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1、脑脊液标本细菌学检验标准操作规程1.目的 规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。2.适用范围脑脊液培养。3.标本3.1标本类型 脑脊液。3.2 标本采集 由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液2-3ml，盛于无菌容器中送检。脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶酶，迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离体后也易于死亡。因此，脑脊液无论涂片或培养，必须于采集后立即送检。3.3 标本拒收标准3.3.1 标本标识与化验申请单不符。3.3.2 标本未用无菌试管留取。3.4 标本保存 采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置于室温，放置时间不应超过2小时，切勿放冰箱，否则影响检出率。4.
2、 试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦克凯平板、相关生化试剂等。4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌药敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性菌药敏卡（GPS）、药敏纸片、TBA板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。5. 细菌鉴定和药敏质控参见质量管理程序6. 检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。6.1 涂片检查6.1.1 一般细菌涂片检查 外观浑浊或脓性脑脊液可直接涂片，无色、透明的脑脊液，应3000r/min离心10-15分钟后
3、取沉淀物涂片、革兰染色、就、镜检。根据染色及形态特征，常可初步提示细菌的种类。6.1.2 结核分枝杆菌涂片检查 参见分支杆菌属检验标准操作规程6.1.3 新生隐球菌涂片检查 取脑脊液的沉淀物作墨汁负染色，或取脑脊液的离心沉淀物接种于沙氏培养基，置于35摄氏度培养25日，根据菌落特性，涂片染色镜检作出报告。必要时可作生化反应进一步鉴定。6.2分离培养6.2.1用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯平板，置于5%10%CO2环境中35摄氏度培养1824小时，观察细菌生长情况，根据菌落特点、形态与染色及生化反应鉴定细菌，并作药敏试验。6.2.2结核分
4、枝杆菌培养 参见分支杆菌属检验标准操作规程7.结果报告无论是涂片还是培养，一旦检测到阳性细菌应立即电话或书面通知临床医师。查见细菌，报告菌名和药敏结果。经培养48小时，仍无细菌生长者，报告“培养2日无细菌生长”。8.注意事项8.1 抽取的脑脊液分置于无菌试管中，迅速送至实验室，病毒、真菌分支杆菌培养样本置于4C保存待送。8.2 流感嗜血杆菌容易在外界环境中死亡，脑膜炎奈瑟菌对寒冷和干燥均很敏感，在体外容易自溶，故不论是涂片镜检还是进行培养，均应及时送检。9. 临床意义 正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示细菌性（急性化脓性或结核性等）脑膜炎。化脓性脑膜炎最多见脑膜炎奈瑟菌，肺炎链球菌居第二位。
5、3个月至5岁儿童细菌性脑膜炎的主要致病菌是流感嗜血杆菌，新生儿脑炎多由大肠埃希菌、B群溶血性链球菌和脑膜败血黄杆菌引起的，特别是早产的婴儿。结核分枝杆菌引起结核性脑膜炎。85%脑脓肿病人脑脊液培养可检出厌氧菌，有时可为厌氧菌和需氧菌混合感染。10. 危急值报告直接涂片找到细菌或培养阳性均作危急值报告。若检测出脑膜炎奈瑟菌则应做传染病报告。参考文献1 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL32:2008医学实验室质量和能力认可准则在微生物学检验领域的指南.20082 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，20073 叶应妩，王毓三，申子瑜主编全.国临床检验操作规程第.三版.南京：东南大学出版社，20064 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy.9th ed.Washington：ASM Press，20075ISO15189:2007医学实验室-质量和能力认可准则.2007 编写人： AAA、BBB 操作人：本室操作人员 批准人：