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1、苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。普通棉花抗虫棉普通棉花抗虫棉提取目的提取目的基因基因基因表达载体基因表达载体的构建的构建目的基因导入目的基因导入受体细胞受体细胞目的基因的目的基因的检测与鉴定检测与鉴定1.1 DNA重组技术的基本工具重组技术的基本工具基本工具：基本工具： 限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶“分子手术刀分子手术刀” DNADNA连接酶连接酶“分子缝合针分子缝合针” 基因进入受体细胞的载体基因进入受
2、体细胞的载体“分子运输分子运输车车” T磷磷酸酸二二酯酯键键1234512345 AC C C GC C C G G G G GG G G C C CG G G C C CC C CC C CGG G G G GGG G G G GC C CC C C（二）（二）“分子缝合针分子缝合针”DNADNA连接酶连接酶1 1、种类：、种类： Ecoli DNA Ecoli DNA连接酶连接酶 T4 DNA T4 DNA连接酶连接酶2 2、作用：、作用： 可把黏性末端之间的缝隙可把黏性末端之间的缝隙“缝合缝合”起来，起来，即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的的磷酸二酯键
3、磷酸二酯键T T4 4 DNA DNA连接酶连接酶还可把还可把平末端之间的缝隙平末端之间的缝隙“缝合缝合”起来，但效率较低起来，但效率较低 限制酶限制酶DNA解旋酶解旋酶区别区别切割特定的核苷酸序列切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键的磷酸二酯键将将DNADNA两条链的氢键两条链的氢键打开形成两条单链打开形成两条单链限制酶限制酶DNA水解酶水解酶区别区别切割特定的核苷酸序列切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键，形成片的磷酸二酯键，形成片段的段的DNA.DNA.切割磷酸二酯键，形成切割磷酸二酯键，形成单个的脱氧核苷酸。单个的脱氧核苷酸。比较：DNA连接酶与DNA聚合酶DNA聚合酶DNA连接酶区别区别1
4、1区别区别2 2相同点相同点1)1)只能将只能将单个核苷酸单个核苷酸连连接到已有的核酸片段上，接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键形成形成磷酸二酯键磷酸二酯键1)1)在在两个两个DNADNA片段之片段之间间形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键2)2)以以一条一条DNADNA链为模板链为模板，连接成一条互补连接成一条互补的的DNADNA链链2)2)将将DNADNA双链上的双链上的两两个缺口同时连接个缺口同时连接起来，起来，不需要模板不需要模板3.下列四条下列四条DNA分子，彼此间具有粘性末端的一组是分子，彼此间具有粘性末端的一组是 A B C D答案：答案：D、关于限制酶的说法中，正确的是
5、（、关于限制酶的说法中，正确的是（ ）A、限制酶是一种酶，只识别、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基碱基序列序列B、EcoRI切割的是切割的是GA之间的氢键之间的氢键C限制酶一般不切割自身的限制酶一般不切割自身的DNA分子，只分子，只切割外源切割外源DNAD限制酶只存在于原核生物中限制酶只存在于原核生物中答案：答案：C. （多选）（多选）答案：答案：BDDNADNA聚合酶聚合酶DNADNA连接酶连接酶区别区别1 1区别区别2 2相同点相同点1)1)只能将单个核苷酸连只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键1)1)在两个在两个DNADNA片段之片段之间形成磷酸二酯键间形成磷酸二酯键2)2)以一条以一条DNADNA链为模板，链为模板，连接成一条互补连接成一条互补的的DNADNA链链2)2)将将DNADNA双链上的两双链上的两个缺口同时连接起来，个缺口同时连接起来，不需要模板不需要模板以便提取和在体外进行以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。操作，太大就不便操作。结束结束