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1、病毒核酸实验室检测步骤具体操作如下：1. 病毒采样：取病人唾液或者鼻咽拭子于病毒采样管保存，常用的采样管中病毒保存液分灭活型与非灭活型，以下为 德晟生产的病毒保存液两种型号：1)灭活型：灭活病毒保存液的颜色为透明的，它的特点是可以杀死病毒，保留核酸片段，一般用来检测新型冠状病毒、流感病毒、手足口病毒及甲乙流感等此图为灭活病毒保存液2)非灭活型：非灭活病毒保存液不含裂解液，可保留病原体的活性与完整性，颜色为粉红色，它主要应用于病毒的培养和繁殖，使检测结果更精准此图为非灭活病毒保存液名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名
2、师精心整理 - - - - - - - 第 1 页，共 4 页 - - - - - - - - - 采样操作步骤2.核酸提取：提取病人唾液或者鼻咽拭子样本里的遗传物质，如果病人携带病毒，则样本里就会有该病毒的遗传物质RNA, 使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取 RNA 时应注意防止 RNA降解。DNA 应置于-20保存， RNA和需长期保存的 DNA 应置于-70或液氮保存。3. 逆转录合成 cDNA: 进行提取液中 RNA 的逆转录，把 RNA 逆转录成 cDNA名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - -
3、 - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 2 页，共 4 页 - - - - - - - - - 逆转录 cDNA合成反应需使用逆转录引物、 dNTPs 、逆转录酶、RNA 酶抑制剂、DTT 、缓冲液和适量无 RNA/DNA 酶的超纯水以及 RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。建议使用商品化RT-PCR 一步法试剂进行第一轮扩增反应。 逆转录 cDNA 合成反应需使用逆转录引物、 dNTPs 、 逆转录酶、RNA 酶抑制剂、 DTT 、缓冲液和适量无RNA/DNA 酶的超纯水以及RNA 模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的
4、温度和时间下进行逆转录反应。使用商品化RT-PCR一步法试剂进行第一轮扩增反应。4.PCR扩增反应（使用二次扩增的套式PCR扩增方法） : 用病毒 cDNA 的特异性引物进行 PCR 扩增PCR 反应需使用引物、 dNTPs 、DNA 聚合酶（如 Taq酶等）、缓冲液、和适量无 RNA/DNA 酶超纯水、以及模板（ DNA 或 cDNA ）。在扩增仪中，按照设定的程序进行扩增。使用二次扩增的套式PCR 扩增方法。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 3 页，共 4 页 -
5、- - - - - - - - 5. 结果分析判定：若有扩增出病毒的DNA 条带，则判定病人体内有该病毒若没有扩增出 DNA 条带，则判定病所取样本无该病毒实验注意事项：1每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照， 只有阳性对照扩增出预期的片段、 阴性对照没有扩增出任何片段、 双份平行样品结果一致的情况下实验才成立，可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定。2核酸检测阳性： 发现核酸阳性反应， 应该重复采集样品进行复测， 复测结果呈核酸阳性反应则判定为核酸阳性，复测结果为核酸阴性反应则判为不确定结果，需进一步随访检测。3核酸检测阴性：只可报告本次实验结果阴性。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 4 页，共 4 页 - - - - - - - - -