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1、第36讲基因工程,第十单元现代生物科技专题,考纲要求1.基因工程的诞生()。2.基因工程的原理及技术(含PCR技术)()。3.基因工程的应用()。4.蛋白质工程()。5.实验：DNA的粗提取和鉴定。,考点一基因工程的操作工具,考点二基因工程的操作过程与应用,内容索引,考点三DNA的粗提取与鉴定,重温高考演练模拟,知识网络答题语句,课时作业,考点一,基因工程的操作工具,1.基因工程的概念(1)供体：提供。(2)操作环境：。(3)操作水平：水平。(4)原理：。(5)受体：表达目的基因。(6)本质：性状在体内的表达。(7)优点：克服的障碍，定向改造生物的。,梳理知识要点,目的基因,体外,分子,基因重
2、组,受体,远缘杂交不亲和,遗传性状,2.DNA重组技术的基本工具(1)限制性核酸内切酶(简称：限制酶)来源：主要是从生物中分离纯化出来的。作用：识别特定的并切开特定部位的两个核苷酸之间的_。结果：产生或平末端。(2)DNA连接酶作用：将限制酶切割下来的DNA片段。,原核,核苷酸序列,磷酸二酯键,黏性末端,拼接成DNA分子,类型,DNA连接酶和限制酶的关系,大肠杆菌,黏性末端,黏性末端和平末端,磷酸二酯键,(3)载体种类：、噬菌体的衍生物、动植物病毒等。,质粒的特点,能自我复制有一个至多个_有特殊的_,质粒,限制酶切割位点,标记基因,易混辨析载体和膜载体基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不
3、同。基因工程中的载体是质粒或动植物病毒等，能将目的基因导入受体细胞内；膜载体是蛋白质，与细胞膜的选择透过性有关。,1.判断常考语句，澄清易混易错(1)限制性核酸内切酶、DNA连接酶和质粒是基因工程中常用的三种工具酶()(2)切割质粒的限制性核酸内切酶均能特异性地识别6个核苷酸序列()(3)DNA连接酶能将两碱基间通过形成的氢键连接起来()(4)EcoliDNA连接酶既可连接平末端，又可连接黏性末端()(5)载体的作用是携带目的基因导入受体细胞中，使之稳定存在并表达(),2.分析命题热图，明确答题要点下图中的图1和图2分别表示的是EcoR限制酶和Sma限制酶的作用示意图。请据图回答：,(1)Ec
4、oR限制酶和Sma限制酶识别的碱基序列及切割的位点分别是什么？,提示,(2)以上实例说明限制酶具有。(3)要将图2中的末端再连接起来，需要连接酶。,专一性,T4DNA,命题点一限制性核酸内切酶、DNA连接酶等酶的作用1.如图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，下面选项中能依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用顺序的是,探究命题方向,A.B.C.D.,答案,解析,命题点一限制性核酸内切酶、DNA连接酶等酶的作用2.如图是表达新基因用的质粒的示意图，若要将目的基因插入到质粒上的A处，则切割基因时可用的是,A.HindB.EcoRC.EcoBD.Pst,答案,解析,与DNA相关
5、的五种酶的比较,命题点二载体的作用及特点分析3.下列关于载体的叙述中，错误的是A.载体与目的基因结合后，实质上就是一个重组DNA分子B.对某种限制酶而言，载体最好只有一个切点，但还要有其他多种酶的切点C.目前常用的载体有质粒、噬菌体的衍生物和动植物病毒D.载体具有某些标记基因，便于对其进行切割,答案,解析,命题点二载体的作用及特点分析4.下面为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，据图回答下列问题：,(1)a代表的物质和质粒的化学本质都是_，二者还具有其他共同点，如：_，_(写出两条即可)。,答案,解析,DNA,能够自我复制,具有遗传特性,(2)若质粒DNA分子的切割末端为则与之连接的目的基因切割末
6、端应为_；可使用_把质粒和目的基因连接在一起。,(3)氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA上称为_，其作用是_。,答案,解析,DNA连接酶,标记基因,供重组,DNA的鉴定和选择,答案,解析,(4)下列常在基因工程中用作载体的是A.苏云金芽孢杆菌抗虫基因B.土壤农杆菌环状RNA分子C.大肠杆菌的质粒D.动物细胞的染色体,答案,解析,考点二,基因工程的操作过程与应用,1.基因工程的操作过程(1)目的基因的获取从基因文库中获取基因文库包括：和(其中的cDNA文库是利用_法获取的)。利用PCR技术扩增a.变性()：双链DNA模板在热作用下，断裂，形成单链。b.复性()：与DNA模板结合，形成局部双链。c.延
7、伸()：在酶的作用下，合成与模板互补的子链。d.循环重复上述过程，n次循环后，目的基因的量将被扩增倍。,梳理知识要点,基因组文库,部分基因文库,反转录,9095,氢键,5560,7075,2n,引物,Taq,利用化学方法人工合成：基因比较小，_已知时，选择该方法。(2)基因表达载体的构建通常用酶切割目的基因和质粒，然后用酶将二者连接，改造后成为基因表达载体。组成：目的基因、基因、子、终止子和原点。,核苷酸序列,同一种限制,DNA连接,标记,启动,复制,知识拓展基因表达载体中启动子、终止子的来源如果目的基因是从自然界中已有的物种中分离出来的，目的基因中已含有启动子、终止子。在构建基因表达载体时，
8、不需要在质粒上接上特定的启动子、终止子，如果目的基因是通过人工方法合成的，或通过cDNA文库获得的，则目的基因是不含启动子和终止子的。因此，在构建基因表达载体时，需要在与质粒结合之前，在目的基因的前后端接上特定的启动子、终止子。,(3)将目的基因导入受体细胞,体细胞或受精卵,受精卵,原核细胞,(4)目的基因的检测与鉴定分子水平的检测a.利用技术检测目的基因的有无。b.利用技术检测目的基因的转录。c.利用技术检测目的基因的翻译。个体生物学水平的鉴定，如抗虫、抗病的接种实验等。,DNA分子杂交,分子杂交,抗原抗体杂交,2.基因工程的应用(1)动物基因工程：用于提高动物从而提高产品产量；用于改善畜产
9、品品质；用转基因动物生产；用转基因动物作器官移植的_等。(2)植物基因工程：培育抗虫转基因植物、抗病转基因植物和转基因植物；利用转基因改良植物的。,生长速度,药物,供体,抗逆,品质,(3)比较基因治疗与基因诊断,基因表达,正常基因,碱基互补配对,DNA探针,3.蛋白质工程(1)流程图,A.，B.，C.，D.，E.。(2)结果：改造了现有蛋白质或制造出。(3)应用：主要集中应用于对进行改造，改良生物性状。,转录,翻译,分子设计,多肽链,预期功能,新的蛋白质,现有蛋白质,1.判断常考语句，澄清易混易错(1)抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达()(2)将人的干扰素基因重组到质粒
10、后导入大肠杆菌，获得能产生人干扰素的菌株()(3)利用乳腺生物反应器能够获得一些重要的医药产品，如人的血清白蛋白，这是因为将人的血清白蛋白基因导入了动物的乳腺细胞中(),(4)应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达()(5)蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子的结构(),2.分析命题热图，明确答题要点如图为抗虫棉的培育过程，请据图回答下列问题：,(1)该基因工程中的目的基因和载体分别是什么？一般情况下，为什么要用同一种限制酶处理目的基因和载体？,提示,(2)该实例中，采用何种方法导入目的基因？为什么目的基因可以整合到染色体的DNA上
11、？,提示,(3)该实例中，检测目的基因是否成功表达的常见方法有哪两种？,提示,命题点一基因表达载体构建时限制酶的选择1.若要利用某目的基因(见图甲)和P1噬菌体载体(见图乙)构建重组DNA(见图丙)，限制性核酸内切酶的酶切位点分别是Bgl(AGATCT)、EcoR(GAATTC)和Sau3A(GATC)。下列分析合理的是,答案,解析,探究命题方向,A.用EcoR切割目的基因和P1噬菌体载体B.用Bgl和EcoR切割目的基因和P1噬菌体载体C.用Bgl和Sau3A切割目的基因和P1噬菌体载体D.用EcoR和Sau3A切割目的基因和P1噬菌体载体,解答本题的关键是要看清切割后目的基因插入的方向，只
12、有用EcoR和Sau3A切割目的基因和P1噬菌体载体，构建的重组DNA中RNA聚合酶在插入的目的基因上的移动方向才一定与图丙相同。,命题点一基因表达载体构建时限制酶的选择2.右图是利用基因工程技术生产可食用疫苗的部分过程，其中Pst、Sma、EcoR、Apa为四种限制性核酸内切酶。下列有关说法中正确的是,答案,解析,A.图示过程是基因工程的核心步骤，所需的限制性核酸内切酶均来自原核生物B.图示中构建基因表达载体时，需要用到一种限制性核酸内切酶C.一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的核糖核苷酸序列D.抗卡那霉素基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来,图示表示基因表达载体的构建过程，这是基
13、因工程的核心步骤，所需的限制性核酸内切酶一般来自原核生物，A错误；此表达载体构建时需要用到EcoR、Pst限制性核酸内切酶，B错误；限制酶具有特异性，即一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列并在特定的位点切割，C错误；抗卡那霉素基因作为标记基因，主要作用是筛选含有目的基因的受体细胞，D正确。,(1)根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类应选择切点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择Pst。不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择Sma。为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用Pst和EcoR两种限制酶(
14、但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。,选择限制酶的方法,(2)根据质粒的特点确定限制酶的种类所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致，以确保具有相同的黏性末端。质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中限制酶Sma会破坏标记基因；如果所选酶的切点不止一个，则切割重组后可能会丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则切割重组后的片段进入受体细胞后将不能自主复制。,命题点二基因工程和蛋白质工程的实例分析3.下面图1为某植物育种流程，图2表示利用农杆菌转化法获得某种转基因植物的部分操作步骤。下列相关叙述错误的是,A.图1子代与原种保持遗传稳定性，子代和子代选育原
15、理相同B.图1子代选育显性性状需自交多代，子代可能发生基因突变和染色体变异C.图2中过程的完成需要限制酶和DNA连接酶的参与D.图2中可与多个核糖体结合，并可以同时翻译出多种蛋白质,答案,解析,子代是体细胞培养产生的，利用的原理是植物细胞的全能性，属于无性繁殖，所以与原种保持着遗传稳定性；子代为基因工程育种产生的，子代为杂交育种产生的，选育的原理都为基因重组，A正确；子代的选育过程为杂交育种，如果需要显性纯合子，则一定要自交选育多代；子代的选育过程需要用物理因素、化学因素等来处理生物，所以可能发生基因突变和染色体变异，B正确；图2中过程是构建基因表达载体，其完成需要限制酶和DNA连接酶的参与，
16、C正确；图2中可与多个核糖体结合，并可以同时翻译出多个同种蛋白质分子，D错误。,命题点二基因工程和蛋白质工程的实例分析4.现代生物技术并不是各自独立的，而是相互联系、相互渗透的。如图表示利用乳腺生物反应器生产某种动物蛋白的流程示意图，请分析回答下列问题：,(1)该生产流程中应用到的现代生物技术有_(写出其中两种)。,蛋白质工程、基因工程、胚胎,移植技术(任写两种),答案,解析,(2)图中A、B分别表示_、_。,推测应有的氨基酸序列,基因表达载体,答案,解析,(3)为提高培育成功率，进行过程之前，对早期胚胎的处理是取其部分细胞用目的基因探针进行_检测，对受体动物的处理是用_进行同期发情处理。,D
17、NA(核酸)分子,杂交,促性腺激素,答案,解析,(4)蛋白质工程中，要对蛋白质结构进行设计改造，必须通过基因修饰或基因合成来完成，而不直接改造蛋白质，原因是_。,改造后的基因能够遗传(且改,造基因易于操作),答案,解析,蛋白质工程与基因工程的比较,(1)区别,(2)联系蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程。基因工程中所利用的某些酶需要通过蛋白质工程进行修饰、改造。,考点三,DNA的粗提取与鉴定,1.实验原理(1)DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,解读实验流程,溶解,析出,溶解,增大,(2)DNA不溶于，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，利用这一原理可将DN
18、A与蛋白质进一步分离。(3)DNA与二苯胺沸水浴加热，呈色。,酒精溶液,蓝,2.操作流程材料的选取：选用含量相对较高的生物组织破碎细胞(以鸡血为例)：鸡血细胞加用玻璃棒搅拌用纱布过滤收集滤液去除杂质：利用DNA在中溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质,DNA,蒸馏水,不同浓度的NaCl溶液,DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为95%的溶液DNA的鉴定：在溶有DNA的溶液中加入二苯胺试剂，混合均匀后将试管置于沸水中加热5min，溶液变成_,酒精,蓝色,1.判断常考语句，澄清易混易错(1)进行DNA粗提取和鉴定实验时，加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研
19、磨()(2)洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度()(3)将制备的含有DNA的滤液加入6075的恒温水浴箱中保温1015min，可以将DNA析出()(4)本实验可以用哺乳动物的成熟红细胞作为实验材料()(5)本实验中两次使用蒸馏水的目的不同(),2.分析命题热图，明确答题要点下图为“DNA粗提取和鉴定”实验的相关操作，请仔细观察并分析：,(1)操作和都是加入蒸馏水，其目的一样吗？,提示,(2)操作中加入酒精的目的是什么？此时搅拌要注意什么？,(3)操作中的粘稠物是如何获取的？加入2mol/LNaCl的目的是什么？,提示,提示,探究命题方向,命题点DNA的粗提取与鉴定过程分析1
20、.在DNA的粗提取实验过程中，对DNA提取量影响较小的是A.使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，释放出DNA等核物质B.搅拌时要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动C.在析出DNA黏稠物时，要缓缓加入蒸馏水，直至黏稠物不再增多D.要用冷酒精沉淀DNA，甚至可将混合液再放入冰箱中冷却,答案,解析,命题点DNA的粗提取与鉴定过程分析2.实验中对DNA进行鉴定时，做如右操作：,(1)根据上图，完成表格空白处的实验内容。,答案,解析,溶液不变蓝色,溶液逐渐变蓝色,DNA在沸水浴的情况下遇二苯胺会被染成蓝色,(2)对于B试管，完成1、2、3的操作后溶液颜色如何变化？,_。,(3)在沸水浴中加热的目的是_，同时说明DNA
21、对高温有较强的_。(4)A试管在实验中的作用是_。(5)B试管中溶液颜色的变化程度主要与_有关。,溶液颜色基本不变,加快颜色反应速度,耐受性,对照,加入试管中的DNA(丝状物)的多少,答案,DNA的粗提取与鉴定实验中的“2、4、4”,知识网络答题语句,构建知识网络,1.限制酶具有特异性，即一种限制酶只能识别特定的核苷酸序列，并在特定的位点上切割DNA分子。DNA连接酶的作用部位是磷酸二酯键。2.质粒是常用的载体，它是一种小型的双链环状DNA分子，具有一个至多个限制酶切割位点及标记基因。3.基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因。4.培育转基因动物时，受体细胞必须是受精卵，培育转基因
22、植物时的受体细胞可以是受精卵，也可以是体细胞。,必背答题语句,5.目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法；导入动物细胞常用显微注射技术，导入微生物细胞常用感受态细胞法。6.目的基因到了另一种生物体内能够成功表达的原理是所有生物共用一套遗传密码。,重温高考演练模拟,1.(2015重庆，6)下列有关人胰岛素基因表达载体的叙述，正确的是A.表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞mRNA反转录获得B.表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原(起)点C.借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来D.启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用,答案,解析,人肝细胞不能合成胰岛素，则人肝细胞
23、中不含有胰岛素的mRNA，不能通过反转录获得人胰岛素基因，A错误；表达载体的复制启动于复制起点，胰岛素基因的表达启动于启动子，B错误；抗生素抗性基因是标记基因，可用于筛选含胰岛素基因的受体细胞，C正确；启动子在转录过程中起作用，终止密码子在翻译过程中起作用，D错误。,1,2,3,4,2.图1、2分别为“DNA的粗提取与鉴定”实验中部分操作步骤示意图，下列叙述不正确的是,A.图1、2中加入蒸馏水稀释的目的相同B.图1中完成过滤之后保留滤液C.图2中完成过滤之后弃去滤液D.在图1鸡血细胞液中加入少许嫩肉粉有助于去除杂质,答案,解析,1,2,3,4,1,2,3,4,3.(2016全国乙，40)某一质
24、粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH酶切后，与用BamH酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：,(1)质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有_(答出两点即可)，而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。,答案,解析,能自我复制、具有标记基因
25、,1,2,3,4,1,2,3,4,(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是_；并且_和_的细胞也是不能区分的，其原因是_。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有_的固体培养基。,答案,解析,二者均不含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长,含有,质粒载体,含有插入了目的基因的重组质粒(或答含有重组质粒),二者均含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上,均能生长,四环素,1,2,3,4,1,2,3,4,(3)基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复
26、制所需的原料来自于_。,答案,解析,受体细胞,1,2,3,4,4.(2016天津，7)人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。下图是以基因工程技术获取重组HSA(rHSA)的两条途径。,(1)为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取_合成总cDNA，然后以cDNA为模板，采用PCR技术扩增HSA基因。下图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出另一条引物的位置及扩增方向。,答案,解析,总RNA(或mRNA),1,2,3,4,1,2,3,4,(2)启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是_(填写
27、字母，单选)。A.人血细胞启动子B.水稻胚乳细胞启动子C.大肠杆菌启动子D.农杆菌启动子,答案,解析,1,2,3,4,(3)利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是_。,吸引农杆菌移向水稻受体细胞，有利于目的基因成功转化,答案,解析,1,2,3,4,(4)人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性。与途径相比，选择途径获取rHSA的优势是_。,生物，具有膜系统，能对初始rHSA多肽进行高效加工,水稻是真核,答案,解析,1,2,3,4,(5)为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与_的生物学功能一致。,答案,解析,HSA,1,2,3,4,课时
28、作业,1.限制性核酸内切酶Mun和限制性核酸内切酶EcoR的识别序列及切割位点分别是CAATTG和GAATTC。如图表示四种质粒和目的基因，其中箭头所指部位为限制性核酸内切酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示目的基因载体的质粒是,答案,解析,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,2.(2015北京，5)在应用农杆菌侵染植物叶片获得转基因植株的常规实验步骤中，不需要的是A.用携带目的基因的农杆菌侵染植物细胞B.用选择培养基筛选导入目的基因的细胞C.用聚乙二醇诱导转基因细胞的原生质体融合D.用适当比例的生长素和细胞分裂素诱导愈伤组织生
29、芽,答案,解析,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,农杆菌侵染细菌是基因工程中常用到的，把目的基因导入植物细胞的方法，A正确；目的基因是否导入了细胞，需要在选择培养基上进行筛选，B正确；在植物细胞组织培养的过程中，需要调整培养基中生长素和细胞分裂素的比例，来达到对其脱分化和再分化的控制，D正确；在农杆菌侵染植物细胞的过程中，并没有涉及到原生质体的融合，所以C错误。,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,3.下面为利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述，正确的是,答案,解析,A.的构建需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶参与B.侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到的染色体上C.的染
30、色体上若含抗虫基因，则就表现出抗虫性状D.只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,4.抗菌肽对治疗癌症有一定的作用，下图表示抗菌肽合成过程。相关说法正确的是,答案,解析,A.用PCR克隆目的基因不需要DNA解旋酶B.基因表达载体包含起始密码和终止密码C.用显微注射法导入基因表达载体D.筛选菌种时用基因探针检测相关蛋白质,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,PCR技术中采用的是高温变性，因此用PCR克隆目的基因不需要DNA解旋酶，A正确；基因表达载体包含启动子和终止子，而起始密码和终止密码在mRNA上
31、，B错误；将基因表达载体导入酵母菌细胞时应用感受态细胞法，C错误；筛选菌种时用基因探针检测相关基因或mRNA，不能用基因探针检测蛋白质，D错误。,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,5.下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是A.酵母和菜花均可作为提取DNA的材料B.DNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸馏水C.向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可见玻棒上有白色絮状物D.DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变蓝,答案,解析,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,A项，原则上含DNA的生物材料都可作为提取DNA的材料，只是DNA含量高的材料成功的可能性更大。B项，DN
32、A在2mol/L的NaCl溶液和蒸馏水中溶解度都较大。C项，向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，鸡血细胞会吸水破裂，玻棒搅拌会加快血细胞的破裂，但在蒸馏水中不会析出DNA。D项，DNA溶液加入二苯胺试剂后需沸水浴加热，待冷却后变蓝色。,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,6.样品DNA在经PCR技术扩增后，可以获取大量DNA分子克隆。在试管中进行DNA的人工复制(如图)。在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活动的生物体。据图回答下列问题：,(1)PCR技术的原理是_，图中A过程表示_。,DNA分子的半保留复制,DNA解旋,答案,解析,1,2,3,4,
33、5,6,7,8,9,10,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,(2)某样品DNA中共含3000个碱基对，碱基数量满足：(AT)(GC)1/2，现欲得到100个与样品相同的DNA，至少需要向试管中加入_个腺嘌呤脱氧核苷酸。(3)A过程也称为DNA的变性，此过程在温度高达9095时才能完成，说明DNA分子具有_性。利用PCR技术获取目的基因的前提是_。(4)由图中信息分析可知，催化C过程的酶是_，它与正常细胞里的酶的区别是_。,99000,稳定,要有一段已知目的基因的核苷酸序列,DNA聚合酶,能耐高温,答案,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,7.(2016海南，31)基因工程又称为D
34、NA重组技术，回答相关问题：(1)在基因工程中，获取目的基因主要有两大途径，即_和从_中分离。,答案,解析,人工合成,生物材料,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,(2)利用某植物的成熟叶片为材料，同时构建cDNA文库和基因组文库，两个文库相比，cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的少，其原因是_。,cDNA文库中只含有叶细胞已转录(或已表达)的基因，而基因组文库中含有该植物的全部基因,答案,解析,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,(3)在基因表达载体中，启动子是_聚合酶识别并结合的部位。若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，最常用的原核生物是_。,RNA,大肠杆菌(或
35、细菌),答案,解析,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,(4)将目的基因通过基因枪法导入植物细胞时，常用的携带目的基因的金属颗粒有_和_颗粒。,答案,解析,金粉,钨粉,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,根据基因工程的有关知识，回答下列问题：(1)经BamH酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被_酶切后的产物连接，理由是_。,8.(2016全国丙，40)图(a)中的三个DNA片段上依次表示出了EcoR、BamH和Sau3A三种限制性核酸内切酶的识别序列与切割位点，图(b)为某种表达载体的示意图(载体上的EcoR、Sau3A的切点是唯一的)。,答案,解析,Sau3A,两种酶切割后产
36、生的片段具有相同的黏性末端,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,(2)若某人利用图(b)所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组DNA，如图(c)所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有_，不能表达的原因是_。,甲、丙,甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在终止子的下游，二者的目的基因均不能被转录,答案,解析,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,(3)DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有_和_，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是_。,Ec
37、oliDNA连接酶,T4DNA连接酶,T4DNA连接酶,答案,解析,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,9.将苏云金杆菌Bt蛋白的基因导入棉花细胞中，可获得抗棉铃虫的转基因棉，其过程如下图所示：,注：农杆菌中Ti质粒上只有T-DNA片段能转移到植物细胞中。(1)过程需用同种_酶对含Bt基因的DNA和Ti质粒进行酶切。为将过程获得的含重组质粒的农杆菌筛选出来，应使用_培养基。,答案,解析,限制性核酸内切(限制),选择,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,(2)过程中将棉花细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让_进入棉花细胞；除尽农杆菌后，还须转接
38、到含卡那霉素的培养基上继续培养，目的是_。,答案,解析,T-DNA,筛选出获得T-DNA片段的植物细胞,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,(3)若过程仅获得大量的根，则应在培养基中增加_以获得芽；部分接种在无激素培养基上的芽也能长根，原因是_。,细胞分裂素浓度,芽顶端合成的,生长素向基部运输，促进根的分化,答案,解析,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,(4)检验转基因棉的抗虫性状，常用的方法是_。种植转基因抗虫棉能减少_的使用，以减轻环境污染。,答案,解析,投放棉铃虫,农药,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,10.下图为“DNA的粗提取与鉴定”实验的相关操作。,(1)图
39、中实验材料A可以是_等，研磨前加入的B应该是_。,答案,解析,洋葱(菜花等),洗涤剂和食盐,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,(2)通过所示步骤得到滤液C后，再向滤液中加入2mol/L的NaCl溶液的目的是_，再过滤得到滤液D，向滤液D中加入蒸馏水的目的是_。,使DNA溶解,使DNA(溶解度下降而沉淀)析出,答案,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,(3)在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，将含有一定杂质的DNA丝状物分别放入体积为2mL的4种溶液中，经搅拌后过滤，获得下表所示的4种滤液，含DNA最少的是滤液_。,答案,(4)DNA鉴定的原理是_。,H,在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,