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1、Four short words sum up what has lifted most successful individuals above the crowd: a little bit more.-author-date植物组织石蜡切片的制备与染色观察植物组织石蜡切片的制备与染色观察植物组织石蜡切片的制备与染色观察一 实验器具与试剂1.器具小培养皿、锡箔纸、尖头和平头镊子、剪刀、刀片、吸水纸、移液枪、1ml枪头、移液器和移液管、量筒（50mL，100mL，250mL，500mL）、废液瓶、水浴锅、酒精灯、三角瓶、真空锅、烘片箱、木筷、石蜡切片机、染色缸、载玻片、盖玻片、显微镜等2.试
2、剂100%酒精、100%二甲苯、100%叔丁醇、石蜡块、蒸馏水、多聚甲醛、中性树胶、甲苯胺蓝（TB）染色剂等二. 实验步骤1.溶液配制10PBS溶液： NaCl（国药或生工） 75.95g Na2HPO4.12H2O（国药） 25.07g NaH2PO4.2H2O （国药） 4.68g充分溶解后，用NaOH（国药）调PH7.0，定容1000mL，高压灭菌25min，4保存。4%多聚甲醛固定液： 1 PBS 100mL 1M/L NaOH 0.5mL水浴加热至60-70，在通风橱中加入4g多聚甲醛，待溶解后冷却至4，加入100l的10%的浓硫酸调节pH为7.0。2.材料准备 固定 取幼嫩的植物材
3、料，将植物组织剪成合适大小的小块，立即放入一个装有新配制的4%多聚甲醛固定液的小器皿中，固定液体积视材料多少而定，一般材料少时10ml材料较多时可放15ml，小器皿置于冰上。上面用锡箔纸盖好后扎孔。抽真空使得材料浸没其中（反复真空和非真空状态，并保固定液不要沸腾），待材料下沉到管底。具体操作如下： 放置在冰上的器皿放入真空锅里，盖上锅盖，拧开盖上螺旋，拧紧侧面螺旋，打开开关当压力表上显示到0.2时可计时10分钟。 关上锅盖螺旋，拧松侧面螺旋，外面空气会进入真空锅内，当内外压力相等时计时10分钟。 再重复步骤，换一次新的固定液，4过夜固定，但不要超过16h。(2) 漂洗用1PBS缓冲液（PH 7
4、.0）漂洗组织块2次，每次4放置30min。注意PBS容易结晶可75水浴加热。(3) 脱水在翻转下进行梯度乙醇和叔丁醇脱水：30%、40%、50%、60%、70%乙醇（此步可保存可过夜）、10%叔丁醇+20%水+70%乙醇、20%叔丁醇+10%水+70%乙醇、30%叔丁醇+70%乙醇、50%叔丁醇+50乙醇、70%叔丁醇+30%乙醇、90%叔丁醇+10%乙醇、100%叔丁醇（2次），30min/次。补充：若没有叔丁醇，可替换一下步骤进行30%、40%、50%、60%、70%、80%、95%、100%乙醇，然后1/4二甲苯+3/4乙醇、1/2二甲苯+1/2乙醇、3/4二甲苯+1/4乙醇、100%
5、二甲苯(2次)，每步均30 min。(4) 浸蜡用刀片将石蜡块切成碎末，逐步加入到上述最后一步的材料中大约是1/4的量，37烘箱过夜；继续加石蜡，同时放入到42，待石蜡不继续熔化时放入到60烘箱中，等待全部融化后，将叔丁醇和石蜡的混合物换成纯蜡，每天上午下午（9点）各换纯蜡一次，持续3天。(5) 包埋最后将材料包埋备用。在切片前将包埋块4冰箱中保存，可保存至少一年。3.组织切片 切片将包埋的材料用切片机进行组织学切片，切成8m厚度的连续的薄片，用刀片把蜡片切成合适的长度（能放在载玻片上即可）。 展片和烘片转入42的水中展片2-3min，用氨基载玻片将其捞出，放置于42过夜烘片（烘过的片子可以再放干燥剂的条件下保存数周。 脱蜡将烘过的片子浸没在100%的二甲苯脱蜡两次，每次15min； 复水梯度乙醇复水：100%、95%、85%、70%、60%、30%、水两次，每步3min。 染色0.05% TB（甲苯胺蓝）染色37,30 min。染色时间不要太久，中间可以拿出来看一下。然后把片子置于一个盛水的容器中，把片子浸入再提出，不要直接用水冲，直至水变清，拿出晾干。二甲苯：无水乙醇 =1：1 10 s 。100%二甲苯 2min, 2次。滴上12滴中性树胶（加拿大树胶）后盖上盖玻片（不要有气泡)。 镜检观察。-