2022年植物组织培养步骤.docx

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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 植物组织培育细胞 ,原生质体等, 通过无菌操作, 在人工掌握条件下进行培育以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术；植物组织培育概念狭义指用植物各部分组织,如形成层. 薄壁组织 . 叶肉组织 . 胚乳等进行培养获得再生植株, 也指在培育过程中从各器官上产生 愈伤组织 的培育,愈伤组织再经过再分化形成再生植物；组织培育的步骤一、培育基配制配制培育基有两种方法可以挑选,一是购买培育基中全部化学 药品 ,依据需要自己配制；二是购买商品的混合好的培育基基本成分粉剂,如 MS、B5 等；自己配制可以节省费用,但铺张时间、人力、且有时由于药品

2、的质量问题,给试验带来麻烦；就目前国内的情形看,大部分仍是自己配制；为了便利起见,现以 MS培育基 为例介绍配置培育基的主要过程；1、配制几种母液1配制 MS大量元素母液一般将大量元素分别配制成100 倍的母液,使用时再分别稀释100 倍；分别称取 NH4NO3 165g KH2PO4 17g KNO3 190g CaCl2 2H2O 44g MgSO4 7H2O 37g 各自配成1L 的母液；倒入1L 试剂瓶中,存放于冰箱中；2配制 MS微量元素母液 一般将微量元素配制成 100 倍母液；依次称取 KI 0.083g Na2MoO4 2H2O 0.025g H3BO3 0.62g CuSO4

3、 5H2O 0.0025g MnSO4 H2O 1.69g CoCl2 6H2O 0.0025g ZnSO4 7H2O 0.86g 配成 1L 母液,倒入1L 试剂瓶中,存放于冰箱中；CuSO4 5H2O 和 CoCl2 6H2O 由于称取量很小,假如 天平 精确度没有 到达万分之一,可先配成调整液；分别称取 CuSO4 5H2O 0.05g CoCl2 6H2O 0.05g 各自配成100ml 的调整液,然后取5ml 就仍有 0.0025g 的量；3配制 MS有机母液 一般配制成 100 倍 MS有机母液；- 1 - 名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 11 页精选学习资

4、料 - - - - - - - - - 依次称取 肌醇 10g 盐酸硫胺素VB1 0.01g 烟酸 0.05g 甘氨酸 0.2g 盐酸吡哆醇VB6 0.05g 配成 1L 母液,倒入1L 试剂瓶中,存放于冰箱中；4配制 MS铁盐母液 一般配制成 100 倍 MS铁盐母液；依次称取 EDTA二钠 3.73g FeSO4 7H2O 2.78g 配成 1L 母液,倒入1L 试剂瓶中,存放于冰箱中；所以 MS母液有 5 种大量元素母液,加上MS微量元素母液、MS有机母液和 MS铁盐母液,共8 种母液；激素母液的配制各种生长素和细胞分裂素要单独配制,不能混合在一起,生长素类一般要先用少量95%的酒精或1

5、 当量的 NaOH溶解,细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解,然后再加蒸馏水定容；一般取 2、配制培育基100mg配成 100ml 母液；以配置 1L MS 培育基为例,按次序进行如下操作：1先在 烧杯 中放入一些蒸馏水；2分别取上面八种母液 10ml 倒入；3一般称取 30g 蔗糖 倒入,搅拌溶解；4加蒸馏水用 量筒 定溶至 1L；5按设计好的方案添加各种激素,由于激素的用量很小,而且激素 对 组培植物 的生长至关重要；所以有条件的话最好用微量可调移液器吸取,削减误差； 6用精密试纸或酸度计调整 PH至 5.7-5.8；有条件的话使用酸度计,比较精确可配 1 当量的 HCL和 1 当量的 N

6、aOH用来调溶液 PH值；1 当量 HCL配制：用量筒量取8.3ml 配成 100ml 溶液；1 当量 NaOH配制：称取 NaOH 4g 配成 100ml 溶液；7称取 5g 左右琼脂粉质量好的琼脂粉 放在电炉上加热至沸腾,直到琼脂粉熔化；, 倒入上面配好的溶液中,8略微冷却后,分装入培育容器中；无盖的培育容器要用封口膜或 牛皮纸封口,用橡皮筋或绳子扎紧；9放入消毒灭菌锅灭菌,灭菌 20 分钟左右；10灭菌后从灭菌锅中取出培育基,平放在试验台上令其冷却凝固；二、灭菌- 2 - 名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 11 页精选学习资料 - - - - - - - - - 灭

7、菌是组织培育重要的工作之一；初学者要清晰有菌和无菌的范畴；有菌的范畴是：但凡暴露在空气中的物体,接触自然水源的物体,至少它的 外表 都是有菌的；依此观点,无菌室 等未处理的地方、超净台的外表、简洁煮沸的培育基、我们使用的刀、剪在未处理之前、我们身体的整个外 表及与外界相连的内表,如整个消化道、呼吸道,即我们呼出的气体、培 养容器无论洗得多洁净等等都是有菌的；这里所指的菌,包括细菌 、真菌、放线菌、藻类及其他微生物；菌的特点是：微小,肉眼看不见；无处不在,无时不有,无孔不入；在自然条 件下忍耐力强,生活条件要求简洁,繁衍力极强,条件相宜时便可大量滋 生；无菌的范畴是：经高温灼烧或肯定时间蒸煮过后

8、的物体,经其他物理 或化学的灭菌方法处理后的物体当然这些方法必需已经证明是有效的,高层大气、岩石内部、健康的动、植物的不与外部接触的组织内部,强酸 强碱,化学元素灭菌剂等外表和内部都是无菌的；从以上可以看出：在地 球外表无菌世界要比有菌世界小的多；灭菌是指用物理或化学的方法,杀死物体外表和孔隙内的一切微生物 或生物体,即把全部生命的物质全部杀死；与此相关的一个概念是消毒,它指杀死、排除或充分抑制部分微生物,使之不再发生危害作用,明显经 过消毒,很多细菌芽孢、霉菌厚垣孢子等不会完全杀死,即由于在消毒后 的环境里和物品上仍有活着的微生物,所以通过严格灭菌的操作空间接 种、超净台等和使用的器皿,以及

9、操作者的衣着和手都不带任何活着的 微生物；在这样的条件下进行的操作,就叫做无菌操作；植物组织培育对无菌条件的要求是特别严格的,甚至超过微生物的培 养要求,这是由于培育基含有丰富的养分,稍不当心就引起杂菌污染；要 到达完全灭菌的目的,必需依据不同的对象实行不同的切实有效的方法灭菌,才能保证培育时不受杂菌的影响,使试管苗 能正常生长；常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类,即：物理方法如干热烘烧和灼烧、湿热常压或高压蒸煮、射线处理紫外线、超声波、微 波、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施；化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏水、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药 品处理；这些方法和药

10、剂要依据工作中的不同材料不同目的适当选用；1、培育基用湿热灭菌培育基在制备后的24 小时内完成灭菌工序；高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内,其中的蒸汽不能外溢,压力不断上升,使水的沸点不断提高,从而锅内温度也随之增加；在0.1MPa 的压力下,锅内温度达121；在此蒸汽温度下,可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢；留意完全排除锅内空气,使锅内全部是水蒸气,灭菌才能完全；高压灭菌放气有几种不同的做法,但目的都是要排净空气,使锅内匀称升温,- 3 - 名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 11 页精选学习资料 - - - - - - - - - 保证灭菌完全；常用方法是：关闭放气

11、阀,通电后,待压力上升 到 0.05MPa时,打开放气阀,放出空气,待压力表指针归零后,再关闭放气阀；关阀再通电后,压力表上升到达 0.1-0.15MPa ,20 分钟；0.1MPa 时,开头计时,维护压力按容器大小不同,保压时间有所不同,见表；该表所列数字是完全灭 菌很保险的数字,假如容器体积较大,但是放置的数量很少,也可以削减 时间；三、接种接种时由于有一个敞口的过程,所以是极易引起污染的时期,这一时 期主要由空气中的细菌和工作人员本身引起,接种室要严格进行空间消毒；接种室内保持定期用 1%-3%的高锰酸钾溶液对设备、墙壁、地板等进行搽洗；除了使用前用紫外线和甲醛灭菌外,仍可在使用期间用

12、70%的酒精或 3%的 来苏儿喷雾,使空气中灰尘颗粒沉降下来；无菌操作可按以下步骤进行：1在接种 4 小时前用甲醛熏蒸接种室,并打开其内紫外线灯进行杀 菌；2在接种前 20 分钟,打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯；3接种员先洗净双手,在缓冲间换好专用试验服,并换穿拖鞋等；4上工作台后,用酒精棉球搽拭双手,特殊是指甲处；然后搽拭工 作台面； 5先用酒精棉球搽拭接种工具,再将镊子和 剪刀 从头至尾过火一遍,然后反复过火尖端处,对培育皿要过火烤干；6接种时,接种员双手不能离开工作台,不能说话、走动和咳嗽等；7接种完毕后要清理洁净工作台,可用紫外线灯灭菌 30 分钟,假 设连续接种,每 5 天要

13、大强度灭菌一次；接种是将已消毒好的根、茎、叶等离体器官,经切割或剪裁成小段或 小块,放入培育基的过程；现将接种前后的程序连贯地介绍；无菌接种步骤：1将初步洗涤及切割的材料放入烧杯,带入超净台上,用 消毒剂 灭 菌,再用无菌水冲洗,最终沥去水分,取出放置在灭过菌的纱布上或滤纸 上；2材料吸干后,一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀,对材料进行适当的切割；如叶片切成0.5cm 平方的小块；茎切成含有一个节的小段；微茎尖要剥成只含 1-2 片幼叶的茎尖大小等；在接种过程中要常常灼烧接种 器械,防止交叉污染；3用灼烧消毒过的器械将切割好的外植体插植或放置到培育基上；详细操作过程以试管为例是：先解开包口纸,将

14、试管几乎水平拿着,使试管口靠近酒精灯火焰,并将管口在火焰上方转动,使管口里外灼烧数- 4 - 名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 11 页精选学习资料 - - - - - - - - - 秒钟；假设用棉塞盖口,可先在管口外面灼烧,去掉棉塞,再烧管口里面；然后用镊子夹取一块切好的外植体送入试管内,轻轻插入培育基上；假设是叶片直接附在培育基上,以放1-3 块为宜；至于材料放置方法除茎尖、茎段要正放尖端向上外,其他尚无统一要求；接种完后,将管口在火 焰上再灼烧数秒种；并用棉塞,塞好后,包上包口纸,包口纸里面也要过 火；四、培育培育指把培育材料放在培育室有光照、温度条件、无菌里,使

15、之 生长,分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化成再生植株的过程；1、培育方法1 固体培育 法 即用 琼脂 固化培育基来培育植物材料的方法；是现在最常用的方法；虽然该方法设备简洁,易行,但养分分布不均,生长速度不均衡,并常有 褐化中毒现象发生；2 液体培育 法 即用不加固化剂的液体培育基培育植物材料的方法；由于液体中氧气 含量较少,所以通常需要通过搅动或振动培育液的方法以确保氧气的供应,采纳往复式摇床或旋转式摇床进行培育,其速度一般为50-100r/min,这种定期浸没的方法,既能使培育基均一,又能保证氧气的供应；2、培育步骤1初代培育初代培育旨在获得无菌材料和无性繁衍系 ；即接种某些外植体后,最

16、初的几代培育；初代培育时,常用诱导或分化培育基,即培育基中含有较 多的细胞分裂素和少量的生长素；初代培育建立的无性繁衍系包括：茎梢、芽丛、胚状体和 原球茎 等；依据初代培育时发育的方向可分为：1顶芽和腋芽的发育 采纳外源的细胞分裂素,可促进使具有顶芽或没有腋芽的休眠侧芽启 动生长,从而形成一个微型的多枝多芽的小灌木丛状的结构；在几个月内 可以将这种丛生苗的一个枝条转接继代,重复芽苗增殖的培育,并且快速 获得多数的嫩茎；然后将一部分嫩茎转移到生根培育基上,就能得到可种 植到土壤中去的完整小植株；一些木本植物和少数草本植物也可以通过这种方式来进行再生繁衍,如月季 、茶花、 菊花 、 香石竹 等等；

17、这种繁衍方式也称作微型繁衍,它不经过发生愈伤组织而再生,所以是最能使无性系 后代保持原品种的一种繁衍方式；相宜这种再生繁衍的植物,在采样时,只能采纳顶芽、侧芽或带有芽 的茎切段,其他如 种子萌发 后取枝条也可以；- 5 - 名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 11 页精选学习资料 - - - - - - - - - 茎尖培育可看作是这方面较为特殊的一种方式；它采纳极其幼嫩的顶 芽的茎尖分生组织作为外植体进行接种；在实际操作中,采纳包括茎尖分 生组织在内的一些组织来培育,这样便保证了操作便利以及简洁成活；用靠培育定芽得到的培育物一般是茎节较长,有直立向上的茎梢,扩 繁时主要用

18、切割茎段法,如香石竹、矮牵牛、菊花等；但特殊情形下也会 生出 不定芽 ,形成芽丛；2不定芽的发育 在培育中由外植体产生不定芽,通常第一要经脱分化过程,形成愈伤 组织的细胞；然后,经再分化,即由这些分生组织形成器官原基,它在构 成器官的纵轴上表现出单向的极性这与胚状体不同；多数情形下它形 成芽,后形成根；另一种方式是从器官中直接产生不定芽,有些植物具有从各个器官上 长出不定芽的才能如矮牵牛、福禄考、悬钩子等；当在试管培育的条件下,培育基中供应了养分,特殊是供应了连续不断植物激素的供应,使植物形 成不定芽的才能被大大地激发起来；很多种类的外植体外表几乎全部为不 定芽所掩盖；在很多常规方法中不能无性

19、繁衍的种类,在试管条件下却能较简洁地产生不定芽而再生,如柏科 ,松科,银杏等一些植物；很多单子叶植物贮存器官能剧烈地发生不定芽,用百合鳞片的切块就可大量形成不 定鳞茎；在不定芽培育时,也常用诱导或分化培育基；用靠培育不定芽得到的 培育物,一般采纳芽丛进行繁衍,如 非洲菊 、草莓等；3 体细胞胚 状体的发生与发育 体细胞胚状体类似于合子胚但又有所不同,它也通过球形,心形,鱼 雷形和子叶形的胚胎发育时期,最终发育成小苗；但它是由体细胞发生的；胚状体可以从愈伤组织外表产生,也可从外植体外表已分化的细胞中产生,或从悬浮培育的细胞中产生；4初代培育外植体的褐变 外植体褐变是指在接种后,其外表开头褐变,有

20、时甚至会使整个培育 基褐变的现象；它的显现是由于植物组织中的多酚氧化酶被激活,而使细 胞的代谢发生变化所致；在褐变过程中,会产生醌类物质,它们多呈棕褐 色,当扩散到培育基后,就会抑制其他酶的活性,从而影响所接触外植体 的培育；褐变的主要缘由如下：a、植物品种 讨论说明,在不同品种间的褐变现象是不同的；由于多 酚氧化酶活性上的差异,因此,有些花卉品种的外植体在接种后较简洁褐 变,而有些花卉品种的外植体在接种后不简洁褐变；因此,在培育过程中 应当有所挑选,对不同的品种分别进行处理；- 6 - 名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 11 页精选学习资料 - - - - - - -

21、- - b、生理状态由于外植体的生理状态不同,所以在接种后褐变程度也有 所不同；一般说来,处于幼龄期的植物材料褐变程度较浅,而从已经成年 的植株采收的外植体,由于含醌类物质较多,因此褐变较为严峻；一般来 说,幼嫩的组织在接种后褐变程度并不明显,而老熟的组织在接种后褐变 程度较为严峻；c、培育基成分 浓度过高的无机盐会使某些观赏植物的褐变程度增加,此外,细胞分裂素的水平过高也会刺激某些外植体的多酚氧化酶的活性,从而使褐变现象加深；d、培育条件不当假如光照过强、温度过高、培育时间过长等,均可使多酚氧化酶的活性提高,从而加速被培育的外植体的褐变程度；为了提高组织培育的成苗率,必需对外植体的褐变现象加

22、以掌握；可 以采纳以下措施防止、减轻褐变现象的发生；1、挑选合适的外植体一般来说,最好挑选生特长于旺盛的外植体,这样可以使褐变现象明显减轻；2、合适的培育条件无机盐成分、植物生长物质水平、相宜温度、及时继代培育均可以减轻材料的褐变现象；3、使用抗氧化剂在培育基中,使用半胱氨酸、抗坏血酸等抗氧化剂能够较为有效地防止或减轻很多外植体的褐变现象；另外,使用 0.1%-0.5%的活性炭对防止褐变也有较为明显的成效；4、连续转移对简洁褐变的材料可间隔2-24 小时的培育后,再转移到新的培育基上,这样经过连续处理 为减轻；2 继代培育7-10 天后,褐变现象便会得到掌握或大在初代培育的基础上所获得的芽、苗

23、、胚状体和原球茎等,数量都仍 不够,它们需要进一步增殖,使之越来越多,从而发挥快速繁衍的优势；继代培育是继初代培育之后的连续数代的扩繁衍培育过程；旨在繁衍 出相当数量的无根苗,最终能到达边繁衍边生根的目的；继代培育的后代是按几何级数增加的过程；假如以2 株苗为基础,那么经10 代将生成210株苗；继代培育中扩繁的方法包括：切割茎段、别离芽丛、别离胚状体、别 离原球茎等；切割茎段常用于有伸长的茎梢、茎节较明显的培育物；这种方法简便易行,能保持母种特性；培育基常是MS基本培育基 ；别离芽丛适于由愈伤组织生出的芽丛；培育基常是分化培育基；假设芽丛的芽较小；可先切成芽丛小块,放入 MS培育基中, 待到

24、稍大时, 再别离开来连续培育；增殖使用的培育基对于一种植物来说每次几乎完全相同,由于培育物 在接近最良好的环境条件,养分供应和激素调控下,排除了其他 生物 的竞 争,所以能够按几何级数增殖；- 7 - 名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页,共 11 页精选学习资料 - - - - - - - - - 在快速繁衍中初代培育只是一个必经的过程,而继代培育就是常常性 不停的进行过程；但在到达相当数量之后,就应考虑使其中一部分转入生 根阶段；从某种意义上讲,增殖只是储备母株,而生根才是增殖材料的分 流,生产出成品；3继代培育时材料的 玻璃化 实践说明,当植物材料不断地进行离体繁衍时,有些

25、培育物的嫩茎、叶片往往会呈半透亮水迹状,这种想象通常称为玻璃化；它的显现会使试 管苗生长缓慢、繁衍系数有所下降；玻璃化为试管苗的生理失调症；由于显现玻璃化的嫩茎不宜诱导生根,因此,使繁衍系数大为降低；在不同的种类、品种间,试管苗的玻璃化程度也有所差异；当培育基上细 胞分裂素水平较高时,也简洁显现玻璃化现象；在培育基中添加少量聚乙 烯醇、脱落酸等物质,能够在肯定程度上减轻玻璃化的现象发生；出现玻璃化的试管苗,其茎、叶外表无蜡质,体内的极性化合物水平 较高,细胞持水力差,植株蒸腾作用强,无法进行正常移栽；这种情形主 要是由于培育容器中空气湿度过高,透气性较差造成的,其详细解决的方 法为：a、增加培

26、育基中的溶质水平,以降低培育基的水势；b、削减培育基中含氮化合物的用量；c、增加光照d、增加容器通风,最好进行 有明显的作用；CO2施肥,这对减轻试管苗玻璃化的现象e、降低培育温度, 进行变温培育,有助于减轻试管苗玻璃化现象发生；f 、降低培育基中细胞分裂素含量,可以考虑加入适量脱落酸；3、生根培育 当材料增殖到肯定数量后,就要使部分培育物分流到生根培育阶段；假设不能准时将培育物转到生根培育基上去,就会使久不转移的苗子发黄 老化,或因过分拥挤而使无效苗增多造成抛弃铺张；根培育是使无根苗生根的过程,这个过程目的是使生出的不定根 浓密而粗大；生根培育可采纳1/2 或者 1/4MS 培育基,全部去掉

27、细胞分裂素,并加入食粮非的生长素 NAA、IBA 等；诱导生根可以采纳以下方法 a、将新梢基部浸入 50 或 100*10-6IBA 溶液中处理 4-8 小时；b、在含有生长素的培育基中培育 4-6 天 c、直接移入含有生长素的生根培育基中；上述三种方法均能诱导新梢生根,但前两种方法对新生根的生长发育 就更为有利；而第三种对幼根的生长有抑制作用；其缘由是当根原始体形 成后较高浓度生长素的连续存在,就不利于幼根的生长发育；不过这种方 法比较可行；- 8 - 名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页,共 11 页精选学习资料 - - - - - - - - - 另外也可采纳以下方法就可生

28、根；1、延长在增殖培育基中的培育时间；2、有意降低一些增殖倍率,削减细胞分裂素的用量即将增殖与生根合并 为一步； 3、切割粗大的嫩枝在养分钵中直接生根,此方法就没有生根阶 段；可以省去一次培育基制作,切割下的插穗可用生长素溶液浸蘸处理,但这种方法只适于一些简洁生根的作物；另外少数植物生根比较困难时,就需要在培育基中放置滤纸桥,使其 略高于液面,靠滤纸的吸水性供应水和养分,从而诱发生根；从胚状体发育成的小苗,常常有原先已分化的根,这种根可以不经诱 导生根阶段而生长；但因经胚状体发育的苗数特殊多,并且个体较小,所 以也常需要一个低浓度或没有植物激素的培育基培育的阶段,以便壮苗生 根；试管内生根壮苗

29、的阶段,为了胜利地将移植到试管外的环境中,以使 试管苗适应外界的环境条件；通常不同植物的相宜驯化温度不同；如菊花,以 18- 20为宜；实践证明植物生长的温度过高不但会牵涉到蒸腾加强；而 且仍牵涉到菌类易滋生的问题；温度过低使幼苗生长缓慢,或不易成活；春季低温时苗床可加设电热线,使基质温度略高于气温2- 3,这不但有利于生根和促进根系发达,而且有利于提前成活；移植到试管外的植物 苗光 强度应比移植前培育有所提高,并可适应强度较高的漫射光,约 4000lx 左右,以维护 光合作用 所需光照强度；但光线过强刺激蒸腾加强,会使 水分平稳的冲突更尖锐；五、驯化移栽试管苗移栽是组织培育过程的重要环节,这

30、个工作环节做不好,就会 造成前功尽弃；为了做好试管苗的移栽,应当挑选合适的基质,并协作以 相应的治理措施,才能确保整个组织培育工作的顺当完成；试管苗由于是在无菌、有养分供应、相宜光照和温度近 100%的相对湿 度环境条件下生长的,因此,在生理、形状等方面都与自然条件生长的小 苗有着很大的差异；所以必需通过炼苗,例如通过控水、减肥、增光、降 温等措施,使她们逐步地适应外界环境,从而使生理、形状、组织上发生 相应的变化,使之更适合于自然环境,只有这样才能保证试管苗顺当移栽 胜利；从叶片上看,试管苗的角质层不发达,叶片通常没有表皮毛,或仅有 较少表皮毛,甚至叶片上显现了大量的水孔,而且,气孔的数量、

31、大小也 往往超过一般苗；由此可知,试管苗更适合于高湿的环境生长,当将它们 移栽到试管 外环境 时,试管苗失水率会很高,特别简洁死亡；因此,为了 改善试管苗的上述不良生理、形状特点,就必需经过与外界相适应的驯化 处理,通常实行的措施有：对外界要增加湿度、减弱光照；对试管内要通 透气体、增施二氧化碳肥料、逐步降低空气湿度等；- 9 - 名师归纳总结 - - - - - - -第 9 页,共 11 页精选学习资料 - - - - - - - - - 另外,对栽培驯化基质要进行灭菌是由于试管苗在无菌的环境中生长,对外界细菌、真菌的抵挡才能极差；为了提高其成活率,在培育基质中可掺入 75%的百菌清可湿性

32、粉剂 1、移栽用基质和容器200-500 倍液,以进行灭菌处理；适合于栽种试管苗的基质要具备透气性、保湿性和肯定的肥力,简洁 灭菌处理,并不利于杂菌滋生的特点,一般可选用珍宝岩、蛭石、砂子等；为了增加粘着力和肯定的肥力可协作草炭土或腐殖土；配时需按比例搭配,一般用珍宝岩、蛭石、草炭土或腐殖土比例为1：1：0.5 ；也可用砂子：草炭土或腐殖土为 1： 1；这些介质在使用前应高压灭菌；或用至少小时烘烤 来毁灭其中的微生物；要依据不同植物的栽培习性来进行配制,这样才能 获得中意的栽培成效；以下介绍几种常见的试管苗栽培基质；1河砂 河砂分为粗砂、细砂两种类型；粗砂即平常所说的河砂,其颗粒直径为 1-2

33、mm；细砂即通常所说的面砂,其颗粒直径为0.1-0.2nm ；河砂的特点是排水性强,但保水蓄肥才能较差,一般不单独用来直接栽种试管苗；2草炭土 草炭土是由沉积在沼泽中的植物残骸经过长时间的腐烂所形成,其保 水性好,蓄肥才能强,呈中性或微酸性反应,但通常不能单独用来栽种试 管苗,宜与河砂等种类相互混合配成盆土而加以使用；3腐殖土 腐殖土是由植物落叶经腐烂所形成；一种是自然形成,一种是人为造 成,人工制造时可将秋季的落叶收集起来,然后埋入坑中,灌水保湿的条件下使其风化,然后过筛即可获得；腐叶上含有大量的矿质养分 、有机物质,它通常不能单独使用；掺有腐殖土的栽培基质有助于植株发根；4容器 栽培容器可

34、用 6*6cm-10*10cm 的软塑料钵,也可用育苗盘；前者占地 大,耗用大量基质,但幼苗不用移栽,后者需要二次移苗,但省空间、省 基质；2、移栽前的预备移栽前可将培育物不开口移到自然光照下锤炼 强光的照耀,使其长得壮实起来,然后再开口练苗 的处理,以适应将来自然湿度的条件；3、移栽和幼苗的治理2-3 天,让试管苗接受 1-2 天,经受较低湿度从试管中取动身根的小苗,用自来水洗掉根部粘着的培育基,要全部 除去,以防残留培育基滋生杂菌；但要轻轻除去,应防止造成伤根；移植 时用一个筷子粗的竹签在基质中插一小孔,然后将小苗插入,留意幼苗较 嫩,防止弄伤,栽后把苗四周基质压实,栽前基质要浇透水；栽后

35、轻浇薄 水；再将苗移入高湿度的环境中；保证空气湿度达 90%以上；- 10 - 名师归纳总结 - - - - - - -第 10 页,共 11 页精选学习资料 - - - - - - - - - 1保持小苗的水分供需平稳；在移栽后5-7 天内,应赐予较高的空气湿度条件,使叶面的水分蒸发削减,尽量接近培育瓶的条件,让小苗始 终保持挺立的状态；保持小苗水分供需平稳第一养分钵的培育基质要浇透 水,所放置的床面也要浇湿,然后搭设小拱棚,以削减水分的饿蒸发,并且初期要常喷雾处理,保持拱棚薄膜上有水珠显现；当5-7 天后,发觉小苗有生长趋势,可逐步降低湿度,削减喷水次数,将拱棚两端打开通风,使小苗适应湿度

36、较小的条件；约15 天以后揭去拱棚的薄膜,并赐予水分控制,逐步削减浇水,促进小苗长得粗大；2防止菌类滋生；由于试管苗原先的环境是无菌的,移出来以后难 以保持完全无菌,因此,应尽量不使菌类大量滋生,以利成活；所以应对基质进行高压灭菌或鸿烤灭菌；可以适当使用肯定浓度的杀菌剂 以便有效的爱护幼苗,如多菌灵、托布津,浓度800-1000 倍,喷药宜7-10 天一次；在移苗时尽量少伤苗,伤口过多,根损耗过多,都是造成死苗的缘由；喷水时可加入0.1%的尿素,或用1/2MS 大量元素的水溶液作追肥,可加快苗的生长与成活；3肯定的温、光条件；试管苗移栽以后要保持肯定的温光条件,相宜的生根温度是 18- 20,

37、冬春季地温较低时,可用电热线来加温；温度 过低会使幼苗生长缓慢,或不易成活；温度过高会使水分蒸发,从而使水 分平稳受到破坏,并会促使菌类滋生；另外在光照治理的初期可用较弱的光照,如在小拱棚上加盖遮阳网或 报纸等,以防阳光灼伤小苗和增加水分的蒸发；当小植株有了新的生长时,逐步加强光照,后期可直接利用自然光照；促进光合产物的积存,增强抗 性,促其成活；4保持基质适当的通气性；要挑选适当的颗粒状基质,保证良好的通气作用；在治理过程中不要浇水过多,过多的水应快速沥除,以利根系呼吸；综上所述,试管苗在移栽的过程中,只要把水分平稳、相宜的介质、掌握杂菌和相宜的光、温条件掌握好,试管苗是很简洁移栽的；- 11 - 名师归纳总结 - - - - - - -第 11 页,共 11 页