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1、名师归纳总结 精品学习资料 - - - - - - - - - - - - - - -文件类型作业指导书文件编号 NIM-ZY-HX-0000-YJ-117 讨论所化学所第 1 页 共 6 页Waters Xevo TQ-S 液相色谱 /质谱联用仪 三重串连四级杆质谱 操作指南1. 适用范畴：本使用规范适用于有机室所备有的 用仪 三重串连四级杆质谱 ；2. 仪器设备的主要技术指标：Waters Xevo TQ-S 液相色谱 /质谱联1 梯度性能： 保留时间标准偏差（ SD）0.047min；2 ESI 正离子灵敏度和精密度：测试样品：磺胺二甲基哒嗪Sulfadimethoxine,浓度： 0.
2、1pg/ l指标要求：平均信噪比（ S/N）3000:1；平均峰面积 60000；峰面积相对标 准偏差（ %RSD）3.0%；保留时间标准偏差（ SD）0.047min 测试结果：信噪比（ S/N）:4500psi；峰面积： 120000；峰面积相对标准偏差（%RSD）：2.5%；保留时间标准偏差（ SD）：0.00min,均符合指标要求；3 ESI 负离子灵敏度和精密度：测试样品：氯霉素 chloramphenicol,浓度： 0.05pg/ l 指标要求：平均信噪比（ S/N）400:1；平均峰面积 1000；峰面积相对标准 偏差（ %RSD）3.0%；保留时间标准偏差（ SD）0.047
3、min测试结果：信噪比（S/N） :520psi；峰面积： 1500；峰面积相对标准偏差（%RSD）：2.8%；保留时间标准偏差（ SD）：0.00min,均符合指标要求；4 系统精密度（ TUV/PDA ）：峰面积相对标准偏差（ %RSD）0.5%；峰高相对 标准偏差（ %RSD）0.9%；5 NanoFlow 正离子灵敏度 指标要求：峰强（ m/z =785.8）1 10 7,测试样品：Glu-Fibrinopeptide B,浓度： 100fmol/ l 测试结果：峰强度（ m/z =785.8）：1.48 10 7；符合指标要求；6 TRIZAIC 正离子模式 MS 说明：测试样品：
4、ADH T19, PHO T33, ENL T4, BSA T59, ENL T43, ADH T17, BSA 编写李秀琴审核人批准人 第 1 页,共 6 页 日期2022.1 细心整理归纳 精选学习资料 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师归纳总结 精品学习资料 - - - - - - - - - - - - - - -文件类型作业指导书文件编号 NIM-ZY-HX-0000-YJ-117 讨论所化学所第 2 页 共 6 页T10, PHO T88 指标要求：保留时间标准偏差：0.25%测试结果： ADH T19 ：标准偏差为
5、0.02% 23.77min；PHO T33：标准偏差为 0.03% 25.12min；ENL T4：标准偏差为 0.02% 21.83min；BSA T59：标准偏 差为 0.01% 21.58min；ENL T43：标准偏差为 0.04% 22.33min；ADH T17 ：标 准偏差为 0.03% 23.31min；BSA T10：标准偏差为 0.02% 24.41min；PHO T88：标准偏差为 0.03% 24.81min 7 系统性能测试 一维系统精密度测试： 测试样品 17-OHP；一维保留时间重复性 PDA指标 ：保留时间标准偏差 SD: 1.0s；一维峰面积重复性 PDA
6、指标：峰面积相对标准 偏差 %RSD: 0.5%；一维峰高重复性 PDA指标 ：峰高相对标准偏差 %RSD: 0.9%；二维系统精密度测试： 测试样品 17-OHP；二维保留时间重复性 PDA指标：保留时间标准偏差 SD: 1.0s；二维峰面积重复性 PDA 指标：峰面积相对标准 偏差 %RSD: 0.5%；二维峰高重复性 PDA指标：峰高相对标准偏差 %RSD: 0.9%；全部检测方式的回收率指标：90.0% 3. 仪器设备的使用环境要求：1 电力要求：仪器室电源要求相对稳固,电压变化要小,最好配备不间断稳 压电源,防止意外停电；2 工作温度： 19-22 度,不要超过 25,保持恒温；3
7、相对湿度： 50%-70% 4. 操作程序：4.1 开机 4.1.1 打开电脑,第一打开自动进样器电源,再逐一打开质谱电源和 UPLC各电源,各部件通过自检后,双击工作站图标进入Masslynx工作站；4.1.2 挑选 InstrumentMS Tune进入调谐界面；从调谐界面挑选Vacuun 第 2 页,共 6 页 编写李秀琴审核人批准人日期2022.1 细心整理归纳 精选学习资料 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师归纳总结 精品学习资料 - - - - - - - - - - - - - - -文件类型作业指导书文件编号 N
8、IM-ZY-HX-0000-YJ-117 讨论所化学所第 3 页 共 6 页pump,打开真空泵,开头抽真空；机械泵和涡轮分子泵开头工作；4.1.3 质谱上的真空灯开头闪耀, 当系统达到真空状态, 灯变为绿色, 不再闪烁 ,同时观看调谐界面 Diagnostics Turbo Speed 泵转速达到 100%即可,达到实验状态大约要抽真空 4小时（留意：真空规,测量工具,无反常状况通常无需打开,特别在刚开头抽真空时不要打开；）4.1.4 气源压力设置：氮气： 90-100psi；氩气： 0.05Mpa,不超过 0.1Mpa（实验前确认氩气瓶压力,低于 4.2 预备 UPLC 系统1Mpa时需更
9、换氩气；）4.2.1 预备流淌相： 用0.22 m 的膜过滤缓冲液, 全部的缓冲液和超纯水都要新配制,超纯水和缓冲液使用不得超过二天；缓冲盐肯定要可挥发的, 而且浓度在2mM-5mM 之间,不要超过 10mM（注：如流淌相含有缓冲盐,用完需使用大比 例水相长时间冲洗系统和色谱柱,如流淌相含有酸,必需为挥发性酸,浓度范畴为0.01%-0.1%,进样器高压密封垫要求PH2,不能使用三氟乙酸、七氟丁酸等离子对试剂）；有机相要使用原装进口的色谱纯；（2） SW+Purge（弱洗：10%ACN+90%纯水或者与流淌相梯度初始比例相同）用于清洗泵头和密封清洗；Wash（强洗： 90%ACN+10%纯水）；
10、（3）预备样品：全部样品最好都要用流淌 相初始梯度比例的溶剂来溶解,并用 0.22 m的膜过滤；4.2.2 初始化 UPLC泵：在 Masslynx主页面上点击 MS Console,进入系统掌握 界面,点击左边 Quaternary Solvent Manager挑选CONTROL Prime A/B/C/D solvent,挑选 A/B/C/D 输入1min,假如更换了流淌相就输入 3min,按start；4.2.3 初始化 UPLC自动进样器： UPLC掌握台上挑选 Sample Manager,挑选 ControlPrime syrings,灌注进样器和洗针系统； 挑选 Sample
11、syringe and syringes,Number of cycles 一般选 1,但在更换洗针溶液后选 3；完成后, UPLC自动进样 器预备好；4.2.4 灌注完泵和自动进样器后 UPLC预备好；4.3 建立一个 Project 假如在已有的 Project 下进行试验,此步可以不做；编写李秀琴审核人批准人 第 3 页,共 6 页 日期2022.1 细心整理归纳 精选学习资料 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师归纳总结 精品学习资料 - - - - - - - - - - - - - - -文件类型作业指导书文件编号 N
12、IM-ZY-HX-0000-YJ-117 讨论所 化学所 第 4 页 共 6 页从 Masslynx 主窗口挑选 FileProject Wizard,显现对话窗口,点击 Yes,输入 Project Name,挑选 Create using existing project as template.点击 Browse 挑选 project 的模板；4.4 预备质谱 假如在已有的 Project 下进行试验,此步可以不做；4.4.1 MS Tune,第一打开氮气,再开高压（红色表示高压已关,绿色表示高压已开）；（注：肯定要打开氮气和高压才能开流淌相,和氮气 ）；关闭流淌相后才能关高压4.4.2
13、 点击 ES+ Source. 输入以下各参数 : Capillary kV: 3；Cone V: 30；DesolvationTemp : 550；DesolvationL/hr: 800；Cone L/Hr: 50；以下参数最 好直接使用 intellistart 自动校正仪器质量数时自动生的参数：LM Resolution 1: 3；HM Resolution 1: 15；Ion Energy 1: 0.5；LM Resolution 2: 3；HM Resolution 2: 15；Ion Energy 2: 0.5；Collision: 2 ；4.5 ESI 调谐 调出目标化合物的正
14、确质谱参数；4.5.1 把调谐液放入 A/B/C 号位（注： 浓度在 0.1-1ppm之间,依据实际的灵 敏度调整样品浓度 ）；4.5.2 把流淌相的流速设为0.2ml/min ,有机相和水相比例为1:1；点击 Tune界面下的 Fluidics,点击 Purge syringe 灌注注射器； 设置 Infusion 流速 5uL/min,依据灵敏度可适当调整；设置Flow State 模式（ Infusion:直接进样； Combined:液相和样品混合进样； LC:液相进样；Waste:废液 ）；4.5.3 挑选 Xevo TQ-S MS Detector 下面的IntelliStart
15、：Sample Tune and Develop Method 点击 Start,调出界面,输入各参数,系统开头自动优化目标化 合物的质谱参数；4.6 建立质谱的 MRM 方法；挑选 InstrumentMS Method 进入质谱方法编辑界面； 打开新建质谱方法窗口,再点击 MRM ,按调谐结果输入以下参数：离子模式、化合物名称、母离子质量编写李秀琴审核人批准人 第 4 页,共 6 页 日期2022.1 细心整理归纳 精选学习资料 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师归纳总结 精品学习资料 - - - - - - - - - -
16、 - - - - -文件类型作业指导书文件编号 NIM-ZY-HX-0000-YJ-117 讨论所 化学所 第 5 页 共 6 页数、子离子质量数、离子驻留时间、锥孔电压、碰撞能量和 MRM 运行时间等；4.7 建立 UPLC 方法；挑选 Instrument Inlet Method 进入 UPLC 方法编辑界面；逐一编辑泵的方法、自动进样器的方法和紫外检测器的方法等；最终把 4.8 建立样品运行序列表,运行采集数据；UPLC 的方法命名储存；在 Masslynx 主界面上点击 FileNew,新建序列表,输入文件名、注释、质谱 方法、液相方法、瓶号、进样体积等参数,最终把编辑好的序列表命名
17、储存；4.9 处理数据；4.10 关机一般质谱仪部分不需要关机,不用时只要保持在Standby 状态下即可；但如果长时间不用,或是对仪器进行清洗和修理时需要关机；4.10.1 第一停止液相色谱流速, 假如仍需要冲洗色谱柱, 可以将液相色谱管路 从质谱移开到废液瓶；4.10.2 点击 MS Tune进入调谐窗口,点击 Standby,关闭高压,让 MS进入待机 状态时,指示灯会由绿色变成红色；4.10.3 等脱溶剂气温度降到常温,关闭氮气；4.10.4 挑选 OptionVent,这时质谱开头泄真空,待机械泵停止运行,同时观 察调谐界面 Diagnostics Turbo Speed 泵转速为
18、0时即可关闭质谱电源；5. 仪器基本保护与使用留意事项：5.1 仪器室要保持洁净、洁净、无尘；配套设施布局合理；5.2 开高压之前肯定要先开氮气,关氮气之前肯定要先关高压；5.3 溶剂和流淌相的要求,全部的流淌相都要用0.22 m的滤膜过滤,水相要用前新配,并不得超过两天；样品必需使用 0.22 m的滤膜过滤 ；5.4 ESI 离子化与溶剂亲密相关,在使用某些溶剂和添加物需要留意以下几个方面：三氟乙酸（TFA）多用于蛋白质和多肽分析, 但对 ESI 离子化有抑制效应：三乙胺（TEA ）在 m/z 102 处有较强的 M+H+ 峰,有可能会抑制某些碱性化合物编写李秀琴审核人批准人 第 5 页,共
19、 6 页 日期2022.1 细心整理归纳 精选学习资料 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师归纳总结 精品学习资料 - - - - - - - - - - - - - - -文件类型作业指导书文件编号 NIM-ZY-HX-0000-YJ-117 讨论所化学所第 6 页 共 6 页ESI在正离子ESI 条件下的离子化,也有可能会增强某些碱性化合物在负离子条件下的响应；留意！以下的溶剂添加剂会产生严峻的离子化抑制,建议禁用：强酸强碱、不挥发性酸及相应的盐（如磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐等）、表面活性剂、离子对试剂；5.5 定期清洗样品锥孔
20、：关闭隔断阀,取下样品锥孔,先用甲醇：水：甲酸（45:45:10）的溶液超声清洗 20min,然后分别用超纯水和甲醇各溶液超声清洗 10 分钟,待晒干后再安装到仪器上；当灵敏度下降时,需要清洗 Ion Block 、二级锥孔和 RF lens；5.6 试验完毕要清洗进样针、进样阀等,用过含酸的流淌相后,色谱柱、离子 源都要用甲醇 /水冲洗,延长仪器寿命；仪器长时间不用,有管路用纯甲醇灌注；5.7 真空无油泵的密封圈 1年更换 1次；5.8 系统安全：留意！质谱连接的电脑禁止更换网络设置,禁止安装防火墙；尽量防止使用 U盘等移动储备设备；请使用光盘刻录来完成数据的拷贝；6. 突发情形的处理操作时假如发生电脑死机的情形,一般不需要关闭仪器部分, 只需强制关闭电脑主机,重新启动电脑,连接工作站,即可复原正常；假如发生停电事故,一般UPS 可以保证仪器不会立刻断电,但应当依据停电时间长短,实行相应的措施； （长时间断电（ 3 小时以上）建议停机） ；编写李秀琴审核人批准人日期2022.1 第 6 页,共 6 页 细心整理归纳 精选学习资料 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -