯化钠少许,待溶解后再加95%乙醇3ml,摇匀,观察现象(七)重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白
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