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1、Four short words sum up what has lifted most successful individuals above the crowd: a little bit more.-author-date植物组织中过氧化氢酶活性测定实验40 植物组织中过氧化氢含量及过氧化氢酶活性测定 植物组织中过氧化氢酶活性测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和 解体。过氧化氢酶可以清除H2O2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此，植物组织中H2O2
2、含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。过氧化氢酶的活性测定紫外吸收法【原理】H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。【仪器与用具】 紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴；【试剂】0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）；0.1mol/L H2O2（用0.1mol/L高锰酸钾标定）。 【方法】 1.酶液提取：称取新鲜小麦 叶片
3、或其它植物组织0.5g置研钵中，加入23ml 4下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀将量瓶置5冰箱中静置10min，取上部澄清液在4000rpm下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液。5下保存备用。2.测定：取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表40-2顺序加入试剂。表40-2 紫 外吸收法测定H2O2样品液配置表管 号S1S2S3粗酶液(ml)0.20.20.2pH7.8磷酸(ml)1.51.51.5蒸馏水(ml)1.01.01.0 25预热后,逐管加入0.3ml 0
4、.1mol/L的H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。 3.结果计算： 以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。 过氧化氢酶活性(u/gFW/min)= 式中 A240 = AS0 AS0加入煮死酶液的对照管吸光值； AS1, AS2样品管吸光值； Vt粗酶提取液总体积（ml）； V1测定用粗酶液体积（ml）； FW 样品鲜重（g）； 0.1A240每下降0.1为1个酶活单位（u）； t加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。 【注意事项】 凡在240nm下有强吸收的物质对本实验有干 扰。【思考题】 1.影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些?2.过氧化氢酶与哪些生化过程有关?-