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1、免疫组织化学技术免疫组织化学技术 Immunohistochemistry Immunohistochemistry techniques techniques 采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物第一节第一节 免疫组织化学免疫组织化学 技术概述技术概述采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物（一）发展简史（一）发展简史 n19411941年年CoonsCoons首先用荧光素标记抗体检测首先用荧光素标记抗
2、体检测肺组织内的肺炎双球菌获得成功。肺组织内的肺炎双球菌获得成功。 n6060年代年代NakaneNakane建立酶标抗体技术运用铁建立酶标抗体技术运用铁蛋白标记蛋白标记AbAb技术技术n70 70 、80年代多位科学家改良上述技术，年代多位科学家改良上述技术，建立辣根过氧化物酶建立辣根过氧化物酶-抗过氧化物酶抗过氧化物酶（PAPPAP）技术）技术, ,抗生物素抗生物素生物素（生物素（ABC）法法使免疫组织化学进入了应用阶段。使免疫组织化学进入了应用阶段。 采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物n2
3、0002000年以后各种免疫组化技术更加成熟年以后各种免疫组化技术更加成熟, ,使免疫组化技术成为当今生物医学中形使免疫组化技术成为当今生物医学中形态、功能代谢综合研究的一项有力工具。态、功能代谢综合研究的一项有力工具。其应用范围深达医学各个学科，是目前其应用范围深达医学各个学科，是目前生命科学工作者应该掌握的基本技术之生命科学工作者应该掌握的基本技术之一。一。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物定义定义: :是应用是应用免疫学免疫学基本原理基本原理抗原抗原抗体反应，即抗原与抗体抗体反应，即抗原与
4、抗体特异性结合的原理，通过化学反应使特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体标记抗体的显色剂的显色剂(荧光荧光素、酶、金属离子、同位素素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原（多显色来确定组织细胞内抗原（多肽和肽和蛋白质蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫免疫组织化学技术组织化学技术(immunohistochemistry)或或免疫细胞化学技免疫细胞化学技术术(immunocytochemistry)。 将试剂抗原或试剂抗体用可以微量检测的标记物进行标记，将试剂抗原或试剂抗体用可以微量检测的标记物进行标记，在与标本中的相应抗体或
5、抗原反应后，可以不必测定抗原抗体在与标本中的相应抗体或抗原反应后，可以不必测定抗原抗体复合物本身，而测定复合物中的标记物，通过标记物的放大作复合物本身，而测定复合物中的标记物，通过标记物的放大作用，进一步提高了免疫技术的敏感性。用，进一步提高了免疫技术的敏感性。（二）免疫组织化学的原理（二）免疫组织化学的原理采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物n抗原抗原是指能够刺激是指能够刺激机体机体产生（特异性）产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内
6、外结合，发生致敏淋巴细胞在体内外结合，发生免疫免疫效应效应（特异性反应）的物质。抗原的基（特异性反应）的物质。抗原的基本特性有两种，一是诱导免疫应答的能本特性有两种，一是诱导免疫应答的能力，也就是免疫原性，二是与免疫应答力，也就是免疫原性，二是与免疫应答的产物发生反应，也就是抗原性的产物发生反应，也就是抗原性 采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物n病原微生物病原微生物 在医疗中将病原微生物制成疫苗进行在医疗中将病原微生物制成疫苗进行预防预防接种接种，可以提高人的，可以提高人的免疫力免疫力。 n嗜异
7、性抗原嗜异性抗原 一类与种属特异性无关的、存在于人一类与种属特异性无关的、存在于人以及某些以及某些动物动物、植物植物、微生物的性质相同的抗原。、微生物的性质相同的抗原。 n肿瘤抗原肿瘤抗原 由物理的、化学的因素或某些病毒诱发由物理的、化学的因素或某些病毒诱发的的实验动物实验动物肿瘤，其细胞中或细胞表面均出现特异性肿瘤，其细胞中或细胞表面均出现特异性抗原，称为抗原，称为肿瘤特异性抗原肿瘤特异性抗原。已证实在某些人类肿瘤。已证实在某些人类肿瘤中心存在着与病毒密切相关的抗原。中心存在着与病毒密切相关的抗原。 n同种异体抗原同种异体抗原n动物免疫血清动物免疫血清与人类有关的抗原与人类有关的抗原 采用P
8、P管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物n抗体抗体（antibody）指机体的免疫系统在）指机体的免疫系统在抗原抗原刺激下，由刺激下，由B淋巴细胞或淋巴细胞或记忆细胞记忆细胞增增殖分化成的殖分化成的浆细胞浆细胞所产生的、可与相应所产生的、可与相应抗原发生抗原发生特异性特异性结合的免疫球蛋白。结合的免疫球蛋白。 采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物世界著名抗体公司世界著名抗体公司 nSanta公司、公司、Abca
9、m公司、公司、nAbgent公司、公司、Proteintech Group、Cell Signaling Technology（CST）、）、n罗氏公司（罗氏公司（Roche）采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物 它借助于它借助于荧光素、酶荧光素、酶等标记抗体等标记抗体与组织切片或细胞涂片中相关与组织切片或细胞涂片中相关抗原抗原相相结合，由于荧光素所发荧光可用荧光结合，由于荧光素所发荧光可用荧光显微镜检出，而酶可经一定的显色处显微镜检出，而酶可经一定的显色处理，呈现醒目的阳性色彩，从而可准理，呈现
10、醒目的阳性色彩，从而可准确定位欲测定的抗原物质。确定位欲测定的抗原物质。 标记物标记物采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物荧光素、酶荧光素、酶标记标记抗抗 体体抗抗 原原荧光荧光阳性色彩阳性色彩显微镜观察显微镜观察组织抗原组织抗原抗体抗体 酶酶荧光素荧光素采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物NoImage采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证
11、切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物 三大系统三大系统 本技术是应用免疫学原理本技术是应用免疫学原理来识别待测抗原，再通过酶和底物来识别待测抗原，再通过酶和底物的作用外加显色剂，将上述反应显的作用外加显色剂，将上述反应显示出来。示出来。 采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物免疫组免疫组织化学织化学识别系统识别系统联结系统联结系统显示系统显示系统采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物n识别系统识别系统是指
12、特异性抗体识别组织是指特异性抗体识别组织或细胞中的靶抗原。抗原抗体的特或细胞中的靶抗原。抗原抗体的特异性结合是本技术的基本依异性结合是本技术的基本依据。据。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物n联结系统联结系统由联结抗体构成。它的作由联结抗体构成。它的作用是联接识别系统和显示系统。用是联接识别系统和显示系统。 采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物n显示系统显示系统的目的是使抗原抗体间的的目的是使抗原抗
13、体间的特异性结合变为肉眼可见。因此显特异性结合变为肉眼可见。因此显示系统由示系统由标记酶，底物和显色剂组标记酶，底物和显色剂组成成，以在靶抗原存在位点上形成有，以在靶抗原存在位点上形成有色沉淀。色沉淀。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物特点特点： 特异性强特异性强灵敏度高灵敏度高定位准确和简便快速等优点定位准确和简便快速等优点又能够将形态、功能及代谢的研又能够将形态、功能及代谢的研究有机结合起来。究有机结合起来。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪
14、边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物IHC方法方法1 1 过去用过的方法过去用过的方法ABCABC法，法，SPSP法法。三步三步法，使用生物素法，使用生物素2 2 目前最常用的方法目前最常用的方法二步法：二步法： EnliVisionEnliVision显色系统显色系统（即用型非生物素免疫组化（即用型非生物素免疫组化EnliVisionTM plusEnliVisionTM plus检测试剂盒检测试剂盒 ）n将多个抗鼠和抗兔的将多个抗鼠和抗兔的IgGIgG分子二抗与辣根过氧分子二抗与辣根过氧化物酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个大化物酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个大分子多聚体
15、（分子多聚体（polymerpolymer），直接放大信号），直接放大信号40-5040-50倍。倍。n敏感、省时、方便、背景低（避免了内源性生敏感、省时、方便、背景低（避免了内源性生物素干扰）。物素干扰）。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物3 3 最新一代的免疫组化最新一代的免疫组化 Novolink Polymer Novolink Polymer法：法：使用小分子聚合物（减少细胞薄膜硬脂的阻使用小分子聚合物（减少细胞薄膜硬脂的阻碍，比传统中的大分子聚合物染色更显著），碍，比传统中的大分子聚
16、合物染色更显著），信号放大更强，还可以检测到组织中低浓度信号放大更强，还可以检测到组织中低浓度的抗原。的抗原。 IHC方法方法采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物 EnliVisionEnliVision法的工作程序法的工作程序： 切片，烤片，脱蜡水化（使用防脱片处理的玻片：多聚赖氨酸，切片，烤片，脱蜡水化（使用防脱片处理的玻片：多聚赖氨酸，APESAPES）nH H2 2O O2 2处理（处理（阻断内源性过氧化物酶），蒸馏水漂洗阻断内源性过氧化物酶），蒸馏水漂洗n组织切片的预处理（枸橼酸钠缓冲液
17、中热修复，酶消化组织切片的预处理（枸橼酸钠缓冲液中热修复，酶消化暴露出暴露出抗原决定簇），抗原决定簇），TBSTBS漂洗漂洗n内源性过氧化物酶的阻断内源性过氧化物酶的阻断n一抗孵育，一抗孵育，TBSTBS漂洗漂洗n二抗孵育，二抗孵育，TBSTBS漂洗漂洗nDABDAB显色，蒸馏水中止反应显色，蒸馏水中止反应n苏木素复染及封片苏木素复染及封片 IHCIHC技术的基本操作流程技术的基本操作流程采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物切片切片烤片烤片脱蜡水化脱蜡水化H H2 2O O2 2处理处理热修复热修
18、复一抗一抗二抗二抗EnlivisionEnlivision试剂试剂DABDAB显色显色苏木素复染苏木素复染采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物IHCIHC染色结果的判读原则染色结果的判读原则采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物玻片干燥造成的玻片干燥造成的“边缘效应边缘效应”假假阳阳性性未阻止内源性过氧化物酶未阻止内源性过氧化物酶阻止内源性过氧化物酶后阻止内源性过氧化物酶后I. I. 注意影响注意影响I
19、HCIHC结果判读的因素结果判读的因素采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物酒精固定酒精固定福尔马林固定福尔马林固定胰腺，胰腺，insulin平滑肌肉瘤，平滑肌肉瘤，SMA气泡影响抗体抗体反应气泡影响抗体抗体反应冰冻切片冰冻切片石蜡切片石蜡切片结肠，结肠，CEA假阴性：注意内对照假阴性：注意内对照采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物假假阴阴性性蛋白酶处理后蛋白酶处理后蛋白酶未处理蛋白酶未处理皮肤，皮肤，
20、IV胶原胶原甲状旁腺，甲状旁腺，PTH微波未处理微波未处理微波处理后微波处理后采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物II. II. 染色的特异性判定染色的特异性判定采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切
21、断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物MitochondoriaMitochondoriaApicalApicalmembranemembraneBasolateral Basolateral membranemembranePlasma Plasma MembraneMembrane+ +PERPER GolgiGolgiPlasma Plasma membranemembranePER + PER + GolgiGolgiGolgiG
22、olgiapparatusapparatusEndocrineEndocrinegranulegranuleEndocrine granuleEndocrine granuleLysosomeLysosomeCytosolCytosolNucleusNucleusCytoskeletoCytoskeleton nl amylaseamylasel lysozome lysozomel PAcP PAcPl S-100 S-100 l NSE NSEl prefixation prefixation diffusion diffusion artifact artifactl CEACEAl E
23、MA EMAl ALP ALPlCD10CD10l cytochromecytochrome P-450 P-450l immunogloblinimmunogloblinl AFP AFPl HCG HCGl factor -RA factor -RAl prolactin in prolactin in activated pituicyte activated pituicytel SCSCl EGFR EGFRlE-cadE-cadl Leu 4Leu 4l HLA-DR HLA-DRl CEA, EMA, CEA, EMA, SC, CA19-9 SC, CA19-9 in canc
24、er cell in cancer celll Leu 1Leu 1l LCA LCAl PALP in PALP in seminoma seminoma cell celllCerb-B2Cerb-B2l SC, AFPSC, AFP EMA, EMA, immunoglobulin immunoglobulin in special in special conditions conditionsl chromogranin Achromogranin Al serotonin serotoninl Peptide Peptide hormonehormonel DNA polymera
25、se DNA polymerase l S-100 (occasional) S-100 (occasional)l estrogen receptor estrogen receptorl keratin inkeratin in carcinoid, carcinoid, mesothelioma mesotheliomal vimentin vimentinl keratin inkeratin in adenocarcinomaadenocarcinoma hepatocyte hepatocytel actin actinl keratinkeratinl vimentin vime
26、ntinl GFAP GFAPl tubulin tubulin采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物细胞膜阳性细胞膜阳性n细胞粘附分子：细胞粘附分子： E-cadherin E-cadherin、CD31CD31、CD56CD56等等n交联膜蛋白分子：交联膜蛋白分子：catenincatenin、dystrophin dystrophin 等等n细胞表面受体：细胞表面受体：EGFREGFR、c-erbB2c-erbB2、c-kit/CD117c-kit/CD117（酪氨酸激酶受体）等酪氨酸激酶受体
27、）等n绝大多数白细胞抗原绝大多数白细胞抗原: : LCA LCA、CD20CD20、CD2CD2、CD5CD5等等n表面或跨膜蛋白：表面或跨膜蛋白：VillinVillin、BerEP4BerEP4、EMAEMA、 CEA CEA、CA125CA125、EBV-LMP1EBV-LMP1等等采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物细胞核阳性细胞核阳性n细胞周期素蛋白细胞周期素蛋白：cyclinscyclins、cyclin cyclin 依赖激依赖激酶酶( (cdk)cdk)、cdk cdk 抑制剂抑制
28、剂 ( (如如 p16)p16)等等n细胞增殖相关蛋白细胞增殖相关蛋白：Ki67Ki67、PCNAPCNAn转录因子转录因子：MyoD1MyoD1、myogeninmyogenin、TTF-1TTF-1、CDX2CDX2、PAX5PAX5n肿瘤抑制基因肿瘤抑制基因：如：如 p53p53、p63p63、RbRb、WT1WT1n基因错配产物基因错配产物：如：如 MLH1MLH1、MSH2MSH2采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物n细胞核酶细胞核酶：如 TdTn类固醇激素受体类固醇激素受体：如 ER、
29、PR、ARn细胞核钙结合蛋白细胞核钙结合蛋白：如 S100蛋白、calretininn定位细胞核的病毒定位细胞核的病毒：如 CMV、HBcAg（核+核周）nNeuN：neuronal nuclei，表达于成熟的神经元采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物细胞浆内颗粒状阳性细胞浆内颗粒状阳性-定位于细胞器定位于细胞器n溶酶体颗粒溶酶体颗粒：如 lysozyme、CD68、myeloperoxidasen黑色素小体和前黑色素小体黑色素小体和前黑色素小体：如 HMB45、Melan-An细胞毒颗粒细胞毒颗
30、粒：如TIA-1、granzyme Bn线粒体线粒体: 如抗线粒体抗体, HEP-PAR1n神经内分泌颗粒神经内分泌颗粒：各种激素（如PTH、 ACTH、insulin）、CgA、SynnW-P W-P 小体小体: F-VIII相关抗原n分泌颗粒分泌颗粒：如BRST-2、surfactant、PSAn细胞内微生物细胞内微生物：如弓形虫采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物细胞浆纤维状阳性细胞浆纤维状阳性-中间丝或微丝中间丝或微丝中间丝中间丝;CK;CK; ;VimentinVimentin; ;De
31、sminDesminGFAPGFAP（glial fibrillary acidic proteinglial fibrillary acidic protein，胶质纤维酸性蛋白胶质纤维酸性蛋白 ）NFNF（NeurofilamentNeurofilament，神经元胞浆，神经元胞浆节细胞节细胞神经瘤，副节瘤神经瘤，副节瘤/ /嗜铬细胞瘤嗜铬细胞瘤，神经母细胞，神经母细胞瘤）瘤）NestinNestin：巢蛋白，神经前体细胞巢蛋白，神经前体细胞采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物弥漫或片状的细胞
32、浆阳性弥漫或片状的细胞浆阳性n蛋白分布在细胞内液、大量的微囊及内质蛋白分布在细胞内液、大量的微囊及内质网中网中n如如: :myoglobinmyoglobin、hemoglobinhemoglobin、albuminalbumin、AFPAFP、 NSENSE、cytoplasmic Igcytoplasmic Ig、CD3CD3n病毒颗粒病毒颗粒/ /蛋白蛋白n如如: :HBsAgHBsAg（常在核旁着色）（常在核旁着色）n从细胞间液吸收的蛋白从细胞间液吸收的蛋白n如如: : IgIg、 albuminalbumin采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管
33、材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物 分化差恶性肿瘤的诊断和鉴别诊断；分化差恶性肿瘤的诊断和鉴别诊断； 证实内分泌肿瘤和神经内分泌肿瘤；证实内分泌肿瘤和神经内分泌肿瘤； 应用肿瘤胚胎性抗原诊断某些肿瘤，如癌应用肿瘤胚胎性抗原诊断某些肿瘤，如癌胚抗原（胚抗原（CEACEA）对胃肠道癌、甲胎蛋白（）对胃肠道癌、甲胎蛋白（AFPAFP）对肝癌和卵巢内胚窦癌诊断有帮助；对肝癌和卵巢内胚窦癌诊断有帮助； （三）免疫组化的应用（三）免疫组化的应用采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物 有时
34、可帮助确定肿瘤的良恶性，如应用免有时可帮助确定肿瘤的良恶性，如应用免疫球蛋白轻链疫球蛋白轻链和和来鉴别滤泡性恶性淋来鉴别滤泡性恶性淋巴瘤和滤泡性反应性增生；巴瘤和滤泡性反应性增生； 研究某些癌症与病毒的关系，如肝癌与乙研究某些癌症与病毒的关系，如肝癌与乙型肝炎病毒、鼻咽癌与型肝炎病毒、鼻咽癌与EBEB病毒、宫颈癌与病毒、宫颈癌与乳头状瘤病毒等的关系；乳头状瘤病毒等的关系；采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物 为肿瘤治疗的选择提供依据，如乳腺为肿瘤治疗的选择提供依据，如乳腺癌检测雌、孕激素受体（癌检
35、测雌、孕激素受体（ERER、PRPR）呈阳）呈阳性时，应用他莫昔芬（三苯氧胺）治疗性时，应用他莫昔芬（三苯氧胺）治疗可预期获得较好的疗效；可预期获得较好的疗效； 检测癌基因和抑癌基因蛋白产物（如检测癌基因和抑癌基因蛋白产物（如c-erbB2c-erbB2，p53p53）、增生活性抗原（如）、增生活性抗原（如Ki-67Ki-67，PCNAPCNA）用来估计肿瘤的预后。）用来估计肿瘤的预后。 采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物 免疫组化在临床诊断中免疫组化在临床诊断中 应用病例示范（应用病例示范（C
36、ase 1Case 1）n临床病史资料：临床病史资料：4848岁，男性，胃活检标岁，男性，胃活检标本取自胃大弯部位。本取自胃大弯部位。H&EH&E染色切片描述肿染色切片描述肿瘤细胞显示在间质中呈癌巢样，邻近的瘤细胞显示在间质中呈癌巢样，邻近的腺体肠上皮化生，间质中的不规则的巢腺体肠上皮化生，间质中的不规则的巢状结构待诊断状结构待诊断. .采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物nH&E染色 采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，
37、保持熔接部位干净无污物n 首先选择首先选择Cytokeratin单克隆广谱角蛋白抗体在单克隆广谱角蛋白抗体在细胞巢中呈强阳性染色，证明是上皮来源性的细胞巢中呈强阳性染色，证明是上皮来源性的肿瘤，在图片顶部是非肿瘤性的腺上皮阳性，肿瘤，在图片顶部是非肿瘤性的腺上皮阳性，肿瘤性的腺体在底部。肿瘤性的腺体在底部。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物n 肿瘤细胞再进一步进行肿瘤细胞再进一步进行cytokeratin 7 /cytokeratin 20染色，染色证实在肿瘤染色，染色证实在肿瘤细胞中同时缺少细
38、胞中同时缺少cytokeratin 7 /cytokeratin 20的表达。在这张图片中肠上皮的表达。在这张图片中肠上皮细胞细胞cytokeratin 20阳性与邻近的肿瘤细胞阴性形成明显的对照。阳性与邻近的肿瘤细胞阴性形成明显的对照。cytokeratin 7 and 20在临床中使用中，如果同时都不表达，特异性地表示在临床中使用中，如果同时都不表达，特异性地表示肿瘤细胞为来源于一些上皮的肿瘤（肿瘤细胞为来源于一些上皮的肿瘤（subset of epithelial tumors），包括肾），包括肾细胞癌，前列腺癌、肝细胞癌和神经内分泌肿瘤等。细胞癌，前列腺癌、肝细胞癌和神经内分泌肿瘤等。
39、采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物 SynaptophysiSynaptophysin n 测定测定SynaptophysiSynaptophysin n所有肿瘤细所有肿瘤细胞中都显示出胞中都显示出较强的阳性表较强的阳性表达，而在肿瘤达，而在肿瘤细胞中包绕的细胞中包绕的肠腺体呈阴性肠腺体呈阴性诊断诊断: :神经内神经内分泌癌分泌癌采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物 Ki-67 Ki-67 测定测定
40、: :Ki-67 Ki-67 在肿瘤细胞呈现非常低的表达，在肿瘤细胞呈现非常低的表达，Ki-67 Ki-67 染色同样证实为肿染色同样证实为肿瘤细胞增殖率低，肠腺上皮中瘤细胞增殖率低，肠腺上皮中Ki-67 Ki-67 高表达，可能是胃小凹腺体，与高细胞增殖高表达，可能是胃小凹腺体，与高细胞增殖率的腺上皮相比率的腺上皮相比Ki-67Ki-67在肿瘤细胞中缺少胞核表达。这些在肿瘤细胞中缺少胞核表达。这些Ki-67 Ki-67 标记阴性的肿瘤标记阴性的肿瘤细胞是低分级的神经内分泌癌细胞，细胞是低分级的神经内分泌癌细胞，采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边
41、剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物第二节第二节 免疫组织化学染色前免疫组织化学染色前的基本技术的基本技术( (一一) ) 样品的取材样品的取材 组织标本组织标本包括石蜡切片（病理切片和包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片。组织芯片）和冰冻切片。细胞标本细胞标本后者包括组织印片和细胞涂片。后者包括组织印片和细胞涂片。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物n 其中石蜡切片是制作组织标本最常其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存用、最基本的方法，对于组织
42、形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研对照观察；还能长期存档，供回顾性研究究. .采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物 样品制备的第一步就是取材，取材的好样品制备的第一步就是取材，取材的好坏关系到实验的结果。所以必须做好准备工坏关系到实验的结果。所以必须做好准备工作。作。 现将现将组织取材的原则和具体要求组织取材的原则和具体要求分述如下：分述如下： 1 1 刀剪锐利、洁净。刀剪锐利、洁净。 2 2 快速、准确、尽量保持生活状态
43、，快速、准确、尽量保持生活状态， 力争力争1 1分钟之内放入固定液，最迟不能超分钟之内放入固定液，最迟不能超 过过3 3分钟。分钟。 采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物3 3 一刀切取，切取应在蜡版或滤纸上进一刀切取，切取应在蜡版或滤纸上进 行，避免拉锯、牵拉或挤压等动作。行，避免拉锯、牵拉或挤压等动作。4 4 低温操作，防止自溶现象，通常以低温操作，防止自溶现象，通常以 0-40-4的低温条件下操作为佳。的低温条件下操作为佳。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直
44、角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物5 5、样品大小适当，光镜样品一般在、样品大小适当，光镜样品一般在1.0cm1.0cm以内，以内，免疫组织化学样品大约在：免疫组织化学样品大约在：2cm2cm1.5cm1.5cm0.3cm0.3cm 厚度控制在厚度控制在0.3cm0.3cm 。电镜样品规格要求切成。电镜样品规格要求切成0.5-1.0cm0.5-1.0cm共共3 3小块。小块。 对对病理组织病理组织取材还应做到以下几点：取材还应做到以下几点： 取材部位必须是主要病变区；取材部位必须是主要病变区； 必须取病灶与正常组织的交界区；必须取病灶与正常组织的交界区； 必要时
45、取远离病灶的正常组织做对照。必要时取远离病灶的正常组织做对照。 采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物细胞标本的取材细胞标本的取材印片法印片法: :常用于活检标本常用于活检标本沉淀法沉淀法: :主要用于胸水、腹水、尿液等主要用于胸水、腹水、尿液等穿刺抽吸法：常用于淋巴结、软组织、穿刺抽吸法：常用于淋巴结、软组织、 肾、肝、肺等组织。肾、肝、肺等组织。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物注意事项：注意事项
46、：细胞经离心后细胞粘附性较差，标记过细胞经离心后细胞粘附性较差，标记过程中容易脱片，载玻片应涂粘附剂程中容易脱片，载玻片应涂粘附剂细胞总数应以细胞总数应以10105 5个为宜，并集中在直个为宜，并集中在直径径0.6-1.0cm0.6-1.0cm的圆圈内。的圆圈内。富于粘液的标本，未经处理不宜作免疫富于粘液的标本，未经处理不宜作免疫组化标记。组化标记。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物（二）、组织固定（二）、组织固定 2 2、免疫组化标本固定时，好的固定剂应、免疫组化标本固定时，好的固定剂应 满足
47、哪些要求？满足哪些要求？ 1 1、目的、目的: :固有形态和结构、抗原完整性固有形态和结构、抗原完整性采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物能快速固定抗原；能快速固定抗原；防止抗原物质扩散；防止抗原物质扩散；固定后的抗原能被抗体识别，固定后的抗原能被抗体识别， 不影响抗原抗体反应。不影响抗原抗体反应。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物甲醛固定液：分类较多，最常用的甲醛固定液：分类较多，最常用的4%4%
48、多多聚甲醛固定液，对于冰冻切片，甲醛固聚甲醛固定液，对于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好；定有时比冰冻丙酮好；n主要特点：主要特点：组织穿透性好，收缩性小组织穿透性好，收缩性小n但对于不同的组织和抗原，可选用不同但对于不同的组织和抗原，可选用不同的固定液。有时候商品化的抗体会有比的固定液。有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液，请于购置前注较适合而推荐的固定液，请于购置前注意说明书。意说明书。3 3、各种固定液：、各种固定液：采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物 BouinBouin, ,
49、S S固定液：饱和苦味酸固定液：饱和苦味酸750ml750ml，甲醛甲醛250ml250ml，冰醋酸，冰醋酸50ml50ml，其对组织的，其对组织的穿透力较强穿透力较强，固定较好，结构完整，固定较好，结构完整，但因偏酸，对抗原有一定损害，且组但因偏酸，对抗原有一定损害，且组织收缩明显，不适于组织标本的长期织收缩明显，不适于组织标本的长期保存。保存。 PLPPLP液：即高碘酸钠液：即高碘酸钠- -赖氨酸赖氨酸- -多聚多聚甲醛，适于固定石蜡切片。甲醛，适于固定石蜡切片。适于富含适于富含糖类组织，对超微结构及许多抗原的糖类组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。抗原性保存较好。采用PP管及配件
50、：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物（三）、组织脱水浸蜡及包埋（三）、组织脱水浸蜡及包埋脱水透明等过程需在脱水透明等过程需在4 4或室温或室温下进行，避免下进行，避免组织抗原的损失；组织抗原的损失；为使组织充分脱水、透明和浸蜡，组织块的厚为使组织充分脱水、透明和浸蜡，组织块的厚度以度以1.0-1.5mm1.0-1.5mm为宜为宜; ;浸蜡及包埋过程中浸蜡及包埋过程中, ,石蜡温度应保持在石蜡温度应保持在6060或或6060以下以下, ,用熔点低的石蜡包埋用熔点低的石蜡包埋; ;制备蜡块在较低的温度进行制备蜡块在较