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1、第四节 Rh血型概念一、Rh血型抗原抗原性强弱次序为DECceRh阳性：含D抗原Rh阴性：不含D抗原亚型中，以Du最有临床意义，易被误定为Rh阴性。二、Rh血型抗体免疫性抗体：抗D抗体最强，其次是抗c和抗E。IgG、免疫产生、小、可通过胎盘，温性抗体、需要抗人球蛋白等介质才能与相应红细胞凝集三、Rh血型的遗传和命名四、Rh血型鉴定 是否含有D抗原 因Rh抗体多为不完全抗体，所以多采用酶介质、抗人球蛋白等试验方法。 （一）聚凝胺法 【原理】聚凝胺：产生很多阳离子低离子强度溶液：降低红细胞的Zate电位红细胞表面含D抗原，与抗D抗体凝集柠檬酸盐解聚液：消除聚凝胺的正电荷，使正常红细胞的非特异性凝集
2、解散，而抗原抗体引起的凝集仍然存在 聚凝胺聚凝胺低离子强度溶液低离子强度溶液 柠檬酸盐解聚液柠檬酸盐解聚液 （二）酶介质法【原理】酶（木瓜酶、菠萝酶等）可破坏红细胞表面带负电荷的唾液酸，降低红细胞表面负电荷，使红细胞之间排斥力减小，红细胞间距缩小，在不完全抗体的作用下发生凝集。（三）抗人球蛋白法【原理】：不完全IgG类抗D抗体,使红细胞致敏,加入经一定稀释的抗人球蛋白血清后,将致敏红细胞连接，发生肉眼可见的凝集。实践操作用PH6.8-7.2的生理盐水配制2-3%的红细胞悬液，洗涤1次加入抗D抗体与红细胞悬液各一滴于玻璃试管中混合并在室温下（1825）15分钟.离心15秒钟,观察结果.出现凝集为
3、阳性不出现凝集为阴性,对于阴性结果应再做的D和弱D型的测试注：该抗D抗体为 IgG/IgM单克隆鉴定抗体混合型，其中IgMAnti-D可直接凝结D阳性红细胞，除了D4型和弱D(亚D)的一部分。IgGAnti-D通过间接的抗蛋白测试方法凝结D4和低浓度的弱D(亚D).五、Rh血型的临床意义（一）Rh血型与输血（二）Rh血型与新生儿溶血病Rh阴性阴性Rh+抗抗D抗抗D第二次第二次复习思考题1、Rh血型中抗原性最强、临床意义又最大的抗原是：2、因为Rh抗体多为 抗体，所以常采用 、 、 等方法。3、Rh血型不合引起的新生儿溶血病的原因：Rh 的母亲孕育了Rh 胎儿后，胎儿红细胞可通过胎盘屏障进入母体
4、的血循环中，刺激母体产生 ，该抗体 进入胎儿体内而发生新生儿溶血病。由于第一胎产生的抗体效价较低，一般对胎儿无明显影响。但第二胎时抗体效价增高，易引起新生儿溶血病。复习思考题4、木瓜酶可破坏红细胞表面带负电荷的 ，降低红细胞表面负电荷，使红细胞之间排斥力减低，红细胞间距 ，在不完全抗体的作用下发生凝集。5、抗人球蛋白可与红细胞上结合的 结合，将致敏红细胞连接，发生 的凝集。三、ABO血型抗体（一）天然抗体（二）免疫抗体IgMIgG天然抗体与免疫抗体的鉴别特性 天然抗体（ ） 免疫抗体（ ）抗原刺激 分子量与红C反应最适温度 对血型物质的作用能否通过胎盘与红C反应的介质无察觉 有抗原刺激（妊娠、
5、输血） 大 小 4-25 37 易被血型物质中和 大多不能被血型物质中和 不能 能 盐水介质 酶、抗人球蛋白等 IgMIgG四、ABO血型的亚型亚型：属同一血型抗原，但抗原结构和性能或抗原位点数不尽相同的情况A型 ：A1 A1和A抗原，血清中含有抗B抗体A2 只有A抗原，血清中含抗B和抗A1抗体五、ABO血型的遗传A和B为显性基因，O为隐性基因举例： A B AO BOABAOBOOO任务一（第三节）ABO血型鉴定一、标本的采集柠檬酸钠抗凝剂二、红细胞悬液的配制1、洗涤：2、配制25的红细胞悬液5红细胞悬液比容红细胞1滴生理盐水1ml2红细胞悬液比容红细胞1滴生理盐水2ml三、标准血清要求 1
6、、特异性 2、效价 3、亲和力 4、不含冷凝集素 5、不含补体，无任何污染四、标准红细胞悬液的制备五、ABO血型鉴定方法正定型：正定型：反定型：反定型：（一）试管法：（一）试管法：（二）玻片法；（二）玻片法；用已知抗A、抗B和抗AB分型血清来测定红细胞上有无相应的A、B抗原 ：用已知A抗原和B抗原红细胞来测定血清中有无相应的抗A、抗B抗体。（三）注意事项1、严格查对2、操作方法应按规定先加血清，再加红细胞悬液，3、试验用器材应清洁干燥4、玻片法勿将干涸的红细胞聚集误认为凝集5、反定型一般不宜采用玻片法6、试管法离心后应先观察上清有无溶血对于工作人员1%的错误，病人就是100%的误诊！前身物质(
7、oh)经H基因作用H抗原抗原经A基因作用A抗原抗原经B基因作用B抗原抗原（一）试管法 1、正定型 取10mm60mm试管3支，分别标明抗A、抗B、抗AB，用滴管加入相应的抗A、抗B、抗AB标准血清各1滴，再加入被检者5红细胞盐水悬液1滴，轻轻混匀。 2、反定型 取同样试管3支，分别标明A、B、O红细胞，用滴管各加入被检者血清1滴，再分别加入A、B、O型5标准红细胞悬液1滴，轻轻混匀。 3、立即以RCF177g（1000r/min）离心1分钟。 4、取出试管，先观察有无溶血，再轻弹试管，观察有无红细胞凝集，如肉眼不见凝集，应将反应物倾倒于玻片上，在显微镜下用低倍镜观察。结果判断可见表75。实验操
8、作 ABO血型鉴定正定型 试管法： AB标记号1滴抗B1滴RBC悬液标记号1滴抗A1滴RBC悬液1000转/min离心1分钟，观察凝集结果 ABO血型正反定型结果判定标准血清 被检者血型 标准红细胞 被检者红细胞 被检者血清抗A 抗B 抗AB A细胞 B细胞 O细胞 A型 B型 O型 AB型 （二）玻片法 1、正定型 取清洁玻片或白瓷板，用蜡笔画出方格或圆圈，依次标明抗A、抗B、 抗AB，按标记用滴管加入相应的标准血清各1滴，再加入被检者5红细胞悬液1滴，转动玻片混匀。 2、反定型 另取清洁玻片或白瓷板，用蜡笔画出方格或圆圈，依次标明A细胞、B细胞、O细胞，用滴管加入被检者血清各1滴，再按标记
9、加入5标准A、B、O红细胞悬液1滴。转动玻片混匀。 3、不断转动玻片或白瓷板，使血清与细胞充分混合，室温下（2024）1015分钟，观察有无凝集和溶血。如用玻片试验，必要时可用显微镜在低倍镜下观察。红细胞凝集判断标准图72。实验操作 ABO血型鉴定正定型 玻片法：AB 各加一滴红细胞抗B抗A转动玻片，15分钟后观察结果实验十六 ABO血型鉴定RH血型鉴定实验目的1、熟练掌握ABO血型鉴定方法。2、熟悉RH血型鉴定的方法及结果判定。实验器材、试剂器材器材毛细血管采血用具、离心机、试管、玻片试剂试剂1、生理盐水2、标准血清3、抗D抗体实验安排 两人一组互取标本，配制5%红细胞悬液1、单号：ABO血
10、型鉴定正定型：玻片法2、双号：ABO血型鉴定正定型：试管法3、每人进行Rh血型鉴定提问玻片法血型测定的方法及结果判读实验操作 两人一组毛细血管采血 1、配制5%红细胞悬液： 末梢采血1滴+10滴生理盐水 2、ABO血型鉴定正定型 玻片法：AB 各加一滴红细胞抗B抗A转动玻片，15分钟后观察结果实验操作 ABO血型鉴定正定型 玻片法：AB 各加一滴红细胞抗B抗A转动玻片，15分钟后观察结果实验操作 3、ABO血型鉴定正定型 试管法： AB标记号1滴抗B1滴RBC悬液标记号1滴抗A1滴RBC悬液1000转/min离心1分钟，观察凝集结果实验操作4、Rh血型鉴定: -1滴红细胞悬液1滴抗D-37水浴30分钟Rh阳性Rh阴性结果报告ABO血型的报告方式： ABO血型 型Rh血型的报告方式： Rh血型：阴性 Rh血型：阳性注意事项要有及高的责任心，避免发生血型鉴定错误对于工作人员1%的错误，病人就是100%的误诊！作业完成实验报告P248 实验准备与安排 一：1、2、3P252 实验准备与安排 一：1、2、3报告今日血型测定结果 格式如下 ： 姓名： ABO血型： Rh血型： 检验者签字： 日期：预习交叉配血的操作方法同型配血的结果判断异型配血的结果判断结束结束