PCR实验室SOP文件.doc
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1、/PCR实验室作业指导书 文件编号:第2版编制: 审核: 批准: 生效日期:2012年 月 日/目 录序号主 题 内 容 代 号页 号1PCR实验室的设置及管理2PCR实验室工作制度3实验室内务管理及清洁制度4PCR实验室人员的配置及管理5实验人员的培训程序6PCR实验室清洁程序7样品编号的标准操作程序8PCR基因扩增实验室的要求9PCR废弃物的处理程序10试剂准备区工作制度、标准操作、程序文件11标本制备区工作制度、标准操作、程序文件12扩增区工作制度、标准操作、程序文件13产物分析区工作制度、标准操作、程序文件14PCR标本的保存操作程序15PCR标本的采集、运送、接收程序16PCR生物安
2、全防护措施17PCR实验室化学试剂配18PCR实验室记录管理制度19PCR应急处理程序20PCR试剂的质检标准操作程序21PCR消耗品进购质检贮存程序22PCR室内质量控制操作程序23PCR室间质量控制操作程序24PCR温度校准标准操作程序25伯乐PTC-200型核酸扩增仪操作规程26ABI 7300型荧光定量扩增仪操作维护规程27DYY-6C电泳仪操作维护规程28Bio-Rad GelDoc_XR凝胶成像仪使用说明书29恒温水浴箱操作维护规程30旋涡振荡器操作维护规程31普通离心机操作维护规程32高速离心机操作维护规程33低温高速离心机操作维护规程34冰箱操作维护规程35超低温冰箱操作维护规
3、程36生物安全柜操作维护规程37超净工作台操作维护规程38移液器操作维护规程/ 修 订 页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期1234567891011121314151617181920/PCR实验室的设置及管理1目的:建立实验室的合理设置和科学管理,防止实验污染,保证检测结果的可靠性。2适用范围:本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。3负责人: 4细则:41 分子诊断室为检验科下设的专业实验室,从事基因扩增检测及相关实验工作。42 本实验室采用普通RT-PCR扩增和实时荧光定量PCR两种技术作为临床基因诊断的主要手段,实验室分为四个区:试剂准备区(第一区)、标本
4、处理区(第二区)、扩增区(第三区)及产物分析区(第四区)。每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服,并有明显的区分标识。各区标签颜色:红色(第一区)、白色或绿色(第二区)、蓝色(第三区);专用工作服:粉红色(第一区)、白色(第二区)、蓝色(第三区)。标本的接收则在检验科标本接收处进行。43 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等,不可混用。44 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP文件。45 严格遵守从“试剂准备区标本处理区扩增区产物分析区”的单一流向制度,不得逆向进入前一工作区。46 非本实验室工作人员,未经许可不得入内;进
5、修、实习或其他科室人员因需要,进入实验区域(试剂准备区、标本处理区、扩增区、产物分析区) 需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行,在本实验室人员监督指导下进行。47 实验完毕后做好清洁消毒工作。5. 本文涉及以下图表:1.实验室设计平面图/PCR实验室工作制度1目的 :保持良好的工作环境,以确保检测结果的可靠性,防止交叉污染,防止差错、事故及纠纷的发生。2适用范围:所有本实验室人员。3负责人: 4细则:41 本实验室用于基因扩增检测及相关实验工作,不得进行其它实验操作。42各区的用品不得混用。43在各区的实验操作过程中,操作者必须戴手套和帽子,严格按照操作规程。44试剂准备区只能进行试剂的贮
6、存及配制等相关操作(见相关SOP文件)。45标本处理区只能进行临床标本的保存,核酸提取、保存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成(见相关SOP文件)。46扩增区只能进行DNA或cDNA的扩增、实时荧光PCR扩增产物的分析(见相关SOP文件)。47产物分析区只能进行RT-PCR扩增产物的分析(见相关SOP文件)。4. 8进行实验时严格执行本实验室的各项操作规程,及时做好各种操作记录,力求准确、可靠。实验完毕,做好清洁、整理及分析统计等工作。49室内仪器由专人负责,未经许可,不得随意使用或挪用;爱护使用仪器,定期进行保养与维修。4. 10 爱护医院财产,注意安全;离开实验室前应关好门窗
7、,检查水、电等。/PCR实验室内务管理及清洁制度1目的:保证实验室日常内务管理及清洁工作顺利进行。2适用范围:实验室相关人员及相关清洁工人。3负责人: 4细则:41内务管理制度a. 非本室工作人员未经允许不得进入实验室。b. 各区的用品不得混用。c. 实验人员要有强烈的时间观念,按时上下班,不迟到、早退。d. 进入实验室的工作人员必须遵守实验室的单一流向的规定,禁止逆向走动。e. 所有仪器(如PCR扩增仪)须有专人负责,并有使用维护记录;实验人员必须熟悉仪器性能后方允许操作,并严格遵守操作规程。f. 所有试剂进购、配制、质检、使用均要有记录,未经允许不得随意带出本实验室。g. 各区的各种清洁消
8、毒均应有记录,工作衣消毒时注意各区应分开进行处理。h. 注意保持实验室卫生整洁,严禁在室内抽烟、吃零食,非实验操作人员应尽量少入。i. 每天了解仪器运转情况及试剂使用情况,负责仪器的整洁,安全;下班前检查门、窗、水、电,节假日指定人员负责检查实验室的仪器、设备,确保安全。4.2 内务清洁制度a. 实验室地面保持平整、干净,通道要利于通行,没有无用的物品阻碍。 b. 合理规划实验室内物品,做到摆放整齐、有序,无用的或使用效率低的物品放置到储存处,常用的物品要容易寻找到。c. 抽屉、柜子、文件类物品要作好标记,以方便识别。d. 实验结束后用75%酒精对台面进行清洁,并经紫外灯进行消毒。e. 每天实
9、验结束后,紫外灯消毒60分钟后,依次关闭各区紫外灯并记录照射时间f. 搞卫生时,依次清洁四个区的实验台面和地面,各区清洁消毒工具均专用,不可混用,注意按照单一方向流程的原则来进行清洁。g. 处理好各区废弃物,高压消毒后集中处理。h. 每周将工作服交消毒洗涤,不同实验区的工作服分开洗 /PCR实验室人员的配置及管理1目的:保证实验室有足够数量的合格的具备开展该类实验能力的实验人员。2适用范围:适用于实验室人员配置、管理、培训及考核。3负责人: 4细则:41 人员要求a. 鉴于PCR技术要求的特殊性、复杂性,本实验室工人员应为有经验的医学检验专业人员。b. 实验室工作人员应参加上级举办的PCR技术
10、培训,并取得合格证。c. 对于新进入本室的人员,如尚未取得PCR技术培训合格证,应在实验室有培训合格证的上级技术人员的指导下进行实验工作,实验报告由有资格人员出具,并应在最短的时间内取得上岗培训合格证。d. 实验室工作人员上岗前必须学习并掌握PCR实验室管理文件。42 人员配置a. 实验室应根据工作需要配备足够的工作人员,目前实验室有主管技师2人、技师?人,?人都已获得培训合格证,视工作量的增加和业务发展需要,会适当增加工作人员。b. 由实验室负责人负责全面管理、技术指导、解决与临床沟通及技术疑难问题;其他各级技术人员履行相应的工作职责。43 人员管理实验室建立所有工作人员的技术档案,包括:学
11、历、任职资格、发表论文、研究成果、培训等相关材料复印件。技术档案分文本档案和电子档案,文本档案每年更新1次,电子档案随时更新。5. 本文涉及以下图表:实验室主要负责人简历表 PCR实验室工作人员一览表 人员档案卡 实验室人员的培训程序1.目的: 保证实验室有足够的技术力量和科室适应长远发展的需要。2.适用范围: 核酸扩增荧光检测实验室实验人员及预备培训的人员。3.负责人: 4.细则:4. 1实验室负责人或负责人指定人员参加每年省CDC的室间质评总结会。4. 2实验室工作人员每12年至少参加1次PCR技术的省级或国家级继续教育项目,参加相关学术交流会议。4. 3安排未取得上岗培训合格证的工作人员
12、在合适的时间内参加技术培训。4. 4科室不定期组织实验室内部实验人员学习、更新核酸扩增方面的相关知识,提升自身的理论学习水平。特别是在标本接收区采血、接收标本的人员,需定期对其进行有关核酸扩增技术,标本采集、保存、运输等知识的培训。4. 5本实验室工作人员每年进行考核一次,考核内容:a)日常工作质量b)室内质控测评c)室间质控测评d)在抱怨处理中的表现4. 6本实验室工作人员均建立业绩档案,实行能进能出制度,不断吸收高质量人员,加强培训和提高, 对于不适合本室工作的人员要及时调离。5. 本文涉及以下表格 培训申请表 年度培训计划表 培训记录表 员工培训履历表 /PCR实验室清洁程序1目的:保证
13、实验室环境的整洁,防止污染。2适用范围:适于实验室工作环境、实验台面、工作服、移液器等的清洁消毒工作。3负责人: 操作人: 4细则:41 实验室地面必须平整、干净,通道要利于通行,没有无用的物品阻碍。42 合理规划实验室内物品,做到摆放整齐、有序,无用的或使用效率低的物品放置到储存处,常用的物品要容易寻找到。43 抽屉、柜子、文件类物品要作好标记,以方便识别。44 实验结束后用75%酒精对台面进行清洁,并用紫外灯进行消毒。45 每天对使用过的移液器用75%酒精进行擦拭。 46 实验过程中如发生标本或试剂外溅,应立即用75%酒精滴上,滤纸盖上半小时,然后用酒精擦洗,并用移动紫外灯消毒。 47 每
14、天实验前开启各区的通风系统,各区实验结束后,分别打开传递窗紫外灯、天花板紫外灯消毒实验室,每次开启 3060分钟。 48 待紫外灯消毒时间足够后,依次关闭各区紫外灯并记录。 49 依次清洁四个区的实验台面和地面,各区清洁消毒工具均专用,不可混用,注意按照单一方向流程的原则来进行清洁。 410 处理好各区废弃物,交医院集中处理。 411 每周将工作服交院洗衣房洗涤消毒,不同实验区的工作服隔开洗涤。5. 本文涉及以下表格实验室清洁消毒记录表 垃 圾 处 理 记 录 表 /PCR样品编号的标准操作程序1目的:保证标本编号的唯一性,也是准确发放报告的基础。2适用范围:使用核酸扩增荧光检测实验室所开展的
15、几?种检测项目:流感病毒、手足口病毒、霍乱弧菌等。3负责人: 操作人: 4细则:41 按检测类型分类标记根据检测项目的不同,每种检测项目对应标记一种唯一的代号。如流感病毒标记为 ?,手足口病毒标记为?。42 按标本接收顺序编号在同种检测类型的标本中,按标本检测顺序编号。如第一个检测流感病毒的标本编为?001,第二个检测流感病毒的标本编为?002,第三个检测结核的验单编为?003等。43 编号步骤a. 对接受的标本,根据编号的基本原则编号,每个样本对应一个唯一的编号(如?)。b. 在样品送检单和对应的样品管上作好相同的标记。c. 做好标本的接收记录,每个样本的记录都应包括以下信息:接收时间、送检
16、单位、患者姓名、性别、年龄、标本类别、标本状态、送标本者、接收人、标本编号等。d. 处理好样品、点样后,将反应管放入扩增仪上开始扩增。e. 扩增得到结果后,先在登记表上填入结果,作好记录,再一一把实验结果填入相应报告单。f. 发放检验报告单。5. 本文涉及以下图表:PCR标本接收记录表 PCR结果登记表表/PCR基因扩增实验室的要求1目的:规定在各区内所进行的工作及其操作。2适用范围:所有在本区内进行的工作。3负责人: 操作人: 4程序:实验室分四?区:试剂贮存、准备区;标本制备区;扩增区;产物分析区。进入各区严格按照单一方向进行,即试剂贮存、准备区标本制备区扩增区产物分析区。各区及其设备、物
17、品必须有明确的标记,严禁混用。进入PCR实验室的工作人员(含卫生员),都必须遵守实验室的规则,尤其严格遵守进入PCR实验室的唯一流向。不可进入PCR扩增后区打扫卫生,再返回扩增前区工作。防止非本室工作人员串岗,进入本室。尤其不得为找人,而逆向误入PCR实验室。总则(1) PCR实验室工作人员应具备医学检验、微生物检验基本知识,并受过PCR实验的基础知识和技能培训。(2) PCR实验室分试剂准备,样本准备,PCR扩增和产物分析四个室,各室的实验物品(含加样器,试管架,吸头,记录纸,笔等),不得混用,须贴上标签予以区别。(3) 实验室技术人员必须严格按照PCR实验室操作程序进行,包括实验室擦洗。台
18、面消毒,离心管,吸头的无菌灭活准备,仪器使用和废弃物处理等。(4) 进入实验室的工作人员必须更换各室不同的工作服(含帽和鞋),勤换洗工作服,以及遵守实验室的唯一流向的规定,严禁反向流动。(5) 进入PCR实验室后区的物品不许带进PCR实验室前区。每天实验开始前,必须清洁地面和消毒实验室前区。实验结束应紫外线消毒实验台面。每天下班前处理好废物,应关好水、电、煤气和门窗。(6) 定期校准和维修PCR仪、酶标仪及离心机、水浴箱等仪器设备。(7) 实验室内不得饮食、吸烟。4.1标本接收区a. 实验人员进入该区须穿本区白色工作服,接收标本须戴一次性手套。b. 记录实验室干、湿度,登记冰箱温度。使用带有本
19、区标识的记录本、纸和笔,每项记录,书写工整详细。c. 对送检的标本实行双签制度,并仔细检查是否符合检测要求,对有不符合要求的标本及时通知相关科室重新采样,并作记录,每份标本需给出唯一性编号。d. 本区所有废弃物分类装入垃圾袋,封好,在垃圾筐上套好新的垃圾袋,将垃圾带出实验室。e. 每次实验结束后,清洁实验台及地面打开紫外灯消毒30分钟。记录紫外灯使用情况。4.2试剂贮存、准备区a. 使用带有本区标识的记录本、纸和笔,每项记录,书写工整详细。b. 准备好的试剂送入下一区 ,还原实验台面,将本区所有废弃物分类装入垃圾袋,封口,在垃圾筐上套好新的垃圾袋,将本区垃圾带出实验室。c. 白色工作服留在本区
20、。d. 本区维持相对正压状态(开启缓冲区的排气扇)。实验结束后,清洁实验台及地面打开紫外灯消毒30分钟。4.3标本制备区a. 实验人员进入该区须在缓冲区更换专用蓝色工作服及拖鞋。实验中须使用一次性帽子,戴手套,手套在实验过程中疑有污染应立即更换。b. 将传入本区的试剂放入冰箱冷冻室试剂存放专区暂存。记录实验室干、湿度,登记冰箱温度。c. 将检测完的标本密封保存在毒种间-70冰箱中,然后记录标本的保存情况。d. 使用带有本区标识的记录本、纸和笔,每项记录,书写工整详细。e. 按试剂盒说明书对标本进行处理,将处理好的标本在生物安全柜内加样,记录标本的处理过程。f. 将加样后的试剂传送下一区,还原实
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