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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 高二下生物选修 1 生物技术实践复习学问点1、 果酒和果醋的制作发酵 ：利用微生物或其他生物的细胞在有氧或无氧条件下繁衍或积存其代谢产物的过程；类型：（1）依据是否需要氧气分为：需氧发酵 和厌氧发酵 ；（2）依据产生的产物可分为：酒精发酵 、乳酸发酵 、 醋酸发酵 等1酵母菌的细胞呼吸酶酵母菌进行有氧呼吸大量繁衍：C6H12O6+6H2O +6O26CO2+12H2O+能量酶酵母菌进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳：C6H12O62C2H5OH+2CO 2+能量2酵母菌发酵的正确环境 : 酵母菌在有氧和无氧的条件下都能生活在有氧时,酵母菌大量繁衍,
2、但是起不到发酵成效；在无氧时,繁衍速度减慢,但是此时可以进行发酵；在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气在有氧环境下一段时间使其繁衍,再隔绝氧气进行发酵； 20左右最适合酵母菌繁衍,酒精发酵的正确温度是在1825,pH最好是弱酸性；3醋酸菌好氧性细菌,当缺少糖源时和有氧条件下,可将乙醇（酒精）氧化成醋酸；表酶达式为： C2H5OH+O 2CH3COOH+H 2O；当氧气、糖源都充分时,醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸； 醋酸菌生长的正确温度 是在 30 35装置各部位的作用C6H 12O62O2 2CH3COOH 2CO 22H2O 充气口：在醋酸发酵时连接充气泵进行充气；排气口：排出酒精
3、发酵时产生的 CO 2；出料口：是用来取样的；与瓶身相连的长而弯曲的胶管：加水后防止空气中微生物的污染；该装置的使用方法：使用该装置制酒时,应当关闭充气口；制醋时,应将充气口连接气 泵,输入氧气,酵母菌有氧呼吸时,产生能量多,可大量繁衍；无 氧呼吸时,产生能量少,仅能满意自身代谢,基本不繁衍；所以利 用酵母菌进行工业生产时先进行通气再密封；流程 选择新奇的水果 如葡萄 冲洗榨汁酒精发酵醋酸发酵果汁发酵后酒精的检验 果酒 果醋对比组 2mL 白酒3 mol L 的 H 2SO43 滴振荡混试验组 2mL 发酵液匀重铬酸钾溶液3 滴观看试管甲 2mL 发酵前液3 mol L 的 H 2SO43 滴
4、振荡混试管乙 2mL 发酵后液匀重铬酸钾溶液3 滴观看1 两种对比方式都必需遵循单一变量原就；2前者是标准对比,后者是自身对比；名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 16 页精选学习资料 - - - - - - - - - 仍可以设置一组空白对比（2ml 蒸馏水）几种常用发酵菌种的比较菌种酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌项目生物学分类真核生物原核生物真核生物原核生物代谢类型异养兼性厌氧异养需氧异养需氧异养厌氧繁衍方式相宜条件下出芽生殖二分裂生殖孢子生殖二分裂生殖生产应用酿酒酿醋制作腐乳制作泡菜发酵条件前期需氧,后期不需氧始终需氧始终需氧不需氧果酒、果醋、腐乳、泡菜制作中所用菌种及掌握条
5、件的比较制作内容O2的有无果酒果醋腐乳泡菜比较项目所用菌种酵母菌醋酸菌主要是毛霉乳酸菌无氧有氧有氧无氧掌握条件最适温度18 2530 3515 18常温时间掌握1012 天78 天腌制 8 天左右腌制 10 天左右其他条件封闭充气口适时充气掌握盐酒用量掌握盐水比例深化拓展：1、由于醋酸菌和乳酸菌属于原核生物,因此在利用这两类微生物时,其环境中肯定不要 加入青霉素等抗生素；2、发酵：通过微生物技术的培育来生产大量代谢产物的过程；3、有氧发酵：醋酸发酵 谷氨酸发酵 | 无氧发酵：酒精发酵 乳酸发酵 4、在葡萄酒自然发酵的过程中 , 起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌 . 在发 酵过程中
6、, 随着酒精浓度的提高 , 红葡萄皮的色素也进入发酵液 , 使葡萄酒出现深红色 .呈酸性的发酵液中,酵母菌可以生长繁衍,而绝大多数其他微生物都因无法 在缺氧 适应这一环境而受到制约；5、掌握发酵条件的作用醋酸菌对氧气的含量特殊敏锐,当进行深层发酵时,即使只是短时间中断通入氧气,也会引起醋酸菌死亡；醋酸菌最适生长温度为3035,控制好发酵温度,使发酵时间缩短,又削减杂菌污染的机会；有两条途径生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物的氧化；2、微生物的试验室培育 1、培育基：人们依据微生物对养分物质的不同需求,配制出供其生长繁衍的养分基质,是进行微生物培育的物质基础；名师归纳总结 - - - - - -
7、-第 2 页,共 16 页精选学习资料 - - - - - - - - - 2、培育基依据 物理性质 可分为 液体培育基 、半固体培育基 和固体培育基 ；在液体培育基中加入凝固剂 琼脂 （是从红藻中提取的一种多糖,在配制培育基中用作 常用的凝固剂,但不止这一种凝固剂）后,制成琼脂固体培育基；微生物在固体培育 基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落；依据菌落的特点可以判定是哪一种菌；液体培育基 应用于工业或生活生产；固体培育基 应用于微生物的分别和鉴定；半固体培育基 就常用于观看微生物的运动及菌种保藏等；3、依据 成分 培育基可分为 人工合成培育基 和自然培育基 ；合成培育基 是用成分已知的化学物质
8、配制而成,其中成分的种类比例明确,常用于微 生物的分别鉴定；自然培育基 是用化学成分不明的自然物质配制而成,常用于实际工业生产；4、依据培育基的用途 ,可将培育基分为选择培育基 和 鉴定培育基 ；选择培育基 是指在培育基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物生长,促进所 需要的微生物的生长；鉴别培育基 是依据微生物的特点,用以鉴别不同类别的微生物；在培育基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的,5、培育基的化学成分包括水、无机盐 、碳源 、氮源 、生长因子（部分微生物需要）等；6、碳源：能为微生物的代谢供应碳元素的物质；如CO2、 NaHCO 3 等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源；异
9、养微生物只能利用有机碳源；单质碳不能作为碳源；7、氮源：能为微生物的代谢供应氮元素的物质；如N2、NH3、NO-、NH4 +（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等；只有固氮微生物才能利用 N2；8、培育基仍要满意微生物生长对 PH、特殊养分物质以及氧气的要求；例如,培育 乳酸杆 pH 调至 酸性 ,培育 细菌 菌 时需要在培育基中添加 维生素 ,培育 霉菌 时须将培育基的 是需要将 pH 调至 中性或微碱性 ,培育 厌氧型微生物 是就需要供应 无氧 的条件 9、无菌技术：获得纯洁培育物的关键是防止外来杂菌的入侵,要留意以下几个方面：对试验操作的空间、操作者的衣着和手,进
10、行清洁和消毒；将用于微生物培育的器皿、接种用具和培育基等器具进行灭菌；为防止四周环境中微生物的污染,试验操作应在酒精灯火焰邻近进行；试验操作时应防止已经灭菌处理的材料用具与四周的物品相接触；无菌技术除了用来防止试验室的培育物被其他外来微生物污染外,仍有什么目的？答：无菌技术仍能有效防止操作者自身被微生物感染；10、消毒与灭菌的区分 消毒 指使用较为温顺的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的名师归纳总结 微生物（不包括芽孢和孢子菌落. 芽孢,一种休眠体；孢子,一种生殖细胞；）；第 3 页,共 16 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 消毒
11、方法常用 煮沸消毒法 ,巴氏消毒法 （对于一些不耐高温的液体）仍有 化学药剂 （如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒 ；灭菌 就是指使用剧烈的理化因素杀死物体内外全部的微生物,包括芽孢和孢子；灭菌方法 有灼烧灭菌 、干热灭菌 、高压蒸汽灭菌 ；灭菌方法选择：接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法,所用器械是干热灭菌箱；培育基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法,所用器械是高压蒸汽灭菌锅；表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法,所用器械是紫外灯；比较项 理化因素的作用强度 毁灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被毁灭消毒 较为温顺 部分生活状态的微生物 不能灭菌 剧烈 全
12、部微生物 能制作牛肉膏蛋白胨固体培育基（1）方法步骤： 运算、称量、 溶化、 灭菌、倒平板；（熔化之后灭菌之前往往需要调剂 PH）（2）倒平板操作的步骤：将灭过菌的培育皿放在火焰旁的桌面上,右手拿装有培育基的锥形瓶,左手拔出棉塞；右手拿锥形瓶,将瓶口快速通过火焰；用左手的拇指和食指将培育皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中的培育基（约 1020mL）倒入培育皿,左手立刻盖上培育皿的皿盖；等待平板冷却凝固,大约需 510min；然后, 将平板倒过来放置,纯化大肠杆菌使培育皿盖在下、 皿底在上；（1） 微生物接种的方法 最常用的是 平板划线法 和稀释涂布平板法；（2）平板划线法是通过接种环在
13、琼脂固体培育基表面连续划线的操作；将集合的菌种 逐 步稀释 分散到培育基的表面；在数次划线后培育,可以分别到由一个细胞繁衍而来 的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落；接种环第一次灼烧,杀死接种环上原有的微生物；每次划线前灼烧,杀死上次划线 终止后接种环上残留的菌种,使划线菌种来源于上次划线末端；划线终止灼烧,杀 死接种环上残留的菌种,防止污染环境和感染操作者；灼烧后冷却防止接种环温度 过高杀死菌种；（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的表面,进行培育；分为系列稀释操作 和涂布平板操作两步；（4）用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的 是
14、：使集合在一起的微生物分散成单个细胞,从而能在培育基表面形成单个的菌落,以便于纯化菌种；（5）平板划线法操作步骤：将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环烧红；在火焰旁冷却接种环,并打开棉名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 16 页精选学习资料 - - - - - - - - - 塞；将试管口通过火焰；将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液；将试管通过火焰,并塞上棉塞；左手将皿盖打开一条缝隙,右手将沾有菌种的 接种环快速伸入平板内,划三至五条平行线,盖上皿盖；留意不要划破培育皿； 灼烧接种环,待其冷却后,从第一区域划线的末端开头往其次区域内划线；重复以 上操作,在三、四、五区域内
15、划线；留意不要将最终一区的划线与第一区相连； 将平板倒置放入培育箱中培育；（6）涂布平板操作的步骤：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中；取少量菌液,滴加到 培育基表面；将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃 尽后,冷却 810s；用涂布器将菌液匀称地涂布在培育基表面；培育基表面菌落颜色、外形、大小基本一样,符合目的菌特点,说明接种操作胜利；微生物计数方法 1、显微镜直接计数法,利用计数板在显微镜下计数,但不能区分活菌与死菌；计数板上 有 1mm 2 0.1mm的计数室,每个计数室 400个小格；2、活菌计数法,在稀释度足够高的菌液中集合在一起的微生物被分散成单个细胞,形成单个菌落,选择菌落数在
16、30-300 之间的平板计数；菌落数比活菌实际数低,由于当两个或多个细胞连在一起时,平板上只观看到一个菌落；统计结果用菌落数来表示；3、滤膜法,饮用水过滤后,滤膜放在伊红美蓝培育基上培育,计数黑色 大肠杆菌菌落；菌种的储存（1）对于频繁使用的菌种,可以采纳 暂时保藏 的方法；暂时保藏方法将菌种接种到试管的固体斜面培育基上,在合适的温度下培育；当菌落长成后,将试管放入4的冰箱中保藏；以后每36 个月,都要重新将菌种从旧的培育基上转移到新奇的培育基上；缺点 ：这种方法储存的时间不长,菌种简洁被污染或产生变异；（2）对于需要长期储存的菌种,可以采纳 甘油管藏 的方法；在 3mL的甘油瓶中,装入 1m
17、L甘油后灭菌；将 1mL培育的菌液转移到甘油瓶中,与甘油充分混匀后,放在20的冷冻箱中储存；养分 是指生物摄取、 利用养分物质的过程；养分物质是指维护机体生命活动,保证发育、生殖所需的外源物质；人及动物的养分物质：水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类；植物的养分物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类；微生物的养分物质：水、无机盐、碳源、氮源及特殊养分物质五类；确定培育基制作是否合格的方法：将未接种的培育基在恒温箱中保温12 天,无菌落生长,说明培育基的制备是胜利的,否就需要重新制备；名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 16 页精选学习资料 - - - - - - - -
18、- 培育基的分类和应用划分标准培育基种类特点用途物理性质液体培育基不加凝固剂工业生产半固体培育基加凝固剂,如琼脂观看微生物的运动、分类、鉴定化学组成固体培育基加凝固剂,如琼脂微生物分别、鉴定、活菌计数自然培育基含化学成分不明确的自然物质工业生产培育基成分明确（用化学成分已合成培育基分类、鉴定知的化学物质配成）培育基中加入某种化学物质,以目的用途选择培育基抑制不需要的微生物的生长,促培育、分别出特定微生物鉴别培育基进所需要的微生物的生长鉴别不同种类的微生物依据微生物的代谢特点,在培育基中加入某种指示剂或化学药品消毒与灭菌的区分比较项目消毒灭菌条件使用较为温顺的理化方法使用剧烈的理化因素结果杀死物
19、体表面或内部一部分对人体有害的杀死物体内外全部的微生物,包括芽孢微生物（不包括芽孢和孢子）和孢子适用试验操作的空间、操作者的衣服和手微生物的培育器皿、接种用具和培育基等常用方法煮沸消毒法（如在100,煮沸 56 min ）、灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌巴氏消毒法（如在80,煮 15 min ）；使用酒精、氯气、石炭酸等化学药剂进行消毒 三种常用灭菌方法的比较灭菌方法灭菌条件灭菌时间适用材料或用具灼烧灭菌酒精灯火焰的充分燃烧层直至烧红接种环、接种针或其他金属工具干热灭菌干热灭菌箱内,16017012 h 玻璃器皿（吸管、培育皿）和金属用具等高压蒸汽灭菌100kPa,1211530 min 培
20、育基等3、土壤中分解尿素的细菌的分别与计数 选择菌株：利用选择培育基选择菌株；测定微生物数量的常用方法：统计菌落数目和显微镜直接计数；名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 16 页精选学习资料 - - - - - - - - - 土壤取样选择培育梯度稀释涂布平板微生物的培育与观看选择菌落 尿素：是 一种重要的农业氮肥,尿素并不能直接被农作物吸取；只有当土壤中的细菌将 尿素分解成氨之后,才能被植物利用；土壤中的细菌之所以能分解尿素,是由于 他们能合成脲酶 . 尿素最初是从人的尿液中发觉的 尿素分解菌的分别：尿素分解菌能合成脲酶将尿素分解成氨；氨使培育基的 PH上升；以 尿素为唯
21、独氮源的培育基中加入酚红指示剂,培育尿素分解菌,指示剂变红色；选择菌株（1）试验室中微生物的选择应用的原理人为供应有利于目的菌株生长的条件（包括养分、温度、他微生物生长；（2）选择性培育基pH 等）,同时抑制或阻挡其在微生物学中,将答应特定种类的微生物生长,同时抑制或阻挡其他种类微生物生 长的培育基,称作 选择培育基 ；（3）配制选择培育基的依据：依据选择培育的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到 选择的目的；例如,培育基中不加入有机物可以选择培育自养微生物；培育基中不 加入氮元素,可以选择培育能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培育金黄色 葡萄球菌等；设置对比：设置对比的主要目的是排除试验
22、组中非测试因素对试验结果的影响,提高实 验结果的可信度；对比试验是指除了被测试的条件以外,其他条件都相同的 试验,其作用是比照试验组,排除任何其他可能缘由的干扰,证明的确是所 测试的条件引起相应的结果；试验设计：试验设计包括试验方案,所需仪器、材料、用具和药品,详细的实施步骤以 准时间支配等的综合考虑和支配；（1）土壤取样：同其他生物环境相比,土壤中的微生物,数量最大,种类最多；在富含 有机质的土壤表层,有更多的微生物生长；从富含有机物、潮湿、pH7 的土壤中取样；铲去表层土,在距地表约 38cm的土壤层取样；（ 2）样品的稀释：样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目；在实际操作中,通常
23、选用肯定稀释范畴的样品液进行培育,以保证获得菌落数在 30300 之间、适于计数 的平板；测定土壤中 细菌 的数量,一般选用 10 4 10 5 10 6 测定 放线菌 的数量,一般选用 2 10 3 10 10 3 10 4 10 5 测定 真菌 的数量,一般选用 10 4 （3）微生物的培育与观看不同种类的微生物,往往需要不同的培育温度和培育时间；细菌 放线菌 2528 57 天 霉菌 2528 34 天3037 12 天每隔 24 小时统计一次菌落数目,选取菌落数目稳固时的记录作为结果,这样可以防止因名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页,共 16 页精选学习资料 - - -
24、 - - - - - - 培育时间不足而导致一楼菌落的数目；一般来说, 在肯定的培育条件下（相同的培育基、唯独及培育时间） ,同种微生物表现出稳固的菌落特点；外形、大小、隆起程度、颜色 如何从平板上的菌落数估计出每克样品中的菌落数？统计某一稀释度下平板上的菌落数,最好能统计 3 个平板,运算出平板菌落数的平均值 每克样品中的菌落数 =（C/V）*M 其中, C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数, V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积（ml）,M代表稀释倍数4、 菊花的组织培育 一、植物组织培育的基本过程1、原理：植物细胞全能性；细胞分化的实质：基因选择性表达的结果；2、全能性表达的条件：
25、离体状态和相宜环境条件（如养分物质、激素、温度等）3、基本过程：离体的植物组织或细胞愈伤组织丛芽、生根（试管苗）完整植株 4、愈伤组织：排列疏松而无规章,高度液泡化的呈无定型状态的薄壁细胞；二、菊花的组织培育 1 、材料选取：未开花植株的茎上部新萌生的侧枝；2、养分： MS培育基,一般添加植物激素 浓度、使用次序、用量比例都会影响试验 ；3、过程：制备 MS培育基外植体消毒接种培育移栽栽培 细胞分化： 在生物个体发育过程中,细胞在外形、结构和生理功能上显现稳固性差异的 过程；愈伤组织 的细胞排列疏松而无规章,是一种高度液泡化的呈无定外形态的薄壁细胞；脱分化（去分化） ：由高度分化的植物组织或细
26、胞产生愈伤组织的过程；再分化 ：愈伤组织连续进行培育,又可以重新分化成根或芽等器官的过程；具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞,都具有发育成完整个体的才能,即每个 生物细胞都具有全能性；但在生物体的生长发育过程中并不表现出来,这是由于在特定 的时间和空间条件下,通过基因的选择性表达,构成不同组织和器官；植物组织培育技术的应用有：实现优良品种的快速繁衍；培育脱毒作物； 制作人工种子；培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等；细胞分化是一种长久性的变化,它有什么生理意义？：使多细胞生物体中细胞结构和功 能趋向特地化,有利于提高各种生理功能的效率；比较根尖分生组织和愈伤组织的异同组织类型细胞来源
27、细胞外形细胞结构细胞排列细胞去向根尖受精卵正方形无液泡紧密分化成多种分生组织细胞组织愈伤组织高度分化细胞无定形高度液泡化疏松再分化成新个体影响植物组织培育的条件 相同点 都通过有丝分裂进行细胞增殖材料： 不同的植物组织,培育的难易程度差别很大；植物的种类、材料的年龄和储存时名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页,共 16 页精选学习资料 - - - - - - - - - 间的长短等都会影响试验结果；菊花组织培育一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧 枝作材料；一般来说,简洁进行无性繁衍的植物简洁进行组织培育；选取生长旺盛嫩枝 进行组培的是嫩枝生理状态好,简洁诱导脱分化和再分化；养分
28、： 离体的植物组织和细胞,对养分、环境等条件的要求相对特殊,需要配制相宜的培育基；常用的培育基是MS培育基,其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg,微量元素是 Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I 、Co,有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖 等；激素：植物激素中 生长素 和细胞分裂素 是启动细胞分裂、 脱分化和再分化的关键性激素；在生长素存在的情形下,细胞分裂素的作用出现加强趋势；在培育基中需要添加生长素 和细胞分裂素等植物激素,其浓度（依据生长素作用的两重性：低浓度促进生长,高浓 度抑制生长,甚至杀死植物）、使用的先后次序、用量的比例等都影响结果；细胞分裂素比值与结果 生长素使
29、用次序 试验结果 促根分化,先生长素,比值高时 有利于分裂但不分化 抑芽形成 后细胞分裂素 促芽分化,先细胞分裂素,比值低时 细胞既分裂也分化 抑根形成 后生长素 促进愈伤组织生长 比值适中 同时使用 分化频率提高 + 环境条件： PH、温度、光等环境条件；不同的植物对条件的要求往往不同；进行菊花的组织培育, 一般将 pH掌握在 5.8 左右,温度掌握在1822,并且每日用日光灯照耀12h. 1、菊花茎的组织培育与月季的花粉培育的比较比较项目 理论依据 基本过程 影响因素 材料菊花茎的组织培育 细胞的全能性 脱分化、再分化选材、养分、激素、pH、温度、光照等选取生长旺盛的嫩枝 5.8 1822
30、比pH 较温度光照 操作流程每日光照12h 制备培育基外植体消毒接种培育移栽栽培植物组织培育技术与微生物培育技术的比较名师归纳总结 - - - - - - -第 9 页,共 16 页精选学习资料 - - - - - - - - - 比较项目植物组织培育微生物培育含义在无菌条件下, 将离体的植物体器官或组织接种在无菌条件下, 在相宜的养分和环在适当的培育基上进行培育,最终发育成完整植境条件下对微生物的培育物体培育基成分水、矿质元素、蔗糖、维生素、有机添加物和植水、无机盐、碳源、氮源等物激素等特殊操作要求严格掌握无菌操作,在培育过程中要更换培育严格掌握无菌操作, 整个培育过程基,调剂细胞分裂素和生
31、长素的比例无需更换培育基注：在这两种技术中均需要肯定的养分物质,但养分物质的划分标准不同；4、操作流程 配制 MS固体培育基 ：配制各种母液：将各种成分按配方比例配制成的 浓缩液 （培育基母 液）； 使用时依据母液的浓缩倍数,运算用量,并加蒸馏水稀释； 配制培育基：应加入的物质有琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有机物和植物激素 1000 毫升；的母液,并用蒸馏水定容到 在菊花组织培育中,可以不添加植物激素缘由是菊花茎段组织培育比较简洁； 灭菌：实行的灭菌方法是高压蒸汽灭菌； MS培育基中各种养分物质的作用是什么？与肉汤培育基相比,MS培育基有哪些特点？大量元素和微量元素供应植物细胞所必需的无机
32、盐；蔗糖供应碳源,维护细胞渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满意离体植物细胞在正常代谢途径受到肯定影响后所 产生的特殊养分需求；微生物培育基以 有机养分 为主, MS培育基就需供应大量 无机养分 ；外植体的消毒 外植体：用于离体培育的植物器官或组织片段；选取菊花茎段时,要取生 长旺盛的嫩枝；菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉,用软刷轻轻刷洗,刷洗后在流水下冲洗20min 左右；用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分,放入体积分数为70%的酒精中摇动 23 次,连续 67s,立刻将外植体取出,在无菌水中清洗；取出后仍用无菌吸水 纸吸干外植体表面水分,放入质量分数为 0.1%的氯化汞溶液中 12mi
33、n；取出后,在无菌 水中至少清洗 3 次,漂洗消毒液；又要考虑植物的耐受才能；留意：对外植体进行表面消毒时,就要考虑药剂的消毒成效,接种： 接种过程中插入外植体时外形学上端朝上,每个锥形瓶接种 78 个外植体；外植 体接种与细菌接种相像,操作步骤相同,而且都要求无菌操作；培育：应当放在无菌箱中进行,并定期进行消毒, 保持相宜的温度 （1822）和光照（12h）移栽： 栽前应先打开培育瓶的封口膜,让其在培育间生长几日,然后用流水清洗根部培名师归纳总结 - - - - - - -第 10 页,共 16 页精选学习资料 - - - - - - - - - 养基；然后将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍宝岩等
34、环境中生活一段时间,进行壮苗；最 后进行露天栽培；栽培：外植体在培育过程中可能会被污染,缘由有外植体消毒不完全；培育基灭菌不彻 底；接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等；5 果胶酶在果汁生产中的作用（一）基础学问 1 植物细胞壁以及胞间层的主要组成成分有 汁加工中,既影响出汁率,又使果汁浑浊；纤维素 和果胶 ；并且两者不溶于水,在果 2 果胶酶的作用是能够将果胶 分解成可溶性的半乳糖醛酸 ,瓦解植物的细胞壁及胞间层,并且使果汁变得澄清；3果胶酶是一类酶总称,包括 多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶、果胶酯酶 等；4果胶酶的来源：植物、霉菌、酵母菌和细菌；温度、 PH、和酶的抑制剂 等；5影响酶活性的因
35、素包括：6酶的活性是指酶催化肯定化学反应的才能；其高低用肯定条件下酶所催化的某一化 学反应的速度来表示；7酶的反应速度是指单位时间内,单位体积中反应物的削减量或产物的增加量来表示；8果胶酶的用量： 生产果汁时, 为了使果胶酶得到充分的利用,需要掌握好 酶的用量 ,用量的多少常要通过试验设计来探究；（二）试验设计设计一探究温度对酶活性的影响 1进行试验前要解决的几个问题：PH、此试验的自变量是 温度 ；依据单一变量原就,你应确保各试验组相同的变量有 底物浓度、底物量、试验器材、酶的用量 等等；你预备如何测定果胶酶的活性,即你要观测的因变量是 出汁量和果汁的澄清度；如何掌握试验要求的温度梯度？各个
36、烧杯内加入不同温度的水 2设计试验 PH下,通过转变温度来确定最相宜的温度（1）试验原理：在一恒定（2）试验步骤：搅拌器搅拌制苹果泥；将分别装有苹果泥和果胶酶的试管在恒 温水浴中保温；加入果胶酶反应一段时间；重复上面的试验；（3）试验结果、结论：过滤果汁；并记录试验结果；转变不同的温度后设计二探究 PH对酶活性的影响1 进行试验前要解决的几个问题：你预备如何设置pH 梯度,又将如何掌握试验要求名师归纳总结 - - - - - - -第 11 页,共 16 页精选学习资料 - - - - - - - - - 的 pH？5 6 7 8 9 选取不同的试管,调至所需PH 此试验应选一个相宜的 温度
37、进行水浴加热,并且要掌握好其他的因素； 2 设计试验 可参考温度对酶活性的影响试验,作相应的变动；设计三探究果胶酶的用量 1进行试验前要解决的几个问题：此探究试验是建立在 温度 和 PH对果胶酶活性影响的基础之上的；此时,讨论的变量 是酶的用量 ,其他因素保持不变；试验时可以配制不同浓度 的果胶酶溶液,也可以只配制相同浓度 的果胶酶溶液,然后使用不同的体积即可,但必需保证反应液的用量必需相同,否就影响试验结果的精确 性； 2 设计试验 可参考前两个探究试验,作相应的变动；6 血红蛋白的提取和分别 一、试验原理蛋白质的物化理性质：外形、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等 千差万别,
38、由此提取和分别各种蛋白质；1凝胶色谱法（安排色谱法）：（1）原理：分子量 大 的分子通过 多孔凝胶颗粒的间隙,路程短 ,流淌快 ；分子量 小 的分子穿过 多孔凝胶颗粒内部,路程长,流淌慢；（2）凝胶材料：多孔性,多糖类化合物,如葡聚糖、琼脂糖；（3）分别过程：混合物上柱洗脱大分子流淌快、小分子流淌慢收集大分子收集小分子洗脱 ：从色谱柱上端不断注入缓冲液,促使蛋白质分子的差速流淌；（4）作用：分别蛋白质,测定生物大分子分子量,蛋白质的脱盐等；2缓冲溶液名师归纳总结 - - - - - - -第 12 页,共 16 页精选学习资料 - - - - - - - - - （ 1）原理：由弱酸和相应的强
39、碱弱酸盐组成（如H2CO3 NaHCO 3, NaH2PO4/Na2HPO等）,调剂酸和盐的用量,可配制不同 pH的缓冲液；（2）缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液 pH的干扰而保持 pH稳固；3凝胶电泳法：（1）原理：不同蛋白质的带电性质、电量、外形和大小不同,在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同,导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同；（2）分别方法： 琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳 等；（3）分别过程：在肯定pH 下,使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的SDS,形成“ 蛋白质SDS复合物” ,使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小；二、试验步骤1样品处理 红细胞的洗涤洗涤
40、红细胞的目的是 去除杂蛋白 ,采集的血样要准时采纳 低速短时间 离心分别红细胞,然后用胶头吸管吸出上层透亮的 黄色血浆 ,将下层暗红色的 红细胞液体 倒入烧杯,再加入 五倍体积的生理盐水,缓慢搅拌 10min,低速短时间离心,如此重复洗涤三次,直至上清液中没有黄色,说明红细胞已洗涤洁净；血红蛋白的释放在蒸馏水 和甲苯 作用下,红细胞破裂释放出血红蛋白；注：加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同；加入甲苯的目的是溶解细胞膜,有利于血红蛋白的释放和分别；2粗分别分别血红蛋白溶液将搅拌好的混合溶液离心后,试管中的溶液分为 4 层；第一层为无色透亮的 甲苯层 ,第 2 层为白色薄层固体,是 脂溶性
41、物质的沉淀层,第 3 层是红色透亮液体,这是 血红蛋白的水溶液 ,第 4 层是其他杂质的暗红色沉淀物；将试管中的液体用滤纸过滤,除去之溶性沉淀层,于分液漏斗中静置片刻后,分出下层的红色透亮液体；透析取 1mL 的血红蛋白溶液装入透析袋 中,将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为 20mmol/L 的磷酸缓冲液中 ,透析 12h；透析可以去除样品中 于更换样品的 缓冲液 ；3纯化分子量较小 的杂质,或用名师归纳总结 - - - - - - -第 13 页,共 16 页精选学习资料 - - - - - - - - - 调剂缓冲液面： 打开色谱柱下端的流出口,胶面平齐,关闭出口；使柱内凝胶面上
42、的缓冲液缓慢下降到与凝加入蛋白质样品： 用吸管将透析后的样品 沿管壁围绕移动 加到色谱柱的顶端； 加样后,打开下端出口,使样品渗入凝胶床内,等样品完全渗入凝胶层后,关闭出口；调剂缓冲液面：加入 20mmol/L 的磷酸缓冲液到适当高度洗脱：连接缓冲液洗脱瓶,打开下端出口,进行洗脱；收集分装蛋白质：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时,用试管收集；4. 纯度鉴定 -SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）三、留意事项1. 电泳技术电泳技术就是在电场的作用下,利用待分别样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、外形等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而达到对样品进行分别、鉴定或提纯的目的；2. 红细胞的洗涤假如 分层不明显 ,可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的缘由；此外,离心速度过高和时间过长,会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,也得不到纯洁的红细胞,影响后续血红蛋白的提取纯度；3如何检测凝胶色谱柱的装填是否胜利由于凝胶是一种半透亮的介质,检查凝胶是否装填得匀称；因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯,此外, 仍可以加入大分子的有色物质,观看色带移动的情形；假如 色带匀称、 狭窄、平整 ,说明凝胶色谱柱的