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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 学习好资料 欢迎下载医同学物化学试验教案试验项目3,5-二硝基水杨酸法（DNS法）测定仍原糖第 1 次课2 学时试验性质设计性试验教学目的和要1、明白糖的仍原性求2、把握仍原糖定量测定的原理和方法；3、熟识分光光度计的使用方法；教学重点与难 重点 : 绘制标准曲线的方法,分光光度计的使用原理和使用方法；点 难点：标准曲线的应用；1.试剂（1） 1mg/mL 葡萄糖标准溶液：精确称取干燥恒重的葡萄糖 100mg,加少量蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至 100mL,即含葡萄糖为 1.0mg/mL ；（2）3,5-二硝基水杨酸试剂： 称取 6.3 g 3
2、,5-二硝基水杨酸并量取 262 mL 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g 酒石酸钾纳溶于 500 mL 水中）,再加 5 g 结晶酚试验材料和 5 g 亚硫酸氢钠溶于其中,搅拌溶解,冷却后定容到 1000 mL 贮于棕色瓶中；（3）未知浓度仍原糖；2.材料小麦淀粉或玉米淀粉；3.器材分光光度计,天平,水浴锅,电炉,试管如干等；一、 试验原理 ：在 NaOH 和丙三醇存在下,3,5-二硝基水杨酸（DNS）与仍原糖共热后被仍原生成氨基化合物；在过量的 NaOH 碱性溶液中此化合物呈桔红色,在 540nm波特长有最大吸取,在肯定的浓度范畴内,仍原糖的量与光吸取值呈线性关系,
3、利用比色法可测定样品中的含糖量；试验内容HOOCOHNO 22+ 仍原 糖OH NH2NOHOOCNO2DNS（3氨基 5硝 基 水 杨酸 ） .黄色桔红色二、试验步骤：名师归纳总结 1.取 7 支具塞刻度试管编号,按表1 分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏第 1 页,共 31 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 学习好资料 欢迎下载水和 DNS 试剂,配成不同浓度的葡萄糖反应液；表 1 葡萄糖标准曲线制作管号1mg/ml 葡萄糖蒸馏水DNS 葡 萄 糖 含光密度值标准液 mL mL mL 量mg OD-540nm 1 0 0.5 0.5
4、 0 2 0.1 0.4 0.5 0.1 3 0.2 0.3 0.5 0.2 4 0.3 0.2 0.5 0.3 5 0.4 0.1 0.5 0.4 6 0.5 0 0.5 0.5 7（未知浓度仍原糖 ）0.5 0 0.5 0.5 将各管摇匀, 在沸水浴中精确加热5min 取出,冷却至室温, 用蒸馏水补足至5mL,加塞后颠倒混匀,在分光光度计上进行比色；调波长 测出 26 号管的光密度值；2.绘制标曲 540nm,用 1 号管调零点,分别以光密度值为纵坐标,葡萄糖含量 mg为横坐标, 在坐标纸上绘出标准曲线（电脑 Excel完成最好）；运算 7 号管仍原糖的百分含量；三、结果与运算 ：运算出
5、7 号管光密度值的平均值,在标准曲线上分别查出相应的仍原糖毫克数,按下式运算出样品中仍原糖和总糖的百分含量；查曲线所得葡萄糖毫克数 提取液总体积/ 测定时取用体积仍原糖 % = 100% 样品毫克数教学过程中师生活动设计糖的仍原性,具有仍原性的糖结构有何特点？提纲、板书设计名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 31 页精选学习资料 - - - - - - - - - 作业学习好资料欢迎下载试验原理及反应方程式,试验步骤中表1 及运算公式1、为什么要设置空白对比？2、标准曲线的定义？主要1 生物化学试验 ,何幼鸾、汤文浩,华师出版社,2022 参考资料2生物化学试验 ,董晓燕主
6、编,化学工业出版社,2022 1、让同学懂得糖定量测定的原理及方法；总结分析 2、强调标准曲线的绘制要点；3、需要和同学一起推导仍原糖浓度的公式医同学物化学试验教案试验项目 试验性质 教学目的 和要求教 学 重 点与难点试验材料第2 次课2 学时糖的呈色反应和仍原糖检验验证性试验1.明白糖类某些颜色反应的原理2.学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法重点：颜色反应鉴别糖的方法难点：鉴别糖的反应原理1、仪器：试管及试管架、滴管、移液管及恒温水浴锅2、试剂：莫氏试剂、塞氏试剂、托伦试剂；1%葡萄糖溶液、 1%蔗糖溶液、 1%淀粉溶液、1%果糖溶液、 1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液一、试验原理 ：试验
7、内容 萘酚反应：糖在浓无机盐作用下,脱水生成糠醛衍生物,后者在浓硫酸的作用下能与 萘酚生成紫红色物质,在糖液面与浓硫酸液面间显现紫色环；但一些非糖物质对此反应也呈阳性间苯二酚反应：在酸作用下,酮糖脱水生成羟甲基醛,后者可与间苯二酚作用生成红名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 31 页精选学习资料 - - - - - - - - - 学习好资料 欢迎下载色物质；此反应是酮糖的特异反应；醛糖在同样条件下呈色反应慢；托伦反应：戊糖在浓酸作用下脱水生成糠醛,后者可与间苯三酚结合生成樱桃红色物质；本反应常用来鉴定戊糖,戊糖此反应最快,可以和其他糖类区分；二、操作步骤 ： 萘酚反应：先
8、取 3 支试管,分别加入 1%葡萄糖溶液、 1%淀粉溶液、 1%蔗糖溶液,然后向 3 支试管中各加入 2 滴莫氏试剂,混匀；另外取 1 支试管,只加 2 滴莫氏试剂作为空白对比, 倾斜 4 支试管, 沿各试管壁缓慢加入浓硫酸约 1.5 mL,渐渐立起试管,切勿摇动；试管 中液体分成两层,浓硫酸在试液下面；在两液分界处有紫红色环显现；观看、记录各管颜色；间苯二酚反应：取 3 支试管,分别加入 1%葡萄糖溶液、 1%蔗糖溶液、 1%果糖溶液各0.5 mL ；再向各管分别加入塞氏试剂 2.5 mL ,混匀；将 3 支试管同时置于沸水浴中,留意观看颜色的变化及变化时间；托伦反应：取 3 支试管,分别加
9、入 1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液、 1%葡萄糖溶液各 0.1 mL,再向各管分别加入托伦试剂 1 mL ,混匀； 将 3 支试管同时置于沸水浴中,观看、记录颜色的变化及颜变化的时间；教学过程中师生活动设计观看和记录各管颜色及颜色变化的时间后,说出各管颜色变化的缘由；提纲、板书设计原理及操作步骤作业 1.简述 萘酚反应原理；2.可用何种颜色反应鉴别酮糖存在；主要1 生物化学试验 ,何幼鸾、汤文浩,华师出版社,2022 参考资料2 生物化学试验 ,董晓燕主编,化学工业出版社,2022 1、让同学把握糖显色反应的原理；总结分析2、给同学强调留意观看各管颜色变化的时间医同学物化学试验教案名师归纳总
10、结 - - - - - - -第 4 页,共 31 页精选学习资料 - - - - - - - - - 试验项目学习好资料欢迎下载第3 次课2 学时蛋白质等电点和沉淀反应试验性质 基础性试验1.明白蛋白质的两性解离性质；教学目的和要 求2.学习测定蛋白质等电点的方法；3.明白蛋白质变性与沉淀的关系及沉淀蛋白质的方法以及其有用意义；教学重点 与难点重点：学习测定蛋白质等电点的方法及沉淀蛋白质的方法；难点：蛋白质变性与沉淀的关系,沉淀的蛋白质不肯定表现为变性；变性的蛋白质不 肯定表现为沉淀；（一）材料新奇鸡蛋（二）试剂1、0.4%酪蛋白醋酸钠溶液 200mL 2、1.00mol/L 醋酸溶液 10
11、0mL 3、0.10mol/L 醋酸溶液 300mL 4、0.01mol/L 醋酸溶液 50mL 试验材料5、蛋白质溶液500mL :水=1:9）5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清的水溶液（新奇鸡蛋清6、 pH4.7 醋酸醋酸钠的缓冲溶液100mL 7、3%硝酸银溶液10mL 8、5%三氯乙酸溶液50mL 9、95%乙醇 250mL 名师归纳总结 10、饱和硫酸铵溶液250mL 第 5 页,共 31 页11、硫酸铵结晶粉末10000mL - - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 学习好资料 欢迎下载12、0.1mol/L 盐酸溶液 300mL 13、0.1mol/L 氢
12、氧化钠溶液 300mL 14、0.05mol/L 碳酸钠溶液 300mL 15、甲基红溶液 20mL （三）器具水浴锅、温度计、1.试验原理 ：200mL 锥形瓶、 100mL 容量瓶、吸管、试管及试管架蛋白质是两性电解质；在蛋白质溶液中存在以下平稳：最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液 pH 值；试验内容 蛋白质的沉淀反应可分为两类；（1）可逆的沉淀反应此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化,除去引起沉淀的因素后,蛋白质的沉 淀仍能溶解于原先溶剂中,并保持其自然性质而不变性；如大多数蛋白质的盐析作用 或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质；提纯蛋白质时,常利用此类反应；（2）不行逆沉淀反
13、应此时蛋白质分子内部结构发生重大转变,蛋白质常变性而沉淀,不再溶于原先溶 剂中；加热引起的蛋白质沉淀与凝固；蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属 于此类；蛋白质变性后,有时由于维护溶液稳固的条件仍旧存在（如电荷）,并不析出；因 此变性蛋白质并不肯定都表现为沉淀,而沉淀的蛋白质也未必都已变性；二、试验步骤：名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 31 页精选学习资料 - - - - - - - - - 学习好资料 欢迎下载（一）酪蛋白等电点的测定（1）取同样规格的试管4 支,按下表次序分别精确地加入各试剂,然后混匀；蒸馏水 0.01 mol/L 蜡酸 0.1 mol/L 蜡酸
14、 1.0 mol/L 蜡试管号（mL）（mL）mL 酸mL 1 8.4 0.6 - 2 8.7 - 0.3 3 8.0 - 1.0 4 7.4 - - 1.6 （ 2）向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液 1mL, 加一管,摇匀一管；此时 1、2、3、4 管的 pH 依次为 5.9、5.5、4.7、3.5；观看其混浊度；静置 10 分钟后,再观看其混浊度；最混浊的一管pH 即为酪蛋白的等电点；（二）蛋白质的沉淀及变性1、蛋白质的盐析 无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质；盐的浓度不同,析出的蛋白质也不同；如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出,而清蛋白就在饱和硫酸铵溶液中才能析 出
15、；由盐析获得的蛋白质沉淀,当降低其盐类浓度时,又能再溶解,故蛋白质的盐析 作用是可逆过程；加蛋白质溶液 5mL 于试管中,再加等量的饱和硫酸铵溶液,混匀后静置数分钟就 析出球蛋白的沉淀；倒出少量混浊沉淀,加少量水,观看是否溶解,为什么？将管内 容物过滤,向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止；此时析出沉淀为清蛋白；取出部分清蛋白,加少量蒸馏水,观看沉淀的再溶解；2、重金属离子沉淀蛋白质：重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物；取 1 支试管,加入蛋白质溶液 2mL,再加 3%硝酸银溶液 12 滴,振荡试管,有 沉淀产生； 放置片刻, 倾去上清液, 向沉淀中加入少量的水,沉淀是否溶解？为什么？3
16、、某些有机酸沉淀蛋白质取 1 支试管,加入蛋白质溶液2mL,再加入 1mL5%三氯乙酸溶液,振荡试管,观名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页,共 31 页精选学习资料 - - - - - - - - - 学习好资料 欢迎下载察沉淀的生成；放置片刻倾出清液,向沉淀中加入少量水,观看沉淀是否溶解；4、有机溶剂沉淀蛋白质取 1 支试管,加入 2mL 蛋白质溶液,再加入 2mL95%乙醇；观看沉淀的生成（如果沉淀不明显,加点 NaCl,混匀；5、乙醇引起的变性与沉淀取 3 支试管,编号；依下表次序加入试剂：试 剂蛋白质（mL）0.1mol/L 氢 0.1mol/L pH4.7 缓冲95%
17、乙醇溶液 氧化钠溶液 盐酸溶液 溶液管号1 1 1 1 2 1 1 1 3 1 1 1 振摇混匀后,观看各管有何变化；放置片刻向各管内加入水 8mL,然后在第 2,3号管中各加一滴甲基红,再分别用 0.1mol/L 醋酸溶液及 0.05mol/L 碳酸钠溶液中和之；观看各管颜色的变化和沉淀的生成；每管再加 溶解；说明各管发生的全部现象；教学过程中师生活动设计0.1mol/L 盐酸溶液数滴,观看沉淀的再蛋白质沉淀原理,什么是蛋白质变性？依据性质估计其应用 提纲、板书设计原理及简要操作步骤作业 1.什么是等电点？2.临床上为什么可以用蛋清或牛乳解救误服金属盐的病人？主要1 生物化学试验 ,何幼鸾、
18、汤文浩,华师出版社,2022 2022 参考资料2生物化学试验教程 ,王金亭,方俊主编,华中科技高校出版社,1、通过原理分析,帮忙同学懂得“ 沉淀的蛋白质不肯定表现为变性；变性的蛋白质不总结分析肯定表现为沉淀”；2、重点区分： “ 可逆沉淀” 与“ 不行逆沉淀”名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页,共 31 页精选学习资料 - - - - - - - - - 学习好资料 欢迎下载医同学物化学试验教案试验项目蛋白质和氨基酸显色反应第 4 次课2 学时试验性质基础性试验教学目的1.学习和明白常用的几种鉴定蛋白质与氨基酸的方法；和要求2.明白蛋白质与氨基酸的显色反应原理；教学重重点：蛋
19、白质与氨基酸的显色反应原理；点与难点难点：鉴定蛋白质与氨基酸的方法；试剂： 0.5%醋酸铅 1mL、10%NaOH、1%CuSO4试验材料器具：水浴锅、温度计、一、试验原理 ：200mL 锥形瓶、 100mL 容量瓶、吸管、试管及试管架1.双缩脲反应 biuret reaction 蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热,出现紫色或红色,此反应称为 双缩脲反应,双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度；2.苯环的黄色反应试验内容Tyr（Trp） +浓硝酸黄色黄色Phe+少量浓硫酸 +浓硝酸3.醋酸铅反应（半胱氨酸和胱氨酸）R-SH+2NaOH 2+ Na2S +PbPbS+2HClR-OH+
20、Na2S+H2O + PbS+2NaPbCl2+H2S二、试验步骤 ：1.双缩脲反应 biuret reaction 取 1 支试管,加乳蛋白溶液（蛋清:水=1:9）约 1mL 和 10%NaOH 约 2mL,摇匀,再加1%CuSO4溶液 2 滴,随加随摇；观看现象,记录；名师归纳总结 - - - - - - -第 9 页,共 31 页精选学习资料 - - - - - - - - - 学习好资料 欢迎下载2.苯环的黄色反应向 6 个试管中按下表加试剂,观看现象并记录；鸡蛋清溶液（蛋清 :水=1:9）管号 1 2 3 4 5 6 材料 鸡蛋清液 指甲 头发 0.5%苯酚 0.3%色氨酸 0.3%
21、酪氨酸（滴）4 少许 少许 4 4 4 浓硝酸（滴）2 20 20 4 4 4 现象逐滴加 10% NaOH 后 现象变化3.醋酸铅反应0.5%醋酸铅 1mL、 10%NaOH1mL、卵清蛋白1mL 三样试剂混匀加热,观看现象；然后冷却至 2030,加 10 滴浓 HCL,再将潮湿的醋酸铅试纸放于管口,加热,嗅其气味同时 观看试纸颜色变化；教学过程中师生活动设计含苯环的氨基酸有哪些？双缩脲反应颜色与什么相关？提纲、板书设计原理及简要操作步骤作业 1.在试验室如何区分核酸和蛋白质？2.黄色反应中为何会显现深浅不一的黄色？主要1 生物化学试验 ,何幼鸾、汤文浩,华师出版社,2022 2022 参考
22、资料2 生物化学试验教程 ,王金亭,方俊主编,华中科技高校出版社,总结分析1、试验过程中让同学重点观看颜色变化的过程；2、醋酸铅反应的每一步都要记录现象医同学物化学试验教案名师归纳总结 - - - - - - -第 10 页,共 31 页精选学习资料 - - - - - - - - - 学习好资料欢迎下载第5 次课2 学时试验项目 糖的薄层层析试验性质 基础性试验教学目的 1.明白薄层层析的基本原理；和要求 2.熟识薄层层析的操作过程；教学重 重点：把握薄层层析的吸附原理；点与难点 难点：把握安排系数,Rf 值；试验材料 四种糖样品、染色液、扩展剂、层析缸、层析板等一、试验原理 ：薄层层析 简
23、称 TLC是在吸附层析基础上进展起来的一种微量而快速的层析法,它是在吸 附剂或支持剂匀称涂布的薄层上进行的,故称薄层层析；为了使所要分析的样品各组分得到 分别,必需挑选合适的吸附剂；硅胶、氧化铝和聚酰胺是广泛采纳的吸附剂,在吸附剂或支 持剂中添加合适的粘合剂后再涂布,可使薄层紧贴在玻璃板上；糖是多羟基化合物在硅胶G 薄层上展层时,被吸附的强弱有差异,同时在绽开剂中溶解性质也有差异；吸附力主要与糖的相对分子质量和羟基数有关,一般为三糖二糖单糖,醛糖酮糖脱氧糖；经过适当的溶剂绽开后,糖在薄板上的移动速度是戊糖己糖双糖三糖；薄层层析与其他方法比有明显的优点：层析时间短、样品用量范畴大 1 g-0.5
24、g、观看结 试验内容 果便利、可以分别多种化合物等,其灵敏度比纸层析高 10-100 倍,显色方法甚至可以用腐蚀 性显色剂；而且薄层层析法操作便利,设备简洁,所以薄层层析法目前应用范畴相当广泛；二、试验步骤 ：1点样选取制备好的薄板一块,在距底边1.5cm 的直线上匀称选4 个点；用毛细管分别点上不同的糖样品于4 个点,样品量掌握在5-10 g,斑点直径不超过3mm；点样完毕,立刻用电热吹风机吹干样点；2展层将薄板置于盛有层析溶剂的层折缸中,自下向上展层, 当展层溶剂到达离薄板顶端约1cm 处时取出薄板,在溶剂前沿处作一记号,于80下烘干 5min ；3显色名师归纳总结 - - - - - -
25、 -第 11 页,共 31 页精选学习资料 - - - - - - - - - 学习好资料 欢迎下载除尽溶剂后, 向薄层板上喷雾糖显色剂,颜色；三、试验结果 ：于 80下烘干 10min ,就各种糖分别显出不同的（1）登记各斑点的位置、颜色,运算 Rf 值；（2）鉴定混合糖中糖的种类,并绘出层析图谱；教学过程中师生活动设计仍有哪些层板方法？提纲、板书设计原理及简要操作步骤作业何谓 Rf 值？ Rf 值与什么因素有关？2022 主要参考1 生物化学试验 ,董晓燕主编,化学工业出版社,2022 2 生物化学试验教程 ,王金亭,方俊主编,华中科技高校出版社,资料1、点样是本试验的关键,老师在指导同学
26、操作时,强调点样要轻、快,稳、小并且点样点要总结分析 集中；2、放展板时,点样点不要浸如展层溶液中医同学物化学试验教案名师归纳总结 试验项目酶的特性第6 次课2 学时第 12 页,共 31 页试验性质基础性试验教学目的把握酶促反应速度的几个主要影响因素和要求明白淀粉水解程度的鉴定；- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 学习好资料 欢迎下载教学重 重点：唾液淀粉酶催化的酶促反应；淀粉水解程度的判定；点与难点 难点：酶活性的影响因素；仪器：水浴锅、电炉、白瓷板、试管、量筒、漏斗、脱脂棉；试验材料 试剂： 0.2%、0.5%淀粉液、 0.3%NaCl、0.85%
27、NaCl溶液、 1%CuSO4 溶液、 1%Na2SO4、pH=5.0、pH=8.0、pH=6.8 缓冲溶液；一、试验原理 ：温度与酶促反应速度关系亲密；温度降低时,酶促反应速度降低以至完全停止；随着温 度上升,反应速度逐步加快；在某一温度时反应速度达到最大值,此温度称酶作用的最适 温度；温度连续上升,反应速度反而下降；人体内大多数酶的最适温度在 37左右；pH 值也会影响酶促反应速度；由于酶本身是蛋白质,pH 不仅影响酶蛋白分子某些基团的解离,也影响底物的解离程度,从而影响酶与底物的结合；当酶促反应速度达到最大 值时的溶液 pH 值,称为该酶的最适 pH；不同的酶最适 pH 值不尽相同, 人
28、体多数酶的最适 pH 值在 7.0 左右；例如唾液淀粉酶的最适 pH 值为 6.8；凡是能够提高酶活性,加快酶促反应速度的物质都称为酶的激活剂；例如 Cl-是唾液淀 粉酶的激活剂；凡是能够降低酶的活性,使酶促反应速度减慢,又不使酶变性的物质称为酶的抑制剂；例如 Cu 2+是唾液淀粉酶的抑制剂；试验内容在不同温度下, 淀粉被唾液淀粉酶水解的程度不同,同来判定：可由水解混合物遇碘显现的颜色不淀粉 蓝色 红色糊精 红色 无色糊精 不显色 麦芽糖 不显色 葡萄糖 不显色 二、试验步骤：1.制备稀释 50 倍的唾液淀粉酶：用蒸馏水漱口清除食物残渣,再含一口蒸馏水一分钟 后使其流入量筒并稀释 50 倍,混
29、匀备用；2.温度对酶促反应速度影响试验（1）取试管 3 支,编号,各管按下表依次加入各种试剂；温度对酶促反应速度影响试验加样表名师归纳总结 管号1 2 3 第 13 页,共 31 页0.1淀粉溶液（ mL） 1.5 1.5 1.5 - - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 稀释唾液学习好资料欢迎下载1 （ml）1 1 煮沸唾液1 摇匀水浴温度37037（2）水浴 8min 后,向各管中各滴加1 滴 KI-I2 溶液,混匀,观看各管颜色并说明结果3.pH 对酶促反应速度的影响试验（1）取试管 3 支,编号,按下表依次加入各种试剂；pH 对酶促反应速度影响试验加样
30、表管号 1 2 3 0.2淀粉液（ mL）2 2 2 PH 5.0 缓冲液（ mL）3 PH 6.8 缓冲液（ mL）3 PH 8.0 缓冲液（ mL）3 稀释唾液酶（ mL）2 2 2 （2）混匀后,将各管置于 37水浴 5 分钟后,取 2 号管中混合液 1 滴于点滴板上,加 1滴 KI-I2 溶液显色,以检验淀粉的水解程度；如不是棕黄色,就连续保温,然后每隔 1min 继续取 2 号管的混合液 1 滴于点滴板上,加 1 滴 KI-I2 溶液显色,直至变成棕黄色时,向全部试管内依次滴加 2 滴 KI-I2 溶液显色；观看各管颜色并说明结果 ；4.激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响（1）取试管
31、 4 支,编号,按下表依次加入各种试剂；激活剂和抑制剂对酶促反应速度影响试验加样表名师归纳总结 管号1 2 3 4 第 14 页,共 31 页0.1淀粉液（ mL）1.5 1.5 1.5 1.5 1NaCl 溶液（ mL）2 1Na2SO4 溶液（ mL）2 - - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 学习好资料欢迎下载2 1CUSO4溶液（ mL）蒸馏水（ mL）2 稀释唾液酶（ mL）0.5 0.5 0.5 0.5 （2）混匀后,将各管置于 37水浴 8 分钟后,取 1 号管中混合液 1 滴于点滴板上,加 1滴 KI-I2 溶液显色,以检验淀粉的水解程度；如
32、不是棕黄色,就连续保温,然后每隔 1min 继续取 1 号管的混合液 1 滴于点滴板上,加 1 滴 KI-I2 溶液显色,直至变成棕黄色时,向全部试管依次滴加 1 滴 KI-I2 溶液显色；观看各管颜色并说明结果 ；教学过程中师生活动设计随着淀粉水解,为什么与碘有颜色反应变化？提纲、板书设计原理及简要操作步骤作业1 在作离子对酶活的影响时3、4 号管有何作用？Cl-是唾液淀粉酶的激活剂？2.在激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响试验中如何证明3.酶的抑制剂与变性剂有何区分？主要参考1 生物化学试验 ,董晓燕主编,化学工业出版社,2022 2022 资料2 生物化学试验教程 ,王金亭,方俊主编,华
33、中科技高校出版社,1、对比试验要留意同步性；总结分析 2、不同人的唾液淀粉酶活性不尽相同,让同学留意到样本差异；3、重点分析激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响医同学物化学试验教案名师归纳总结 试验项目Folin-酚试剂法测蛋白质浓度第7 次课2 学时第 15 页,共 31 页试验性质综合性试验- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 学习好资料 欢迎下载教学目的 1.学习会用 Folin- 酚试剂法测蛋白质浓度的方法；和要求 教学重点 与难点试验材料2.巩固分光光度计的使用；1、重点：分光光度计的使用2、难点：标准曲线的绘制试剂：标准蛋白溶液,Folin- 酚
34、试剂,样品液蛋白质器材：分光光度计、恒温水浴锅、试管、移液管一、试验原理 Folin- 酚试剂法测蛋白质浓度的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即 Folin- 酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度；这两种显色反应产生深兰色的缘由是：物； Folin- 酚试剂中的磷钼酸盐在碱性条件下, 蛋白质中的肽键与铜结合生成复合-磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基仍原,产生深兰色 （钼兰和钨兰的混合物） ；在肯定的条件下,兰色深度与蛋白的量成正比；二、试验步骤 试验内容1.曲线的测定： 取 16 支大试管, 1 支作空白, 3 支留作未知样品,其余试管分成两组,分别加
35、入 0,0.1,0.2, 0.4,0.6,0.8,1.0 毫升标准蛋白质溶液（浓度为250mg/ml ）；用水补足到1.0 毫升,然后每支试管加入5 毫升试剂甲,在旋涡混合器上快速混合,于室温（ 2025）放置10 分钟；再逐管加入0.5 毫升试剂乙（ Folin- 酚试剂）,同样立刻混匀；这一步混合速度要快,否就会使显色程度减弱；然后在室温下放置30分钟,以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对比,于700nm 处测定各管中溶液的吸光度值；以蛋白质的量为横座标,吸光度值为纵座标,绘制出标准曲线；2.样品的测定：取1 毫升样品溶液（其中约含蛋白质20250 微克）,按上述方法进行操作,取 1 毫
36、升蒸馏水代替样品作为空白对比；通常样品的测定也可与标准曲线的测定放在一起,同时进行；即在标准曲线测定的各试管后面,再增加 3 个试管；如上表中的 8、9、10 试管；依据所测样品的吸光度值,在标准曲线上查出相应的蛋白质量,从而运算出样品溶液的蛋白质浓度 ；教学过程中师生活动设计测定蛋白质浓度其他方法有哪些？提纲、板书设计原理及简要操作步骤名师归纳总结 作业简述 Folin- 酚试剂法比较其他蛋白质测定方法的优点；2022 第 16 页,共 31 页主要1 生物化学试验 ,何幼鸾、汤文浩,华师出版社,- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 参考资料学习好资料欢
37、迎下载2022 2 生物化学试验 ,董晓燕主编,化学工业出版社,总结分析1、强调 Folin- 酚试剂法测蛋白质浓度的显色原理；2、巩固分光光度计的使用医同学物化学试验教案试验项目血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳第 8 次课2 学时试验性质基础性试验教学目的1.明白电泳技术的一般原理；和要求2.把握醋酸纤维薄膜电泳的操作；教学重重点：把握醋酸纤维薄膜电泳的操作方法；点与难点难点：电泳技术的原理；器材： DYY- 6 型常压电泳仪、醋酸纤维薄膜（试剂：2 cm 8cm）、.培育皿、盖玻片、滤纸、镊子；1巴比妥缓冲液（pH8.6,离子强度 0.07）：巴比妥 2.76g,巴比妥钠 15.45g,用蒸馏水
38、定容至1000mL；试验材料2染色液：氨基黑10B 0.25g,用甲醇 50mL、冰醋酸 10mL、水 40mL 溶解（可重复使用） ；3漂洗液：甲醇或乙醇45mL,冰醋酸 5mL,水 50mL,混匀；4透亮液（仅在定量分析时使用）：无水乙醇 7份,冰醋酸 3份,混匀；一、试验原理 ：名师归纳总结 试验内容电泳是带电颗粒在电场作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象；醋酸纤维薄膜电泳CAME是一种区带电泳技术,将血清样品点样于醋纤膜上,在pH86 的缓冲液中电泳时,第 17 页,共 31 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 学习好资料 欢迎下载血清蛋白
39、质均带负电荷移向正极；由于血清中各蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等,加之分子大小和外形各异,因而电泳迁移率不同,彼此得以分别；影响电泳迁移率的外界因素：电场强度、溶液的pH 值、溶液的离子强度和电渗现象；影响电泳迁移率的内在因素：质点所带净电荷的量、质点的大小和外形；本试验以醋酸纤维素为电泳支持物,它是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯,将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后,涂抹成匀称的薄膜就成为醋酸纤维素薄膜；该膜具有均一的泡沫状的结构,厚度约为120 m,有很强的通透性,对分子移动阻力很小；醋酸纤维素薄膜电泳具有微量、快速、简便、辨论力高,对样品无拖尾和吸附现
40、象等优点；本试验中用于电泳分别各种血清蛋白；血清中含有清蛋白、-球蛋白、 -球蛋白、 -球蛋白和各种脂蛋白等,各种蛋白质在电场中的迁移速度不同；正常人血清在 pH8.6 的缓冲体系中电泳, 染色后可显示 5 条区带； 其中清蛋白的泳动速度最快,其余依次为 1-、 2-、-及 -球蛋白；二、试验步骤：1）预处理； 2）点样： 3）电泳； 4）染色； 5）漂洗,吸干；1.预处理：用镊子取醋酸纤维薄膜 的缓冲液中浸泡 20min；2张,识别出光泽面与粗糙面,将粗糙面朝上放在电泳槽中2.点样：事先用点样器在滤纸上点几个样,熟识一下点样器的用法；然后把膜条从缓冲液中 取出,夹在两层滤纸内用手指快速捋一下
41、,以吸干表面余外的液体,立刻将粗糙面朝上平铺 在玻璃板上；留意,切勿将膜条长时间放在滤纸上,以免膜条中的缓冲液过度吸出；用盖玻 片蘸一点血清,使血清匀称地分布在盖玻片切面；将盖玻片在膜条一端 23cm 处轻轻地垂直 落下并立刻提起,这样即在膜条上点上了细条状的血清样品,每张膜点一个样；（要求：轻、匀、直、细）3电泳：预先要在电泳槽内加入缓冲液,使两个电极槽内的液面等高,做好滤纸桥；用镊子将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上,要平直； 膜条光面朝上, 点样端靠近负极、 且悬空 （可用镊子再将膜条两端压服帖一些）；盖严电泳室, 检查一下电泳槽和稳压电源是否已经连接好；通电,调剂电压至 110V,电泳时间约为 30min ；4染色：电泳完毕后,关上电源开关,用镊子将薄膜条取下并放在装有染色液的培育皿中浸泡34min（留意盖好培育皿的盖子,以免溶剂挥发）；