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1、实验一光学显微镜的构造和使用方法 实验目的 1. 熟悉光学显微镜各部分的结构和用途，掌握显微镜维护的基本知识。2. 初步掌握低倍镜、高倍镜和油镜的使用方法。 实验用品 1. 材料：羊毛装片、血涂片、字母装片、兔脊神经节切片。2. 器材：显微镜、擦镜纸、载玻片、香柏油、二甲苯。 实验内容与方法一、显微镜的构造显微镜是一种复杂的光学仪器。它是医学实验常用工具之一，其作用是将观察的标本放大，以便观察和分析。一般光学显微镜包括机械装置和光学系统两大部分，如图1-1 所示。一机械装置1. 镜座：位于最底部的构造，为整个显微镜的基座，用以支持着整个镜体，起稳固作用。2. 镜柱：为垂直于镜座上的短柱，用以支
2、持镜臂。3. 镜臂：为支持镜筒和镜台的呈弓形结构的部分，是取用显微镜时握拿的部分。镜筒直立式光镜在镜臂与其下方的镜柱之间有一倾斜关节，可使镜筒向后倾斜一定角度以方便观察，但使用时倾斜角度不应超过45，否则显微镜由于重心偏移容易翻ss 倒。4. 调节器：也称调焦螺旋，为调节焦距的装置，位于镜臂的上端镜筒直立式光镜或下端镜筒倾斜式光镜，分粗调节器( 大螺旋和细调节器小螺旋两种。粗调节器可使镜筒或镜台作较快或较大幅度的升降，能迅速调节好焦距, 适于低倍镜观察时调焦。细调节器可使镜筒或镜台缓慢或较小幅度地升降，使用于在低倍镜下用粗调节器找到物体后，在高倍镜和油镜下进行焦距的精细调节，藉以对物体不同层次
3、、深度的结构做细致地观察。5. 镜筒：位于镜臂的前方， 它是一个齿状脊板与调节器相接的圆筒状结构，上端装载目镜，下端连接物镜转换器。根据镜筒的数目, 光镜可分为单筒式和双筒式。单筒光镜又分为直立式和倾斜式两种 , 镜筒直立式光镜的目镜与物镜的光轴在同一直线上, 而镜筒倾斜式光镜的目镜与物镜的中心线互成45角 , 在镜筒中装有使光线转折45的棱镜；双筒式光镜的镜筒均为倾斜式的。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页，共 7 页6. 物镜转换器：又称旋转盘，位于镜筒下端的一个可旋转的凹形圆盘上，一般装有24个放大倍数不同的接物镜。旋转它
4、就可以转换接物镜。旋转盘边缘有一定卡，当旋至物镜和镜筒成直线时，就发出“咔”的响声，这时方可观察玻片标本。7. 镜台：也称载物台, 是位于镜臂下面的平台，用以承放玻片标本。载物台中央有一圆形的通光孔，光线可以通过它由下向上反射。8. 标本推进器：位于镜台的后方或侧面边缘，连一可动弧形弹簧夹。其上方或下方一侧有两个旋钮，转动旋钮可调节推进器，使玻片标本前后或左右移动。标本推进器上有纵横游标尺，用以测定标本在视野中的方位及其大小。游标尺一般由主标尺(a) 和副标尺 (b) 组成。副标尺的分度为主标尺的9/10 。使用时，首先看副标尺的0 点位置。然后看主、副标尺的一致点。如图i-2所示，副标尺的0
5、 点主标尺的26 与 27 之间，副标尺的6与主标尺的32 一致，即6 与主标尺上的一个分度线正对，则此标尺所表示的数值为。图 1-2 游标尺的用法 ( 二) 光学系统1. 反光镜：是装在镜台下面、镜柱前方的一面可转动的圆镜，它有平凹两面。平面镜聚光力弱，适合光线较强时使用。凹面镜聚光力强，适于光线较弱时使用。转动反光镜，可将光源反射到聚光镜上，再经镜台中央圆孔照明标本。2. 聚光镜：在镜台下方，是一组透镜，用以聚集光线增强视野的亮度。镜台上方有一调节旋钮，转动它可升降聚光镜。往上升时增强反射光，下降时减弱反射光。3. 可变光栏：是在聚光镜底部的一个圆环状结构。它装有多片半月形的薄金属片，叠合
6、在中央成圆孔形。在圆环外缘有一突起的小柄，拨动它可使金属片分开或合拢，用以控制光线的强弱，使物像变得更清晰。4. 目镜： 装在镜筒上端， 其上一般刻有放大倍数( 如 5，10)。目镜内常装有一指示针，用以指示要观察的某一部分。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页，共 7 页图 1-1 显微镜的结构1. 目镜 2. 镜筒 3. 物镜转换器 4. 物镜 5. 通光孔 6. 聚光器 7. 光圈8. 反光镜 9. 粗调节器 10. 细调节器 11. 镜臂 12. 推进器 13. 载物台14. 倾斜关节 15. 镜柱 16. 镜座 17.
7、照明装置 18. 粗调限位环凸柄标本推进器上有纵横游标尺，用以测定标本在视野中的方位及其大小。游标尺一般由主标尺 (a) 和副标尺 (b) 组成。副标尺的分度为主标尺的9/10 。使用时，首先看副标尺的0 点位置。然后看主、副标尺的一致点。如图i-2所示，副标尺的0 点主标尺的26 与 27 之间，副标尺的 6 与主标尺的32 一致，即6 与主标尺上的一个分度线正对，则此标尺所表示的数值为。5. 物镜：装在物镜转换器上，一般分低倍镜、高倍镜和油镜三种。低倍镜镜体较短，放大倍数小；高倍镜镜体较长，放大倍数较大；油镜镜体最长，放大倍数最大在镜体上刻有数字，低倍镜一般有4、 10，高倍镜一般有40、
8、 45，油镜一般是90、 100，表示放大倍数。显微镜放大倍数的计算：目镜放大倍数物镜放大倍数=显微镜对实物的放大倍数。二、显微镜的使用方法(一 ) 低倍镜的使用精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页，共 7 页1. 把显微镜放在桌面的左侧，镜臂对向胸前，坐下进行操作。用手转动粗调螺旋，使镜筒上升，然后转动物镜转换器，使低倍镜对准镜台中央圆孔当转动到听见“咔”声响，或同时亦感到有阻力时立即停止转动，说明物镜已与镜筒成一直线。2. 对光：拨动聚光镜底部圆环的小柄，使光栏完全打开。旋转聚光镜升降螺旋，使聚光镜上升到和镜台相平。用左眼两个
9、眼睛都要睁开在目镜上观察，同时用手调整反光镜，对好光源。要求视野到达完全均匀明亮。3. 放置玻片标本：取蛙血玻片标本放在镜台上，有盖玻片的一面朝上。玻片两端用移动器夹住，然后转动螺旋，使玻片上要观察的标本对准镜中央圆孔。注意， 镜台上的刻度可以标示玻片的坐标位置。4. 调节物距：转动粗调螺旋，使低倍镜距玻片标本左右。注意：必须从显微镜侧面观察物镜与玻片的距离。切勿用眼在目镜上观察的同时转动粗调螺旋，以防镜头碰撞玻片造成损坏。用左眼从目镜上观察，用手慢慢转动粗调螺旋下降镜台，当视野中出现物像时，再调节细调螺旋，直至视野中出现清晰的物像许多椭圆形的红细胞为止。如果物像不在视野中央，可稍微移动玻片位
10、置注意：移动玻片的方向与观察物像移动的方向恰好是相反的。反复练习上述各操作步骤，做到迅速熟练地找到标本，以及取光合适即较熟练的应用反光镜、光栏和聚光镜。(二 ) 高倍镜的使用1. 一定要先在低倍镜下找到要观察的标本物像后，并把要放大的部分移至视野正中，同时调节到最清晰程度，才能进行高倍镜的观察。2. 转动物镜转换器，使高倍镜转到镜台中央圆孔处。转换高倍镜时速度要慢，要细心，并从侧面进行观察 防止高倍镜碰撞玻片。如果高倍镜碰到玻片，说明低倍镜的物距没有调节好，应重新进行操作。3. 调节物距：转换好高倍镜后，用左眼在目镜上观察。这时物像往往不清楚、或者要观察的部分不在视野当中，可用细调螺旋慢慢向上
11、或向下转动切勿用粗调螺旋即能清楚看到物像。一般只需转动半圈或一圈就能到达要求。在高倍镜下，可见蛙血红细胞呈椭圆形，外被细胞膜，膜内为浅红色细胞质，中央有一圆形呈蓝紫色的细胞核。(三 ) 油镜的使用1. 首先在高倍镜下找到所要观察的标本后，把所要观察的部分移至视野中央。2. 转动物镜转换器，移开高倍镜，在标本上所要观察的位置加一滴镜油香柏油。3. 转动物镜转换器，转换油镜，使之对准镜台中央圆孔处，浸在油滴中。4. 转换好油镜后，用左眼在目镜上观察。物像如不清楚，可用细调螺旋慢慢向上或向下转动，即能清楚地看到物像。如仍看不清标本，需重新用低倍镜、高倍镜观察，然后再转换油镜。精选学习资料 - - -
12、 - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页，共 7 页5. 观察完标本后， 用滴加上二甲苯的擦镜纸擦拭干净油镜镜头，再用另一张清洁的擦镜纸盖在玻片标本上，滴上12 滴二甲苯，轻拉擦镜纸，将玻片上的镜油擦去。注意，勿擦坏标本。三、使用显微镜注意事项1. 持镜时要一手紧握镜臂，一手托住镜座，绝不能一把提起显微镜便走，以防目镜从镜筒滑出或反光镜脱落。2. 轻拿轻放，不要把显微镜放在实验台边缘一拳，防止碰翻落地。3. 显微镜光学系统部件要用清洁的擦镜纸轻轻揩擦，切勿口吹、手抹或用粗布揩擦。4. 使用时先用 低倍镜调整光线。观察活体标本或染色较浅 的标本时，要适当关小可
13、变光栏便视野变暗，方能看得清楚。5. 放置玻片标本时要对准镜台孔正中央，并且不能反放玻片，如标本玻片反放时高倍镜下看不到物像，并容易压坏玻片或物镜。6. 观察时要 双目睁开 ，切勿闭上一只眼睛。左眼观察视野，右眼用以绘图。低倍镜用粗调螺旋调节物距，高倍镜要用细调螺旋，粗、细调节螺旋都不能单方向过度地旋转。单向上升粗调螺旋会压碎镜片和损坏物镜。7. 不要随便取出目镜，以防尘土落人物镜上。也不要任意拆卸任何零件，以防损坏。8. 使用完毕后，转动粗调螺旋使镜台下降，取下玻片，转动物镜转换器，使物镜离开聚光孔。再上升镜台使物镜接近镜台不要对着镜台孔。然后以右手握镜臂，左手托镜座轻轻放人镜箱中。9. 每
14、次使用显微镜之前，先按显微镜登记卡片逐项检查显微镜各部分有无损坏。如发现损坏，应及时向教师报告。使用之后，认真填写显微镜使用登记卡片。四、操作练习一低倍镜、高倍镜的使用练习1. 观察文字或字母装片：取一片字母装片，用低倍镜观察，反复练习对光、调光、标本放置和调节焦距等。如将玻片前后左右移动时，注意物像与玻片移动方向是否一致，玻片上的字母是正像还是反像，为什么?2. 观察羊毛片或头发交叉装片：取一张毛发交叉装片，先用低倍镜观察，找到两根毛发后，再将毛发交叉点移到视野中央，然后换高倍镜观察，再轻微转动细调节器，观察不同层次，判定哪条毛发在上方，哪条位于下方。二油镜的使用练习精选学习资料 - - -
15、 - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页，共 7 页1. 取一张血涂片或取血一小滴，滴于清洁的载玻片一端，另取一张边缘平整的载玻片，按照图 1-3 所示做成血涂片。先用低倍镜再用高倍镜进行观察。图 1-4 蛙血涂片图 1-5 运动神经细胞2. 用油镜观察，并分辨红细胞、白细胞和淋巴细胞，比较三种物镜的放大倍数和分辨率。3. 观察兔脊神经节切片示固定染色的细胞取兔脊神经节切片标本先在调好光线的低倍镜下观察固定染色的标本需调较亮光线，低倍镜下找到要观察的标本，为淡紫色的神经节切面，在其外围包有被膜，且向内伸入，形成神经节的结缔组织支架，节内有许多大小不等的神经细
16、胞，呈散在分布。然后转换高倍镜，选择完整而清晰的圆形图 1-6感觉神经细胞神经细胞仔细观察其内部结构。可见到在细胞中央有一圆形核，核内有着色为深紫红色的圆形核仁及染色质颗粒， 核与细胞膜之间是均匀浅紫色的细胞质，在细胞的外面围有假设干个被囊细胞，它起保护神经细胞的作用。在神经细胞之间还可看到有轴索横断面和许多神经纤维，多呈交错排列。s 精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页，共 7 页图 1-3 血涂片的制备方法4. 观察完毕，务必将油镜按正确方法擦净。五、其它几种显微镜简介目前在生物学和医学研究中，常用的显微镜，还有以下几种：1.
17、 双筒解剖显微镜：解剖较小标本或观察玻片标本的全貌时，需使用解剖显微镜，以观察自然状态下较小的实体正像和较大的玻片标本，或解剖细小生物。2. 暗视野显微镜： 是一种具有暗视集中器或中央遮光板的显微镜。即在聚光镜上加一特殊装置， 使光线从集光器透镜的边缘衍射或反射到标本上，经标本反射投入物镜内，使整个视野变暗，故能在视野中见到被检物体衍射之图像。这种显微镜可观察运动着的有机体。3. 荧光显微镜：其特点是以紫外光为光源，利用紫外光照射，使标本内的荧光物质激发出不同颜色的荧光，以研究标本内某些物质的特征和位置。有些物质本身能发出荧光，有些物质需经荧光染料染色后才能发出荧光。4. 相差显微镜：活细胞在
18、普通光镜下，一般不能分辨其细微结构。这是由于各细微结构的折光性很近似或比照不够显著的缘故。相差显微镜则是在聚光器下装一个环状光栏，其物镜是安有相板的相差物镜。环状光栏的作用是造成空心的光线锥，使直射光和衍射光别离。相板的作用是使直射光和衍射光发生干预，导致相位差变成振幅差( 即明暗差 ) ，使反差加强。所以，可以观察活细胞中不同染色的微细结构。5. 倒置显微镜：物镜位于标本的下方，而光源位于标本的上方。主要用于细胞培养时观察培养瓶中细胞的生长情况。 实验报告与思考题绘图1. 绘制兔脊神经节细胞( 高倍视野 ) 。2. 绘制蛙血细胞( 油镜视野 ) 。思考题1. 怎样区分低倍镜、高倍镜和油镜，为什么用高倍镜或油镜时，必须从低倍镜开始?2. 如果在高倍镜下末找到你所要看的物象，应从哪些方面找原因?3. 经过哪些步骤才能在物镜下找到清楚的物像?精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页，共 7 页