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1、1 实验 6 LB 培养基的配置一、实验目的明确培养基配置原理通过对 LB 培养基的配置，掌握配置培养的一般方法二、实验原理LB 培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40时凝固， 通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其p
2、H 调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。LB 培养基的配方如下：酵母提取物5g 蛋白胨10g NaCl 5g 琼脂15 20g 水 1000mL pH 7.47.6 三、实验设备试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（ pH 5.59.0） ，棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。四、实验试剂酵母提取物，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/L NaOH ，1mol/L HCl ；五、操作步骤1称量按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl 放入烧杯中。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一
3、种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 1 页，共 3 页 - - - - - - - - - 2 2溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中， 再加热溶化， 在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌， 以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。3调 pH 在未调 pH 前，先用精
4、密pH 试纸测量培养基的原始pH 值，如果 pH 偏酸， 用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH ，边加边搅拌，并随时用pH 试纸测其pH 值，直至pH 达 7.6。反之，则用 1mol/L HCl 进行调节。注意pH 值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。对于有些要求pH 值较精确的微生物，其pH 的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。4分装按实验要求， 可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4 左右为宜。(2)固体分装分装试管，其装量不
5、超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3 为宜，灭菌后垂直待凝。5加塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。6包扎加塞后， 将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸， 用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。7灭菌将上述培养基以1.05kg/cm2 （15 磅/英寸 2） ，121
6、.3， 20 分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 2 页，共 3 页 - - - - - - - - - 3 8搁置斜面将灭菌的试管培养基冷至50左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。9无菌检查将灭菌的培养基放入37的温室中培养2448 小时，以检查灭菌是否彻底。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 3 页，共 3 页 - - - - - - - - -