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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 显微镜原理、构造、调试、使用和保养显微镜是人类熟悉物质微观世界的重要工具,是现代科学讨论工作不行缺少的仪器之一；显微镜自 1666 年问世以来已有 300 多年的历史了,其间随着科学技术不断进展,显微镜的品种不断增加,结构和性能逐步得到完善和提高；依据不同的使用用途,光学显微镜可分为一般光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜、倒置显微镜、体视显微镜、偏光显微镜等 10 多种；目前,世界上很多国家都可以生产光学显微镜,牌名、种类繁杂,其中德国、日本等国制造的显微镜品质、数量占优势,但价格昂贵；对于现代的光学显微镜, 包括各种简洁的常规检
2、验用显微镜、万能讨论以及万能照相显微镜等,第一要熟悉其构造及各部件的功能,同时要把握正确的调试、使用和保养方法, 才能在实际应用中面对各种要求时以不同的显微镜检方法,充分发挥显微镜应有的功能,提高常规检验工作效率；光学显微镜的原理和构造随着科学技术的进展,显微镜检方法由最传统的明视野、暗视野进展出了相差法、偏光方法； 荧光方法也由透射光激发进展为落射光激发,使荧光效率大为提高；微分干预相衬方法基于偏光方法, 而奇妙地利用了微分干预棱镜,使之能应用于医学与生物学的样品,又能应用于金相样品的分析与检验；下面以德国ZEISS 公司生产的Axioplan万能讨论用显微镜,简洁介绍万能显微镜的基本组成部
3、件；1. 显微镜主机体stand 显微镜的主机体设计成金字塔形,而底座的截面呈T 字形,使显微镜的整体相当稳固；显微镜的光学部件和机构调剂部件、光源的灯室、显微照相装置、电源变压稳压器等,都可安装在主机体上或主机体内；2. 显微镜的底座base 底座和主机体通常组成一个稳固的整体；底座内通常装有透射光照明光路系统聚光、集光和反光部件,光源的滤光片组,粗 场光阑也安装在底座上；/微调焦机构,光源的视3. 透射光光源 tranilluminator 透射光光源由灯室 lamp housing 、灯座lamp socket 、卤素灯 halogen lamp 、集光与聚光系统lamp collect
4、or and lamp condenser及其调整装置组成；名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 4. 透射光光源与反射光光源的转换开关toggle switch 这是新一代AXIO 系列显微镜特有的装置,透射光和反射光可通用；当具有透/反两用的配置时,利用这一转换开关能便利而又快速的使透射光和反射光相互转换；在纯透射光的配置中,这一开关就改为电源开关；5. 电源开关 mains switch 与亮度调剂旋钮brightness control电源开关用来接通或切断显微镜所需用的沟通电源；电源开关旋钮也可调剂照明光源的
5、亮度,使所观看的视域可随时获得适当的亮度,可调范畴为 3-12V ；作显微照相时, 可依据曝光以及彩色底片色温的要求来调剂灯光的亮度；当预备关掉电源之前,应先将亮度调剂旋钮调到最小；6. 粗、微调焦旋钮coaxial coarse/fine focusing controls调焦旋钮转动时带动燕尾导板上下移动, 而导板上就装有物台托架和聚光镜托架,的成效；从而使物台趋向或远离物镜到达调焦7. 透射光用的滤光片选择按钮push buttons for filter magazine透射光显微镜检方法所需用的一组滤光片已安装在显微镜的底座内,通过底座外的按钮就可以依据不同的需要来选择适用的一块或一
6、组滤光片；通常的滤光片配套有：1 蓝色色温转换滤光片：用来把光源的色温由 的 5500K 色温；3200K 转换成日光型彩色底片所需2 绿色滤光片：用来增强相差观看方法中成像的反差,或者以黑白底片作显微照相时,可 以提高片成像的反差；3 浅灰色滤光片：是透光率为50% 的中性减光滤光片,可把视野的亮度减弱一半；4 灰色滤光片：是透光率为 25% 的中性减光滤光片,可把视野的高度减弱 75% ；5 透光率仅为 6% 的中性减光滤光片,可把视野的亮度变得相当暗,95% 以上的光都已被吸取掉；8. 光源的视场光阑luminuos field diaphragm视场光阑是显微镜照明光路系统中的重要部件
7、之一, 它只能依据库勒照明系统的要求来进行调剂,视场光阑不行以任意开大,但要依据使用的物镜倍数来调剂适当的大小；视场光阑的主要功用有：名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 1 掌握杂散光在成像光路系统中的影响,特殊是免除杂散光对比相系统的干扰,使显微照相的底片不至于蒙上一层灰雾；2 掌握照明光束的大小,使所观看的视域能受到匀称的照明；3 在荧光显微镜检方法中,可以把激发光限制在所需激发样品的视域范畴内,以防止视域外的样品过早受到激发；9. 聚光镜系统 condenser system聚光镜系统是照明光路系统中的重要部件
8、之一,它也只能依据库勒照明系统的调整要求来进行调剂；聚光镜系统调整的好坏,可以直接影响显微镜视域中照明的匀称性,也可影响显微镜的辨论力,仍可以直接掌握显微照相底片上的反差；聚光镜系统通常由以下几个部件组成：1 聚光镜本体 condenser 可以是简洁的阿贝聚光镜,也可以是消球差-消色差的优质聚光镜,另外仍有一种是排除了内应力的偏光聚光镜；聚光镜的重要参数之一是数值孔径NA ,通常为 0.32 ；这样的数值孔径太小,只能与以下的物镜协作使用,因此需配用前端透镜来提高数值孔径,以便与不同倍数的物镜敏捷协作使用；2 前端透镜 front lens 前端透镜本身的数值孔径通常为0.63 、0.90
9、、1.30 或 1.40 ,它要附装在聚光镜本体上,可以便利地摆进或摆出光路；最常用的前端透镜数值孔径为0.90 ,当它摆入光路时,可以和10 及以上的物镜配用,摆出光路时可以和10 以下的物镜如 6.3 、5 及 2.5 等物镜配用；3 聚光镜的孔径光阑aperture diaphragm孔径光阑实际上是一个可变光圈,它是显微镜照明光路系统中的又一个重要部件,在透射光明视野法、微分干预相衬法以及偏光法所使用的聚光镜中, 都装有孔径光阑；它可以影响显微镜在作观看时的辨论力；直接掌握显微照相底片上的反差；可用来调剂聚光镜的数值孔径,协作所用物镜的数值孔径,以取得最正确的辨论本事,或最大的辨论本事
10、；仍可以使光源的发光体成像于孔径光阑所在的平面上,从而满意库勒照明系统的前提条件；在实际操作中, 调剂聚光镜孔径光阑可以转变显微镜中所观看到的视野亮度,这是由于历史上对聚光镜孔径光阑的误会所造成的错误用法；这里要特殊强调： 不应当用聚光镜的孔径光阑来调剂视野中的亮度、更不应当用调剂聚光镜位置高低的方法来调剂视野中的亮度！以往的错误用法期望能在实际操作中订正过来；名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 4 转盘 turret 在多用途聚光镜系统中,为便利才把明视野的孔径光阑、暗视野的中央光挡、相差法所需用的各种不同直径的环
11、状光圈、微分干预相衬法用的 DIC 棱镜及其孔经光阑等部件装在转盘上再嵌入到聚光镜本体的座子内,微镜检法所适用的聚光镜,便利而又快捷；使用时转动转盘就可以选用不同显聚光镜系统有两个调剂装置：a. 聚光镜的调中螺丝centering screws调中螺丝通常为1 对,位于聚光镜托架前方的左右测；和环形燕尾槽中的调中螺丝成三足鼎立之势,可以聚光镜前后、左右调整,使聚光镜的光轴与照明光路、成像光路合轴；b. 聚光镜托架的上下调剂装置 vertical adjustment of condenser carrier： 利用这个调剂装置,可使聚光镜的位置作上下调动, 使视场光阑经过聚光镜在样品视野中的成
12、像调到最为清晰,光阑像的位置也可利用托架上的调中螺丝来进行调中,从而满意库勒照明系统调整的要求；10. 机械移动式载物台specimen stage 载物台可以承载样品,装有可在水平方向上作前后、左右移动的调剂装置,有的仍可以在水平方向上作大约 能更好地与显微照相的取景框相适配；100 度的旋转,以便使样品11. 物镜转换器 nosepiece 物镜转换器安装在滑插式燕尾槽座上,已作了精确的对中；可快速更换物镜；常用的有6 个、 5 个及 4 个孔位的物镜转换器；12. 物镜 objectives 物镜是显微镜的核心光学部件,显微镜的放大倍数、辨论本事、色差与像差的校正状况、工作距离等, 都有
13、直接由物镜来打算；衡量物镜质量的基本参数主 要有： a. 色差消正的程度或级别；b. 像场平整的程度；c. 所使用的玻璃材料；数值孔 径 NA是物镜最重要的参数,数值孔径越大,辨论率越高；目前物镜的数值孔径最大只 有 1.30 ；依据物镜色差和像差校正的程度,物镜可以分为以下类别：1 消色差物镜 achomats 通常对红光与蓝光两种色光作了色差校正,但视域中像场的平整程度并未作过完善的校正,因此只能作一般的观看应用；在偏光显微镜中,由于需要排除物镜内各个镜片的内应力,反而需要利用这种镜片数目不多的物镜来做偏光物镜；2 有限平像场消色差物镜flat-field achromats这也是对两种色
14、光作了校正的消色差物镜,但视域范畴内像场的平整程度只作了有限范畴内的校正,通常在显微照相取景框范畴内像场是平整的, 以确保显微照相对焦的清晰,取景框范畴以外,往往不肯定能保证同样的清晰度；适用于常规检验而又需要作显微照相的工作中；3 完善平像场消色差物镜plan-achromats这也是对两种色光作了校正的高级消色差物镜,主要特点是像场在整个视域中作了完善的校正,适合于作要求较高的显微镜检工作,名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 特殊是作显微照相成效更好；由于这种物镜仍采纳常用的光学玻璃,不相宜作荧光等这一类弱光的观
15、看和照相；4 萤石玻璃消色差物镜neofluar 这也是对两种色光作了色差校正的消色差物镜,其中全部或部分镜片就采纳了可透过近紫外光波长约为365nm 的萤石玻璃即氟化钙晶体来制造；因此特殊适合于作荧光与相差方法的观看与显微照相,也可用在偏光显微镜中；5 完善平像场复消色差物镜plan-opo-chromats这是最高一级的消色差物镜,对红、绿、蓝 3 种颜色都作了很好的色差校正,而视域中的像也作了完善的校正,数值孔径比萤石物镜大, 可应用于要求极高的显微观看与显微照相中,但价格特别昂贵, 由于所使用的镜片数目多达 12 片,光能缺失较大,不宜用作荧光观看与照相；6 已排除内应力又可以调剂中心
16、的物镜pol Z objectives这是一种适用于作偏光观看的物镜,是从以上所介绍的几种物镜中选择出来的,在装配时特殊留意排除了其中的内应力,以免内应力所引起的干预条纹干扰了偏光样品中真正的干预条纹；之间的盖玻片都可以作相应的校正；1986 年以来,德国蔡司公司推出的新一代光学显微镜,其中的物镜突破了传统光学显微镜的概念,采纳了无限远色差校正的光学系统infinity color-corrected system,简称 ICS 物镜,其特点是： 由物镜射出的成像光束是一束平行光,可在成像光路中按需要插入任意多的光学部件而不影响成像质量；在显微镜镜体内有一特制的镜筒透镜tube lens 与物
17、镜相配,两者结合起来把物镜的色差与像差都作了特别完善的校正,比传统物镜的视域扩大约 40% ；而且物镜的视域相当宽敞,13. 荧光滤光片组插板的插口slot for the fluorescence slider这是为作荧光观看时插入荧光滤光片组插板预留的插口；14. 勃氏镜插板的插口slot for Bertcand-lens slider这是为作偏光观看时插入勃氏镜插板预留的插口,勃氏镜是偏光显微镜中用作锥光干预图试验的重要部件；15. 补色器插板的插口slot for auxiliary objects这是当作微分干预相衬观看和偏光需加入的各种补色器预留的插口；16. 双目镜筒或带照相镜
18、筒的双目镜筒binocular tubes or binocular phototubes用来安放目镜及照相装置；为便于观看,镜筒制成具有肯定倾斜角度30或 45 ,设有瞳距名师归纳总结 调剂装置,可在55 至 75 范畴内调剂,以适合不同使用者两眼瞳孔距离；双目镜筒内装有第 5 页,共 13 页一些折光和分光棱镜,能把从物镜出来的一束成像光束等分成两部分,分别由两个目镜作观- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 察；带照相镜筒的双目筒一般在右测装有光束安排棱镜的拉杆,把它全部推入时只作观看,拉出来就一边观看一边照相,或全部作显微照相；17. 目镜 eyep
19、ieces 目镜是显微镜中把物镜所成的像作再一次放大的光学部件,显微镜的总放大倍数通常就是物镜与目镜放大倍数的乘积；为便利不同视力者进行显微拍照时调焦同样清晰, 一些目镜设计成可调焦式；为了使显微镜获得最大有效放大倍数和最高辨论本领,必需合理选配目镜；到目前为止,由于受光学定律的制约,光学显微镜最大的有效放大倍数为 1250-1300 倍；10 目镜是最常用而必需配备的目镜,观看荧光时最好选用 10 以下的目镜；显微镜的正确调试和使用在明白了显微镜各主要部件的名称、构造和功能之后,为了更好地发挥显微镜的各种功能,提高工作效率, 保证在显微观看及显微照相过程中取得最正确成效,使用人员必需明白和把
20、握显微镜正确的调试方法和使用方法；特殊在新一代显微镜中,具备了多种功能, 能进行多种显微镜检方法观看,正确的试调方法和使用方法就显得尤为重要；下面以 Axioplan万能讨论显微镜为例,简述调试及使用方法；1. 显微镜照明光路系统的调整为了使显微镜的视野能受到匀称而又充分的照明,在显微镜初次安装和调试时,就必需把照明光路系统调整好,这是正确使用显微镜,并获得正确、牢靠结果的重要手段和最基本的要求；此外, 正确把握照明光路系统的调整,是使用显微镜过程中更换光源灯泡后所必经的步骤,也是在日常使用过程中不时地检验显微镜性能的必要手段；显微镜照明光路系统的调整主要有以下 4 项内容：1 照明光源灯室在
21、显微外的初步调整 第一将灯室的外壳打开,压弹簧夹子将卤素灯泡装入插座中,安装时防止手指直接接触灯泡可用松软的布或纸隔住,以免灯泡上留有指纹等脏物,影响灯泡的使用寿命； 把灯室摆在桌面上,接通电源后,用专用的螺丝刀调剂灯的调焦旋钮孔标有“ ”,使灯丝投影在 1-2m 外的墙上,将灯丝成像调至清晰；然后调剂灯的高低位置调剂丝孔标有“ ”,使灯丝位置高低适当；再调剂灯的左右位置调剂螺丝孔标有“ ”,使灯丝左右位置合适；2 光源发光体灯丝在显微镜内位置的检验和校正目的是为了把发光体的像端端正正地调入物镜的视域范畴内,从光源的角度去确保显微镜的视域受到充分而匀称的照明,这是调整库勒照明系统的前提条件；需
22、要的基本工具：对中望远镜购置显微镜时已配备；名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 拔掉灯库内的毛玻璃套筒,把灯室装回显微镜上； 选用 10 物镜,开亮光源程序找样品并调焦清晰,再换用 晰 40 物镜可以看清灯丝的全貌； 把聚光镜的孔径光阑和视场光阑均开到最大；40 物镜把样品调焦清 拔掉其中一个目镜,换上对中望远镜,抓住白色部分,另一手伸缩黑色接目镜,就可在视野中看到灯丝像； 如灯丝位置不合适,调“ ”孔,把灯丝像沿水平方向调好,调“ ”孔,把丝像沿垂直方向调好,直至将灯丝像调至刚好布满物镜孔径的光圆像； 调整完毕后,
23、将毛玻璃套筒插回原位,拔掉对中望远镜,换回目镜作下一步调整；以上所述照明光源灯室在显微镜外的调整和光源发光体在显微镜内位置的校验,只需在显微镜初次安装调试及更换灯泡时进行,平常使用显微镜时不能随便乱调乱动；万一调乱时, 可按上述步骤调回原状；3 库勒照明 Kohler 系统的正确调整显微镜的正确调试,主要工作之一是照明光路系统的调整, 而其中的关键是库勒照明系统的调整；对于每一位使用显微镜的人员,特殊是作显微照相的人员来说,应当对库勒照明系统的原理及其调整步骤有肯定的明白和把握,才能充分发挥显微镜应有的功能,拍出来的照片才能在成效上比较一样而又完善；库勒照明系统的原理简洁来说就是：光源发光体上
24、任意一点发出的光,可以照明显微镜的视域范畴, 而光源发光体上每一点所发出的光集合起来,而又匀称的照明；在显微镜的视域中就实现了特别充分调整库勒照明系统的目的,是为了使所观看的视域能获得匀称而又充分的照明,防止杂散光对比相系统造成影响或干扰,以免照相时在底片形成灰雾；高调整库勒照明系统的必要部件：视场光阑、可进行合轴调整的聚光镜系统； 选用 10 物镜和 10 目镜； 把聚光镜前端透镜摆进光路中,孔径光阑调至适中的位置上不大不小,再把聚光镜升到最顶的位置上,聚光镜转盘调至明视野“ J”位置； 把视场光阑调至最小0.1； 载物台上放上已封片的生物样品,开亮光源,调焦清晰； 视域中会显现一个局部照明
25、的区域或亮斑,这是视场光阑的模糊像,在其中可以清晰地看到样品的细节；在它之外是较暗的视域,不肯定能把样品的细节看得清晰；名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 把聚光镜微微地向下调,使视野中的亮斑逐步收小,渐渐变成一个清晰的多边形象,这 便是视场光阑的清晰像； 一般情形下,多边形象并不在视域中心,需要调整聚光镜的一对调中螺丝,把视场光阑 多边形的像调至中心位置； 逐步开大视场光阑,使多边形象成为视域的内接多边形,进一步核对调中的状况,如对 中不够抱负,连续微微调对中螺丝； 将视场光阑稍为再微微开大一些,使它的多边形象恰好
26、消逝在视域的边缘上,至此,库 勒照明系统调整完毕；库勒照明系统调整好以后,整个视域照明匀称,拍照的显微照片光明清晰,反差正常；在日后使用过程中应特殊留意：a. 视场光阑不行任意开大,但可随物镜倍数的增大而将视场光阑收小,随物镜倍数的减小 而开大；b. 聚光镜的高低位置不准乱调,否就会破坏已调整好的库勒照明系统；c. 使用 10 以下物镜时要将聚光镜前端透镜摆出光路外,使用 前端透镜摆入光路中；10 或 10 以上物镜时要将d. 关于物镜倍数与视场光阑大小协作问题,在实际使用过程中,作为一般观看不肯定要收小或开大视场光阑,但作显微照相时,为了防止杂散光线对比相系统的干扰,以便能拍照到较完善的照片
27、, 就应在使用每一个倍数的物镜时,把视场光阑调剂到正好消逝于所观看的视域边上, 这是比较繁复的工作,但又非做不行； 较为简便的方法是把与各个倍数物镜相对应的视场光阑事先调整好,并作好记号,以后使用时依据记号直接调至相应的位置；4 孔径光阑的正确使用由于聚光镜的孔径光阑可以影响显微镜的辨论率,使用时应把握正确的使用方法；过去由于对孔径光阑的熟悉不足,往往把它当作是调剂视野亮度的工具；虽然调剂孔径光阑在肯定程度上可以转变视野的亮度,但会直接影响成像的反差、比照度及辨论率,在使用过程中应尽可能防止；为了发挥聚光镜孔径光阑的作用,以便在观看时,特殊在作显微照相时获得最正确辨论率,在每换用一个倍数的物镜
28、时,在样品调焦清晰后,需要调剂孔径光阑,使它的大小正好等于所用物镜数值孔径物镜孔径像的2/3 ；调整方法是用对中望远镜对焦于视野中黑色相差环上,调剂孔径光阑, 可以看到一个多边形名师归纳总结 的孔径光阑像,然后调到等于物镜孔径像的2/3 ,即介于黑色相差环外与圆形视域内之间；第 8 页,共 13 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 为便利起见, 可把与各倍数物镜相对应的孔径光阑预先调整好,都要重新调整；并作好标记, 以免每次使用2. 显微镜成像光路系统的调整及显微镜检术概要 显微镜成像光路系统的调整,是依据不同显微镜检术的需要而进行的；所谓显微镜检术m
29、icroscopy ,概括而言就是以显微镜观看样品时所使用的照明方法,以及如何使样品所成的像能获得更良好反差的技术与方法；以下简述显微镜检术中已成熟的几种方法及对应的显微镜成像光路系统的调整方法；1 透射光明视野brightfield 这是自显微镜创造以来最传统、最普遍的应用方法；基本部件：a. 物镜：任何物镜都可作明视野观看；b. 聚光镜：各种聚光镜均可,最好配有孔径光阑；调整方法：在上述显微镜的库勒照明系统调整好后,即可应用明视野法；适用范畴：全部已染色的组织切片、血液涂片等；留意事项：a. 使用明视野方法观看时,肯定要将库勒照明系统调整好；b. 视场光阑不行任意开大,别摆事实出和摆进光路
30、中；使用 10 、10 以下和 10 以上物镜时, 要将聚光镜前端透镜分c. 不行用聚光镜的孔径光阑来调剂视野的亮度,更不要乱调聚光镜的高低位置,否就,会 降低显微镜的辨论率和破坏已调整好的库勒照明系统；d. 作显微照相时,每换用一个倍数的物镜,就要调剂聚光镜的孔径光阑,使它的大小正好等于所用物镜数值孔径的2/3 ；这是现代显微镜检术中的一种反差增强法；2 透射光相差法phase-contrast基本部件：相差物镜、明视野与相差兼用的多用途聚光镜、对中望远镜、绿色滤光片；调整方法：a. 在库勒照明系统调整好的基础上,用明视野方法把样品调焦清晰；b. 把聚光镜转到Ph1 对准转盘刻度线位置,选用
31、10 相差物镜,换上待观看的透亮样品；c. 拔掉其中一个目镜,换上对中望远镜,并调焦于视野中的两个相差环上物镜的黑色相 差环和聚光镜的透光相差环；d. 视野中的两个相差环不肯定重合,调剂聚光镜上的两个调剂装置调整相差环左右位置 的调剂杆和调整前后位置的摩擦式转钮,使透光环作前后左右移动而与黑环重合；e. 调整好后,换回观看用目镜,将绿色滤光片按入光路中,即可观看到样品的相差像；名师归纳总结 - - - - - - -第 9 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - f. 有 20 和 40 物镜观看时, 聚光镜应设在Ph2 位置上, 用 100 物镜时,聚光镜应设在Ph
32、3位置上；适用范畴：适用于观看透亮、未染色或不能染色的样品,如各种细胞、活组织、未染色或不 染色的组织切片、水生生物等；3 微分干预相衬法differential interference-contrast,DIC 为了克服相差法观看时样 品细节像四周相伴有光晕,会掩没掉原来应当观察的细节,以及样品或组织切片厚度要求相 当薄,原就上下能厚于 10.m 等局限性,利用双光束干预的原理设计子微分干预相衬法；调整方法 a. 必需在库勒明系统已调好的基础上才能调好 DIC 方法；b. 先用 10 物镜,以明视野先确定好能把样品看清晰的物镜调焦位置；c. 把起偏器 polarizer 摆入照明光路中,留
33、意其取向应为东 西方向；d. 把聚光镜转盘转到与 10 物镜对应使用的位置上,即 DIC 0.3 0.4 ；e. 在物镜后方或物镜转换器上插入 10 物镜使用的 DIC 插片 DIC slider ；f. 把检偏器 analyser 插入成像光路中,留意其取向应为南北方；g. 换上待观看的透亮样品,开亮光源把样品调焦清晰；h. 调剂 DIC 插片,使微分干预相衬的像到达最正确成效,也就是浮雕成效最为明显；i. 同时可调剂聚光镜的孔径光阑,使反差的成效也到达最正确；j. 然后再微小调样品的细节,可见样品中不同层面上的结构；k. 假如把补色器 first order red retardation
34、 plate插入,并同时调剂DIC 插片,可在视野中看到不断变化的绚丽颜色,红、橙、黄、绿、蓝、紫、粉红、粉紫及金黄色都具有；适用范畴：透亮或不能染色的组织切片,厚度可达 生生物等；100.m 左右,培育中的活组织和活细胞、小4 落射光激发的荧光法incident-loght fluorescence Epi-FL简称为落射荧光法,是近代显微镜检术中新进展出来的一种强有力的反差增强法；上方,光由物镜上方经反光镜射入物镜去激发样品,它将激发荧光用的光源改在物镜的 从样品上被激发的荧光经物镜成像并穿透反光镜而由目镜观看；该方法较简便,效率高,50W 的光源强度比透射荧光法的250W仍强；荧光方法是
35、利用波长较短的紫外光、紫光、蓝紫光、 蓝光及绿光等去激发样品,只要样品中含有可产生荧光的成分,它便吸取短波的激发光而释放出波长较长的荧光；不同物质只能吸改特定波长的激发光,而释放的荧光也会有特定的波长,因而用作特异性的鉴定特别有效,名师归纳总结 - - - - - - -第 10 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 如某些致病的细菌和螺旋体,受紫外光激发后能发出它们特有的荧光,很简洁作出鉴定,这种利用物质吸取激发光后放出特有荧光的方法称为自发荧光法；某些物质自身不会吸取激发 光,或吸取后不能释放荧光,但可以吸取或吸附特定的荧光色素或染料,而这些特定的荧光色素或染料
36、也只能吸取特定的激发光,再释放出特定的荧光,从而间接地鉴别出某种物质,这称为间接荧光法；上述荧光方法广泛应用于医学、生物学及工业的特异性讨论和鉴别上；调整方法：荧光显微镜或附有荧光部件的显微镜,调整的方法大致相同； 汞灯的安装 a. 打开包装,取出汞灯将其当心安装在上电极散热帽上,安装时留意手指不能直接接触灯 管和散热帽的正面,汞灯的封气口要对向散热帽的左侧或右侧；b. 把汞灯的上电极引张安装并固定在散热帽底面的小孔上,再把汞灯的下电极及上电极引 线另一端,分别安装在灯座上各自的插孔中并固定；c. 锁紧散热片上的螺丝后,把汞灯连同灯座及散热帽当心装入灯室中,锁紧相应的螺丝,再把灯座上的连线和插
37、座插到汞灯电源后部专用的插座上；d. 具体的安装方法请参照有关说明书； 汞灯灯室在显微镜外的初步调整：a. 接通汞灯电源,让汞灯预热 10-15min ；b. 把汞灯灯室摆放在桌面上,让汞弧投影到 地高度一样的水平线作为参考线；2-3m 外的墙上,划一条与灯室窗口中心线对c. 转动灯室调焦旋钮,使汞弧的像清晰地投影于墙上；d. 分别调剂灯室外壳上的 不要重叠在一起；5 个调剂螺丝孔,把汞弧的像其反射像调成并排且尽量靠近,但 汞灯汞弧在显微镜内位置的检验：a. 将汞灯照明光路系统中的视场光阑开到最大；b. 把荧光滤光片组推到蓝光激发的位置上,以防止汞灯中的蓝光太耀眼；c. 把观看的样品或一块载玻
38、片放在物台上,盖上一张比盖玻片稍大且雪白的薄纸；d. 取下一个物镜,使激发的蓝光经物镜转换器的空档照在白纸上,白纸上会有一蓝色的圆形照明区域, 汞弧的像及其反射像都应当显现在这区域的中心部位,否就, 可调剂灯室调焦旋钮至最清晰,然后分别调剂灯室外壳上的 5 个调剂螺丝孔,直至汞弧的像及其反射像并 排在照明区域的中心位置；e. 调好之后,把物镜装回去,通过目镜可见白纸被蓝光激发后发射出的黄绿色荧光；名师归纳总结 - - - - - - -第 11 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - f. 认真调焦,可看清白纸的纤维；取去白纸,样品上的荧光细节模糊可见而很简洁调焦清晰
39、； 汞灯使用留意事项目前通常使用的为50W 超高气压汞灯,灯管内通有一对钨电极和液态汞室温下附在管壁上,未点燃时,管内气压很低,在灯管的两电极间施加电压角发点燃后, 汞气化为汞蒸气形成汞弧而产生强光,温度上升, 管内气压快速升到10 个大气压；由于是高气压的气体放电,必需明白其特性才能安全地使用汞灯；a. 汞灯接通电源后需要10-15min预热时间, 汞才能充分汽化并形成汞弧,产生高亮度而稳定的激发光；因此,观看前要提早通电；b. 汞灯在使用过程中,不要随便开关汞灯的电源；c. 关掉汞灯电源后,必需等待15-20min ,待汞灯自燃冷却后才可再次接通电源,违反这一操作规定时,将会造成严峻后果！
40、由于汞灯内的汞蒸气未完全液化,汞蒸气内阻很小, 一旦通电在两电极间施加电压,汞灯内形成强大的电流, 轻就烧断保险丝或烧毁汞灯电源中的扼流圈,重就汞灯爆炸, 汞蒸气布满整个试验室,造成工作人员中毒,不仅缺失了汞灯,仍会炸毁灯室内的集光-聚光部件；d. 汞灯的使用寿命一般只有 300h ,使用得当可达 600h ,使用寿命与开关的次数成反比,应集中一批样吕作 2-3h 的观看；汞灯价格及昂贵,应珍爱使用；e. 汞灯寿命终结的标志是点燃困难,灯管发黑；5. 暗视野法 dark field 很多透亮或半透亮的样品,如细菌、微生物、细胞内的精细结构及结晶体的内含物等,在明视野显微镜中不简洁看清晰,假如采
41、纳暗视野法就可以大大提高样品的可视度；以暗视野法所看到的是衬托在黑暗视野背景中发亮的样品轮廓及其细节；普遍光学显微镜的最高辨论率为0.2.m ,而暗视野显微镜虽然对样品的细节构造辨论不清楚,但却可看到 0.004.m 以上微细颗粒的存在,即可以看到亚显微结构,特殊适合用来观察微细的颗粒与细菌等；调整方法： 暗视野法的主要必需部件是暗视野聚光镜；使用时须先用明视野聚光镜把库勒照明系统调整好； 换上暗视野聚光镜时,要把载玻片 样品 移开,将浸没油滴在聚光镜顶部,再把样品载玻片搁在物台上,浸没油便充填在两者之间,这种聚光镜须与装有可变光阑的100 油镜配用；另一种中倍率干式暗视野聚光镜可与中倍率的物
42、镜配用,这种聚光镜具有中心光挡,照明光只能透过光档与聚光镜边缘之间的透光环才能进入聚光镜内；对于配备齐全的相差显微镜,与编号为Ph3 物镜配用的相差聚光镜相差环,可以和10 及10 以下的相差物镜配用而形成低倍率的暗视野成效；名师归纳总结 - - - - - - -第 12 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 光学显微镜的保养显微镜是一种精密的光学仪器,价格普遍较高；从结构上看,显微镜由很多光学部件和较精密的金属零件组成,在使用过程中应特殊留意做好保养工作；1. 严格依据有关操作规章使用显微镜,防止因使用不当造成损毁；2. 显微镜在储存和使用过程中,普遍存在着生霉起雾问题,霉和雾会使显微镜的视场模糊,分辩率下降； 为了使显微镜保持良好的工作状态,清洁、干燥、防尘；延长使用寿命, 显微镜的工作环境应保持3. 显微镜在每次使用完毕后应准时做好清洁工作,特殊是目镜、物镜等简洁污染的光学部 件,如发觉表现外表有灰尘、指纹、脏物等,应准时用镜头纸清洁洁净；4. 显微镜工作室最好能安装空调、抽湿及防尘装置；5. 如发觉光学部件内部有生霉等现象,最好准时联系有关厂家派人清洁、修理；名师归纳总结 - - - - - - -第 13 页,共 13 页