发酵工程要点复习资料.docx

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1、精品名师归纳总结资料word 精心总结归纳 - - - - - - - - - - - -学习好资料欢迎下载发酵工程要点复习资料.txt世上最宝贵的不是永久得不到或已经得到的，而是你已经得到并且随时都有可能失去的东西！爱情是灯，友情是影子。灯灭时，你会发觉四周都是影子。朋友，是在最终可以给你力气的人。发酵微生物培育和代谢过程发酵工程利用微生物特性和发酵理论，通过现代化的工程技术手段，进行工业化规模生产，使受培育的微生物细胞积存所需产品的一门技术学科。特点以生命科学为基础结合先进的工程技术手段和其他自然科学原理依据预先的设计改造生物体利用微生物动物或植物体对原料进行加工生产出人类所需产品或达到某

2、种目的的技术传统发酵概念最初发酵是用来描述酵母菌作用于果汁或麦芽汁产愤怒泡的现象，或者是指酒的生产过程。生物化学上发酵指微生物在无氧条件下，分解各种有机物质产生能量的一种方式。或者更严格的说，发酵是以有机物作为电子受体的氧化仍原产能反应。工业上所称的发酵泛指利用微生物细胞制造某些产品或净化环境的过程，它包括厌氧培育的生产过程，如酒精、丙酮、丁醇、乳酸等，以及通气（有氧）培育的生产过程微生物产物是以获得具有多种用途的微生物菌体细胞为目的的产品的发酵工业微生物的生物转化是利用生物细胞对一些化合物某一特定部位（基团）的作用，使它转变成结构相类似但具有更在经济价值的化合物。发酵工业是指利用生物的生命活

3、动产生的酶，无机或有机原料进行酶加工，获得产品的工业。生产菌种的来源依据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买从大自然中分别选择新的微生物菌种。一般菌种分别纯化和选择的步骤标本采集 - 标本材料的预处理- 富集培育 - 菌种初筛 - 菌种复筛 - 性能鉴定 - 菌种保藏采样的留意事项1）保持相对无菌。可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结学习资料 名师精选 - - - - - - - - - -第 1 页，共 14 页 - - - - - - - - - -可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结资料word 精心总结归纳 - - - - - - - -

4、 - - - -学习好资料欢迎下载2）样本的代表性。3）采好的样必需完整的标上样本的种类及采集日期、的点以及采集的点的的理、生态参数等。4）应充分考虑采样的季节性和时间因素，由于真正的原的菌群的显现可能是短暂的。5）采好的样应准时处理，暂不能处理的也应贮存于4下，但贮存时间不宜过长。样品菌液稀释计数直接计数法比浊测定光密度法间接测量法 DNA RNA 粘度产物消耗等 稀释分别法平板涂布分别法组织分别法施加选择性压力分别法主要是利用不同种类的微生物其生长繁衍对环境和养分的要求不同，如温度、pH、渗透压、氧气、碳源、氮源等，人为掌握这些条件，使之利于某些或某种微生物生长，而不利于其他种类微生物的生

5、存，以达到使目的菌种占优势，而得以快速分别纯化的目的。子实体是指在气生菌丝中可产无性或有性孢子，有肯定外形和构造的任何菌丝体组织菌株鉴定外形学 光镜暗视野扫描电镜透射电镜荧光 生理生化试验 糖酵解试验淀粉水解试验遗传学鉴定 PCR测序 微生物菌种选育目的 防止菌种退化解决生产实际问题提高生产才能提高产品质量开发新产品 优良菌株要求1）有关合成产物的途径尽可能的简洁，或者说菌种改造的可操作性要强。2）在发酵过程中不产生或少产生与目标产品性质相近的副产品及其它产物。3）生长繁衍才能强，有较强的生长速率，产生孢子的菌种应当具有较强的产孢子才能。4）产品成本低。能够利用廉价的原料，简洁的培育基，大量高

6、效的合成产物5）有利用广泛来源原料的才能，并对发酵原料成分的波动敏锐性较小。6）对需要添加的前体物质有耐受才能，并且不能将这些前体物质作为一般碳源利用。7）不易感染它种微生物或噬菌体。8）生产特性要符合工艺要求。如发酵过程中产生的泡沫要少，这对提高装料系数、提高单罐产量、降低成本有重要意义。9）遗传性能相对稳固。10）生产菌及其产物的毒性必需考虑（在分类学上最好与致病菌无关）。方法基因突变：自然选育 spontaneous mutation是指不经人工处理，利用微生物的自然突变进行菌种选育strain breeding的过程。生产菌种斜面- 制备单孢子悬浮液- 分别出单菌落 （鉴定移种） -

7、斜面种子 （初筛） - 高产菌株可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结学习资料 名师精选 - - - - - - - - - -第 2 页，共 14 页 - - - - - - - - - -可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结资料word 精心总结归纳 - - - - - - - - - - - -学习好资料欢迎下载- 沙土管菌株 - 斜面种子 - 摇瓶复筛 - 高产纯化株 - 生产试验或进一步选育保藏简洁易行效率低进展慢诱变育种 Mutagenesis breeding是利用各种被称为诱变剂的物理因素和化学试剂处理微生物细胞，提高基因突变频率，再经过适当的选择方法获得

8、所需要的高产优质菌种的育种方法。确定动身菌株菌种的纯化选优动身菌株的性能鉴定同步培育制备单细胞（或单孢子）悬液活菌浓度测定诱变剂的选择与确定诱变剂量的预试验诱变处理（中间培育） 平板分别计外形变异的菌落数，运算突变率挑取疑似突变菌落纯培育突变体的初步选择用简洁快捷的方法重复选择摇瓶发酵试验选出突变体（依据情形进行生产试验或重复诱变处理）速度快、收效大动身菌株（ original strain）指用于诱变育种的起始菌株。要求1）动身菌株要有肯定的目标产物生产才能。2）养分要求低，产孢子多且早。3）生长繁衍快，有良好的代谢特性。4）对诱变剂敏锐，变异幅度大。5）选用多个动身菌株进行诱变收效较快。表

9、型推迟（ phenotypic lag）：表型的转变落后于基因型转变的现象分别性推迟：突变的基因经DNA复制和细胞分裂后变成纯合状态，表型才能表现出来。生理性推迟：由杂合状态变为纯合状态，突变表型仍不能表现出来。光复活作用（photoreactivation）可见光可大大降低经紫外线照耀后微生物死亡率的现象。养分缺陷型（auxotroph ）诱变产生的缺乏合成某些养分物质的才能，须在基本培育基中加入相应的养分成分或其前体物（ precursor）才能正常生长的变异菌株。可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结学习资料 名师精选 - - - - - - - - - -第 3 页，共 14

10、 页 - - - - - - - - - -可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结资料word 精心总结归纳 - - - - - - - - - - - -学习好资料欢迎下载基因重组 gene recombination：将两个不同性状个体内的遗传基因转移到一起，经过遗传分子间的重新组合，形成新遗传型个体的方式杂交杂交育种的优点：a) 由于杂交育种选用了已知性状的供体菌和受体菌作为亲本，因此， 不论在方向性仍是自觉性方面，均比诱变育种前进了一大步。b) 利用杂交育种往往仍可以排除某一菌株在经过长期诱变处理后所显现的产量上升缓慢的现象，因此，它是一种重要的育种手段。方法细菌接合F 因子

11、转导R 因子转移转化和转导原生质体融合protoplast fusion通过人为的方法，使遗传性状不同的两个细胞的原生质体进行融合，以获得兼有双亲遗传性状的稳固重组子的过程。融合子（ fusant ）1）受接合型或致育性的限制小，两亲株没有供体和受体之分，有利于不同种属微生物的杂交。2）重组频率高于其他杂交方法。3）遗传物质的传递更加充分、完善，既有核配又有质配。4）可以采纳温度、药物、紫外线等处理纯化亲株的一方或双方，然后使其融合，选择再生重组子菌落，提高选择效率。5）用微生物的原生质体进行诱变，可明显提高诱变频率。遗传标记的选择 养分缺陷型遗传标记抗药性标记荧光染色标记失活原生质体供体法原

12、生质体的制备融合与再生融合子的鉴定融合子是在选择性培育基上检出的，即通过两个遗传标记互补确定的。如利用养分缺陷型互补等基因工程将外源 DNA通过体外重组后，导入受体细胞，使其在受体细胞中复制、转录、翻译表达的技术称为基因工程或DNA体外重组技术。表达载体必需具备的条件1）能够独立复制。2）应具有敏捷的多克隆位点和便利的选择标记。可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结学习资料 名师精选 - - - - - - - - - -第 4 页，共 14 页 - - - - - - - - - -可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结资料word 精心总结归纳 - - - - - -

13、- - - - - -学习好资料欢迎下载3）应具有很强的启动子，能被大肠杆菌的RNA聚合酶识别。4）应具有使启动子受到抑制的阻遏子，只有在受到诱导时才能进行转录。5）应具有很强的终止子，以便使 RNA聚合酶集中力气转录克隆外源基因，而不转录其他无关基因。6）所产生的mRNA必需具有翻译的起始信号，即起始密码AUG和 SD序列。基因工程菌的稳固性分裂不稳固是指基因工程菌分裂时，显现肯定比例不含质粒的子代菌。结构不稳固是指外源基因从质粒上丢失、碱基重排或缺失，引起基因工程菌性能的转变。影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素外源基因的拷贝数。外源基因的表达效率。表达产物的稳固性。细胞的代谢负荷。真核细胞

14、中具生理作用的基因在大肠杆菌中有三种表达方式，即融合蛋白、非融合蛋白和分泌性表达蛋白融合蛋白是指蛋白质的N 端是一段原核DNA编码的序列，C端接上真核基因编码的序列。优点：基因操作简便，表达蛋白在细菌体内比较稳固，易实现高效表达。缺点：因融合蛋白中含有一段原核多肽序列，会影响真核蛋白的免疫原性（ immunogenicity）。非融合蛋白是在大肠杆菌中以真核蛋白mRNA的 AUG密码子为起始表达的蛋白质。可以很好的保持蛋白质原有的生物活性，其最大的缺点是简洁被蛋白酶降解。分泌型表达蛋白是通过将外源基因连接到编码原核蛋白信号肽的下游实现的。常用的信号肽有碱性磷酸酶phoA 信号肽、膜外周质蛋白O

15、mpA信号肽、霍乱弧菌毒素B 亚单位 CTXB等。基因的定向进化在试验室中仿照自然进化的关键步骤：突变、重组和选择，在较短时间内完成漫长的自然进化过程，有效改造目的物，使之适于人类的需要。基因的直接进化directed evolution在分子水平上，对目标基因直接处理，然后通过高通量的选择方法，提高目标蛋白的性能。定点突变site-specific mutagenesis或 site-directed mutagenesis在目的 DNA片段（例如：一个基因）的制定位点上引入特定的碱基对变化的技术易错 PCR一种相对简洁、快速廉价的随机突变方法通过转变PCR反应条件使扩增的基因显现少量碱基错

16、配，从而导致目的基因的随机突变，关 键是掌握DNA的突变频率Mg2+和 Mn2+提高。 dNTP比例转变DNA Shuffling等基本原理：先将来源不同但功能相同的一组同源基因，用 DNA核酸酶 I 进行消化产生随机小片段，由这些小片段组成一个文库，使之互为引物和模板，进行 PCR扩增，当一个基因拷贝片段作为另一基因拷贝引物时，引起模板转换，重组因而发生，导入体内后，选择正突变体作为新一轮的体外重组。一般通过23 个循环，得到产物大幅度提高的重组突变体。 DNA shuffling分子水平的体外定向进化技术Genome shuffling细胞水平的体内定向进化技术可编辑资料 - - - 欢迎

17、下载精品名师归纳总结学习资料 名师精选 - - - - - - - - - -第 5 页，共 14 页 - - - - - - - - - -可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结资料word 精心总结归纳 - - - - - - - - - - - -学习好资料欢迎下载优良生产菌种应具备的基本特性1）有关合成产物的途径尽可能的简洁，或者说菌种改造的可操作性要强。2）在发酵过程中不产生或少产生与目标产品性质相近的副产品及其它产物。3）生长繁衍才能强，有较强的生长速率，产生孢子的菌种应当具有较强的产孢子才能。4）产品成本低。能够利用廉价的原料，简洁的培育基，大量高效的合成产物5）有利用

18、广泛来源原料的才能，并对发酵原料成分的波动敏锐性较小。6）对需要添加的前体物质有耐受才能，并且不能将这些前体物质作为一般碳源利用。7）不易感染它种微生物或噬菌体。8）生产特性要符合工艺要求。如发酵过程中产生的泡沫要少，这对提高装料系数、提高单罐产量、降低成本有重要意义。9）遗传性能相对稳固。10）生产菌及其产物的毒性必需考虑（在分类学上最好与致病菌无关）。影响微生物菌种稳固性的因素：变异。污染。死亡菌种的衰退 degenration变异有正变（自发突变）和负变两种，负变即菌株生产性状的劣化或有些遗传标记的丢失均称为菌种的退化。衰退的表现1）原有外形外形变得不典型。2）生长速度变慢。3）代谢产物

19、生产才能下降。4）对外界不良环境的抗击力下降。菌种退化现象：菌落颜色的转变，畸形细胞的显现等。菌株生长变得缓慢，产孢子越来越少直至产孢子才能丢失。菌种的代谢活动，代谢产物的生产才能或其对寄主的寄生才能明显下降。衰退的缘由1）根本缘由在于基因自发突变。2）传代次数的影响，使负突变株的比例逐步占了优势。3）与培育条件有关。防止衰退的措施1. 削减传代次数。2. 制造良好的培育条件。3. 利用不易衰退的细胞传代4. 采纳有效的菌种保藏方法。常用措施合理的育种，处理细胞用单核的，防止使用多核细胞。增加突变位点，削减分别回复。诱变处理后分别纯化，以保证保藏菌种纯碎。选用合适的培育基养分相对贫乏的培育基做

20、菌种保藏培育基 制造良好的培育条件以防止菌种退化，如低温、干燥、缺氧等。可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结学习资料 名师精选 - - - - - - - - - -第 6 页，共 14 页 - - - - - - - - - -可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结资料word 精心总结归纳 - - - - - - - - - - - -学习好资料欢迎下载掌握传代次数降低自发突发的机率。确立恰当的移种传代的时间间隔。复壮（ rejuvenation）1. 从衰退的菌种群体中把少数个体再找出来，重新获得具有原有典型性状的菌种 狭义复壮，消极措施 。a）纯种分别 ;b ）通

21、过寄主体进行复壮。2. 有意识的利用微生物会发生自发突变的特性，在日常的菌种爱护工作中不断选择“正变”个体 广义复壮，积极措施。纯种的分别方法菌落纯化 平板划线分别法平板涂布分别法平板倾注分别法细胞纯化 用“分别小室” 进行单细胞分别显微操纵器进行单细胞分别菌丝尖端切割法进行单细胞分别 菌种保藏的原理微生物菌种保藏，原理基本一样，即采纳低温、干燥、缺氧、缺乏养分、添加爱护剂或酸度中和剂等方法，选择优良纯种，最好是它们的休眠体，使微生物生长在代谢不活泼，生长受抑制的环境中。抱负的菌种保藏方法留意事项(1) 经长期保藏后菌种存活健在。(2) 保证高产突变株不转变表型和基因型，特殊是不转变初级代谢产

22、物和次级代谢产物生产的高产才能。(3) 菌种保藏的方法经济。基本要求：在肯定时间内使菌种不死、不变、不乱基本方法：生活态 培育基传代培育，寄主传代培育 休眠态 冷冻，干燥 保藏方法（ 1）斜面冰箱保藏法（ 2）半固体冰箱保藏法（ 3）石蜡油封藏法（ 4）甘油悬液保藏法（ 5）沙土管保藏法（ 6）冷冻干燥保藏法（ 7）液氮保藏法斜面保藏法将菌种定期在新奇琼脂培育基上传代，然后在肯定的生长温度下生长和储存的传代保藏方法。可用于试验室中如干菌种的保藏。此法最为简洁和经济，且不要求任何特殊的设备。但此方法易发生培育基干枯、菌体自溶、基因突变。穿刺保藏法斜面保藏法的改进常用于好气性细菌的保藏，真菌、放线

23、菌等 12cm高的穿刺培育物上掩盖2 3mm的液体石蜡矿物油保藏法在斜面培育或穿刺培育上加一层液体石蜡，防止失水干燥隔绝空气，降低菌种细胞代谢速率。沙土管干燥保藏法可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结学习资料 名师精选 - - - - - - - - - -第 7 页，共 14 页 - - - - - - - - - -可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结资料word 精心总结归纳 - - - - - - - - - - - -学习好资料欢迎下载适用于丝状真菌、放线菌或芽孢细菌的保藏一般沙过80 目，土过100 目，按 12： 1 混合，高度约1cm。也可用硅胶、磁珠或

24、多孔玻璃 珠代替。接种后真空抽干封口。储存期1 年左右。真空冷冻干燥保藏法冷冻干燥的基本方法： 是通过在减压条件下使冻结的细胞悬液中的水分升华，使培育物干燥。此法是微生物菌种长期保藏的最为有效的方法之一。冷冻干燥过程中必需使用冷冻爱护剂，目前国内常用脱脂乳和蔗糖，国外尚有运用动物血清等的。需氧或不需要 好氧发酵，兼性发酵，厌氧发酵培育基呈液态或固态液态发酵投资少，设备易，操作简，因的制宜，原料要求低。厂房面积大，劳动强度大，不易机械化固态发酵 Solid State Fermentation便于掌握，易机械化，易精制，设备小，容量大，可自动掌握，适合大规模生产。投资大，动力消耗大，设备要求高发

25、酵在培育基表面或深层进行表面发酵多厂房，大劳动力，低压鼓风机，动力消耗少，掌握简洁，少污染深层发酵密闭发酵罐，小劳动力，高压空气，动力消耗大，掌握精密，污染严峻间歇发酵或连续进行分批发酵指在一个密闭系统内投入有限数量的养分物质后，接入少量的微生物菌种进行培育，使微生物在特定的条件下只完成一个生长繁衍周期的培育方法补料分批发酵在分批培育的某些阶段适当补加培育基，使菌体或其代谢产物的生产时间延长。排除培育过程中底物的抑制排除产物的反馈抑制可以达到高密度细胞培育延长次级代谢产物的生产时间稀释有毒代谢产物连续发酵按肯定的速度向培育系统内添加新奇的培育基，同时培育液以相同的速度流出，从而使发酵罐内培育物

26、的液量爱护恒定，使微生物细胞能在相对恒定的状态下生长恒浊培育利用浊度检测细胞的浓度。恒化培育恒定输入养料中的某一基质高密度发酵High Cell Density Fermentation 微生物代谢产物的合成完全是靠菌体作为生产者来实现的。菌体量越多产物的产量也越大。因此，通过发酵工程实现高密度微生物细胞培育就是发酵的最终要求。可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结学习资料 名师精选 - - - - - - - - - -第 8 页，共 14 页 - - - - - - - - - -可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结资料word 精心总结归纳 - - - - - -

27、- - - - - -学习好资料欢迎下载透析培育在培育过程中，随着细胞的生长，在培育液中会积存起各种代谢产物，这些物质经常会抑制细胞的生长。此时，采纳透析膜把一些代谢产物排出反应器之外对于排除产物的抑制效应非常有效，但膜易被堵塞。菌种状态 游离发酵，固定化发酵单一或混合菌种 单一纯种发酵，双菌发酵，混合发酵生物反应器利用酶或生物体（如微生物）所具有的生物功能，在体外进行生化反应的装置系统。分酶反应器和细胞生物反应器能爱护肯定的温度、pH、反应物 如养分物质、溶解氧等 浓度应具备良好的传质、传热和混合性能，以便为生物反应的顺当进行供应相宜的环境条件。有肯定的除菌及密封设备，以防止生产过程中因微生

28、物侵入造成的杂菌污染。发酵罐的特点轴封严密，泄漏少能承担肯定压力、温度搅拌通风装置保证气液充分混合具有足够的冷却面积死角少，灭菌完全相宜的径高比（高与直径的比值为2.5 4）发酵罐设计的原就 稳固性掌握性操作性安全性可视性 1、发酵器应能在无菌条件下工作数天，且应在长时间运转过程中保持稳固。2、通气和充分搅拌，以满意微生物代谢的需要，但不应损耗菌体。3、尽可能低的功率消耗。4、发酵罐上应配备有温度和pH值掌握系统以及采样装置5、发酵罐内的蒸发缺失不应太多。6、在放料、清洗和修理等操作过程中具有最低的劳动力消耗。7、发酵罐应有较好的适应性，以满意不同生产厂家的需求。8、发酵罐内表面应光滑。9、用

29、于中试规模的发酵罐与用于实际生产的发酵罐应具有相同的几何外形，有利于放大生产。10、使用既能满意工艺要求又比较廉价的制造材料，同时应配备完善的供应设施。主要由壳体、控温部分、搅拌部分、通气部分、进出料口、测量系统和附属系统等组成。壳体的作用：为整个发酵过程供应一个密封的环境，要求罐体承担的压力至少在0.3MPa 以上。控温部分的作用： 是保证发酵过程在恒温条件下进行，并将生物氧化和机械搅拌产生的热量准时移去。搅拌部分的作用：使罐内物料混合良好，便于菌体吸取养分。另一方面， 搅拌器可以打碎气泡，增加气液接触面积，提高气液间的传质速率，加强氧的传递成效及排除泡沫。通气部分的作用：是从罐的底部向罐内

30、通入无菌空气，一般入口空气压力为0.1 0.2MPa 表压 ，罐顶部有空气出口。进出料口：是指进料和出料用的系统，同时仍配有补料口装置等。可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结学习资料 名师精选 - - - - - - - - - -第 9 页，共 14 页 - - - - - - - - - -可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结资料word 精心总结归纳 - - - - - - - - - - - -学习好资料欢迎下载测量系统： 测量发酵过程中的pH 值、溶解氧等相关数据。此外， 测量装置应能承担肯定的灭菌温度并在长时间内保持稳固。附属系统是指用以观看发酵液情形的视镜

31、装置和强化发酵液混合的挡板等设备。灭菌技术培育基灭菌。发酵罐灭菌。对全部与发酵过程有关的物料进行灭菌。发酵时保持纯种状态。培育基灭菌缘由生产菌与杂菌在培育基中同时生长，使生产菌丢失生产才能。在连续发酵过程中，杂菌有时会比生产菌生长快，使生物反应器中杂菌占优势。杂菌过度生长会污染最终产品。杂菌代谢所产生的物质，使目的产物的分别困难。杂菌使目的产物降解。发酵过程中，如发生噬菌体污染，生产菌细胞会发生溶菌现象，使发酵产物的最终产量或活力大幅度下降。实罐灭菌将培育基置于发酵罐中用蒸汽加热，达到预定灭菌温度后，爱护肯定时间，再冷却到发酵温度，然后接种发酵，这叫做实罐灭菌，又称分批灭菌或间歇式灭菌。操作要

32、点：三路进汽：将蒸汽从进气口、排料口、取样口直接通入罐中，使罐温上升到118120，罐 压爱护在0.090.1Mpa （表压），并保持30min 左右。连续灭菌配制好的培育基在向发酵罐等培育装置输送的同时进行加热、保温顺冷却而进行的灭菌方式。配料预热罐：连消塔：促使培育液的温度快速上升到灭菌温度126 132 。爱护罐：冷却管：优点灭菌的温度较高，灭菌时间较短培育基的养分成分受破坏的程度较低提高了发酵罐的利用率缺点灭菌过程所需的设备较多操作较为麻烦杂菌污染的机会也相应增多培育基过滤除菌法用微孔薄膜过滤，使大于孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌目的。过滤除菌大多用于遇热简洁变性而失效的试剂

33、或培育液。化学杀菌 表面消毒剂可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结学习资料 名师精选 - - - - - - - - - -第 10 页，共 14 页 - - - - - - - - - -可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结资料word 精心总结归纳 - - - - - - - - - - - -学习好资料欢迎下载表面消毒剂是指对一切活细胞都有毒性，不能用作活细胞内的化学治疗用的化学药剂。化学治疗剂空气除菌密闭的深层通气发酵需严格的纯洁培育，进入发酵罐前空气必需进行压缩、冷却、脱水、脱油和过滤除菌等处理。发酵对无菌空气的要求是：无菌，无灰尘，无杂质，无水，无油，正压等

34、几项指标空气除菌的方法1 辐射杀菌杀菌效率较低，杀菌时间较长。一般要结合甲醛蒸汽等来保证无菌室的无菌程度。2 热杀菌基于加热后微生物体内的蛋白（酶）热变性而得以实现。利用压缩空气时产生的热量进行灭菌空气。3 静电除菌利用静电引力来吸附带电粒子而达到除尘灭菌目的。对于一些直径小的微粒，所带电荷小，不能被吸附而沉降。4 过滤除菌是利用过滤介质阻截空气中所含的微生物而获得无菌空气的除菌方法。目前，该方法是广泛应用。空气预处理的目的：一是提高压缩前空气的干净度。二是去除压缩后空气中所带的油和水 空气过滤除菌介质 ）棉花：纤维瘦长，空气阻力较大。）玻璃纤维：直径越小越好，但小易断，缺点：更换时碎末飞扬，

35、过敏）活性炭：大表面，物理吸附，空气阻力小）超细玻璃纤维纸: 以拦截为主，有较高过滤效率。缺点为强度差，受温后纤维松散。）石棉滤板：过滤效率低，耐蒸气反复杀菌。）新型过滤介质：微孔滤膜微孔滤膜：孔径小于0.50 m，甚至小于0.1 m，因而能将空气中的细菌肯定过滤掉。这类过滤介质主要用于滤除空气中的细菌和尘埃，所以滤后空气的质量较易掌握。提高过滤除菌效率的主要措施削减进口空气的含菌数设计和安装合理的空气过滤器，选用除菌效率较高的过滤介质采纳合理的空气预处理设备，以达到较好的除油、水和杂质的目的。空气进入过滤器之前应进行干燥处理，以保证过滤介质正常工作。种子的概念：将储存在沙土管或冷冻干燥管中处

36、于休眠状态的母发酵剂接入试管斜面活化后，再经过摇瓶及种子罐逐级扩大培育，最终获得肯定数量和质量的纯种培育物，即发酵工业上通称的“种子”。生长旺盛，活力较高，推迟期短，接种到发酵罐后能快速生长。细胞浓度相宜，以保证在大型发酵罐中有适当的接种量。生理状态稳固。无杂菌污染。可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结学习资料 名师精选 - - - - - - - - - -第 11 页，共 14 页 - - - - - - - - - -可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结资料word 精心总结归纳 - - - - - - - - - - - -学习好资料欢迎下载生产才能保持稳固Q搅

37、拌 P 860 4186.8 （焦耳 / 小时） 发酵过程中产生泡沫的缘由：外界引进的气流被机械的分散形成泡沫。发酵过程中产生的气体聚结形成的发酵泡沫。使发酵罐的装填系数削减。造成大量逃液，导致产物的缺失。泡沫“顶罐” ，有可能使培育基从搅拌轴处渗出，增加了染菌的机会。由于泡沫的液位变动，以及不同生长周期微生物随泡沫漂浮或黏附在罐盖或罐壁上，使微生物生长的环境发生转变，使微生物群体的非均一性增加。影响通气搅拌的正常进行，阻碍微生物的呼吸，造成发酵反常，导致最终产物产量下降。使微生物菌体提早自溶，这一过程的进展又会促使更多的泡沫生成。消泡剂的加入，会给最终产物的提取带来困难。3、增加溶氧的工艺措

38、施（ 1）转变通气速率 增大通风量 （ 2）转变搅拌速度（ 3）转变气体组成中的氧分压（ 4）转变罐压（ 5）转变发酵液的理化性质（ 6）加入中间传氧介质温度酶活生物合成途径培育基理化性质及菌种对养分的分解吸取微生物生长掌握产热与散热平稳pH酶活细胞膜带电情形从而转变通透影响产物派出培育基养分物质的分解加入缓冲液补加氨水尿素碳酸钙溶解氧促需氧型抑厌氧型无菌空气的通气量和搅拌速度泡沫可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结学习资料 名师精选 - - - - - - - - - -第 12 页，共 14 页 - - - - - - - - - -可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳

39、总结资料word 精心总结归纳 - - - - - - - - - - - -学习好资料欢迎下载占据发酵罐空间影响通气搅拌 导致代谢反常安装消泡挡板或用消泡剂养分浓度菌体生长产物积存代谢途径详细情形掌握分别纯化路线的两个基本阶段：1）初级分别阶段在细胞培育终止之后，其任务是分别细胞和培育液、破裂细胞释放产物（假如产物在胞内） 、溶解包含体、复原蛋白质、浓缩产物和去除大部分杂质等。包含体（ inclusion bodies IBs指细胞或细菌中高表达的蛋白质 也可以汇同其他细胞成分 集合而成的不溶性颗粒。2）纯化精制阶段是在初级分别的基础上，用各种高选择性的手段和方法，将目标产物和干扰杂质尽可能

40、的分开，使产物的纯度达到相应的要求，成为各种级别的产品。生化产品的特点（与化工分别相区分）目的产物在初始物料中的含量低含目的产物的初始物料组成复杂，除了产物外，仍含有大量的细胞、代谢物、残留培育基、无机盐等生物活性物质的稳固性差，对pH、温度、金属离子、有机溶剂、剪切力、表面张力等非常敏锐，易失活、变性生化产品种类繁多，包括了大、中、小分子量的结构和性质复杂又各异的生物活性物质生化产品的应用面广，很多产品用作医药、食品、试剂等，对含量和纯度要求高 回收技术 :絮凝，离心，过滤，微滤 细胞破裂技术 :球磨，高压匀浆，化学破裂 初步纯化技术 :盐析法，有机溶剂沉淀，化学沉淀，大孔吸附树剂，膜分别技

41、术 高度纯化技术 :各类层析，亲和，离子交换 精制与成品加工：喷雾干燥，气流干燥，冷冻干燥，结晶膜分别 - Membrane Separation利用膜的选择性（孔径大小），以膜的两侧存在的能量差（压力差或浓度差）作为推动力，由于溶液中各组分透过膜的迁移率不同而实现分别的一种技术。反渗透： RO reverse osmosis孔径范畴0. 1 1 nm单价盐 超滤： UF ultrafiltration孔径范畴1 100 nm大分子有机物纳滤： NF nanofiltration孔径范畴15 nm小分子有机物或多加盐微滤： MF mocrofiltration孔径范畴0.05 50 m 悬浮颗

42、粒电渗析： ED electro-dialysis可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结学习资料 名师精选 - - - - - - - - - -第 13 页，共 14 页 - - - - - - - - - -可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结资料word 精心总结归纳 - - - - - - - - - - - -学习好资料欢迎下载气体分别： GSgas separation 渗透汽化： PVAP pervaporation膜蒸馏： MD membrane istillation渗析： 又称透析。 一种以浓度差为推动力的膜分别操作，利用膜对溶质的选择透过性, 实现不同性质溶质的分别。即利用半透膜能透过小分子和离子但不能透过胶体粒子的性质从溶胶中除掉作为杂质的小分子或离子的过程。渗析时将胶体溶液置于由半透膜构成的渗析器内，器外就定期更换胶体溶液的分散介质（通常是水），即可达到纯化胶体的目的。渗析时外加直流电场经常可以加速小离子自膜内向膜外的扩散，为电渗析electrodialysis。对于不同种类的膜都有一个基本要求：耐压：膜孔径小，要保持高通量就必需施加较高的压力，一般模操作的压力范畴在0