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1、请同学们在课本P32页上找出：1.细胞融合的概念2.诱导动物细胞融合的方法3.意义并用笔画出来2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体2.2.动物细胞融合过程：动物细胞融合过程： 诱导诱导 细胞膜穿通细胞膜穿通细胞膜融合细胞膜融合细胞核融合，形成单核杂种细胞细胞核融合，形成单核杂种细胞动物细胞融合动物细胞融合杂种细胞杂种细胞愈伤组织愈伤组织杂种植株杂种植株植物细胞植物细胞A植物细胞植物细胞B 原生质体原生质体A原生质体原生质体B植物体细胞杂交植物体细胞杂交去壁去壁原生原生质体质体融合融合植物植物组织组织培养培养物理法物理法化学法化学法生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒动物
2、细胞动物细胞A动物细胞动物细胞B杂种细胞杂种细胞常用方法4 4、原理、原理膜的流动性5 5、最有价值的应用、最有价值的应用制备单克隆抗体3 3、过程、过程不同DNA的两个细胞灭活的病毒PEG杂交细胞v 细胞融合完成的标志细胞融合完成的标志: :细胞核融合成一个核细胞核融合成一个核主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振荡、电激）荡、电激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质
3、体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法膜的流动性膜的流动性膜的流动性、膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目、植物、动物细胞融合的比较、植物、动物细胞融合的比较 1.能使动物细胞融合的特有的诱导方法是A离心 B灭活的病毒 C电刺激 D振动B 2.动物细胞融合的目的中最重要的是A克服远源杂交不亲和 B制备单克隆抗体C培育新物种 D生产杂种细胞B 原始的方法原始的方法获得抗体，特异性差，纯度低。 想获得单一抗体想获得单一抗体，必须用单个B淋巴细胞进行无性繁殖，通过克隆形成细胞群。 问题：问题：体外培养的条件下，
4、一个B淋巴细胞是不可能无限增值的，如何使单个淋巴细胞增殖呢？单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备设计方案：设计方案： 一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖杂种细胞杂种细胞1 1、单克隆抗体制备过程、单克隆抗体制备过程 注射注射 抗原抗原效应效应B淋巴淋巴细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选，继续培养筛选，继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体诱导其融合的方诱
5、导其融合的方法有哪些？法有哪些？（1）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细淋巴细胞融合？胞融合？思考思考： 因为因为B淋巴细胞具有淋巴细胞具有分泌特异性抗分泌特异性抗体体的能力，而骨髓瘤细胞具有在体的能力，而骨髓瘤细胞具有在体外培养条件下外培养条件下大量增殖大量增殖的本领，所的本领，所以由某种以由某种B淋巴细胞和骨髓瘤细胞淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞，融合产生的杂交瘤细胞，能够在体能够在体外大量繁殖，并且产生特定的单克外大量繁殖，并且产生特定的单克隆抗体。隆抗体。（2）单克隆抗体制备过程中应）单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞用哪些细胞 工程技术手段？工程技术手
6、段？动物细胞融合技术动物细胞培养技术 ？ ？ 抗原抗原 效应效应B细胞细胞筛选 筛选 AA型、型、BB 型型 A 型型B型型AB型杂交瘤细胞型杂交瘤细胞能产生所需抗体的细胞能产生所需抗体的细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞（3）制备过程为何）制备过程为何要经过两次筛选？要经过两次筛选？比较项目第一次筛选第二次筛选原理在选择性培养基中添在选择性培养基中添加某种药物，特异性加某种药物，特异性杀死骨髓瘤细胞和骨杀死骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞自身融合的髓瘤细胞自身融合的细胞细胞抗原抗原抗体的特抗体的特异性结合异性结合目标杂交瘤细胞杂交瘤细胞既能无限增殖，既能无限增殖，又能产生特异性又能产生特异性抗体的杂交瘤细抗体的
7、杂交瘤细胞胞【堂堂清】【堂堂清】1.单克隆抗体的优点是单克隆抗体的优点是_特异性强、灵敏度高、可大量制备特异性强、灵敏度高、可大量制备2.单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的原因是原因是_每一种每一种B B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体3.产生抗体的细胞是产生抗体的细胞是_ 产生单克隆抗体的细胞是产生单克隆抗体的细胞是_效应效应B B细胞（浆细胞）细胞（浆细胞）杂交瘤细胞杂交瘤细胞4.杂交瘤细胞的特点杂交瘤细胞的特点:_既能无限增殖，又能分泌特异性抗体既能无限增殖，又能分泌特异性抗体5.首次筛选是为了获得首次筛选是为了获得_ 第二次
8、筛选时为了获得第二次筛选时为了获得_杂交瘤细胞杂交瘤细胞既能无限增殖，又能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞第一步：从一只小鼠体内提取第一步：从一只小鼠体内提取T T淋巴细胞，然后与骨髓淋巴细胞，然后与骨髓瘤细胞诱导融合。瘤细胞诱导融合。第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。第三步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外第三步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中
9、就可以提出破条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中就可以提出破伤风杆菌单克隆抗体。伤风杆菌单克隆抗体。1、已注入过灭活破伤、已注入过灭活破伤风杆菌的小鼠风杆菌的小鼠2、B淋巴细胞淋巴细胞3、选择培养基、选择培养基4、必须经过专一抗体阳性检验、必须经过专一抗体阳性检验应用：应用：生物导弹4 4、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是（克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是（ ） A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T
10、淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A5 5、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和和B B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是能存活、增殖的细胞是B B淋巴细胞淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B B淋巴淋巴细胞自身融合细胞细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞融合细胞杂交瘤细胞A A、 B B、 C C、 D D、 A6下图是单
11、克隆抗体制备过程示意图，据图回答：（1）图中）图中A过程是从小鼠的脾脏中取得过程是从小鼠的脾脏中取得_细胞，该细胞能够产生细胞，该细胞能够产生_。从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_类物质。类物质。（2）B过程是一个过程是一个_过程，该过程的过程，该过程的进行需要灭活的进行需要灭活的_或或_的诱导。的诱导。效应效应B抗体抗体抗原抗原细胞融合细胞融合 病毒病毒 聚乙二醇聚乙二醇 7右图为某同学根据杂交右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：方案。据图回答：（1）该
12、方案能达到预）该方案能达到预期效果吗？期效果吗？。原因是。原因是 。（2）图中）图中为为过程，过程，常用常用作为诱导剂。作为诱导剂。该细胞继承了该细胞继承了 ，因此不仅能分泌，因此不仅能分泌 ，还有，还有 本本领。领。（3）该方案的目的是）该方案的目的是。不能不能 没有将抗原注入小鼠体内，无法没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的获得产生单一抗体的B淋巴细胞淋巴细胞.细胞融合细胞融合 灭活病毒灭活病毒 双亲细胞的遗传物质双亲细胞的遗传物质 特异性抗体特异性抗体 在体外培养条件下大量增殖在体外培养条件下大量增殖 制备单克制备单克隆抗体隆抗体 7 7、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。、
13、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。（1 1）_技术是单克隆抗体技术的基础。技术是单克隆抗体技术的基础。（2 2）根据培养基的用途分类，图中）根据培养基的用途分类，图中HATHAT培养基属于培养基属于_培养基。培养基。（3 3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是_。（4 4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用用_。（5 5）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_特点，又具备淋特点，又具备淋巴细胞的巴细胞的_特点。特点。（6 6）淋巴细胞是由动物体）淋巴细胞是由动物体_中的中的_细胞分化、发育而来。细胞分化、发育而来。（7 7）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是_。动物细胞培养动物细胞培养选择选择特异性强特异性强,灵敏度高灵敏度高灭活的病毒灭活的病毒在体外大量增殖在体外大量增殖分泌特异性抗体分泌特异性抗体骨髓骨髓造血干细胞造血干细胞主动运输主动运输