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1、发光烟草发光烟草我国自主知识产我国自主知识产权权抗虫棉花抗虫棉花重组重组DNA导入导入形成形成分子手术刀分子手术刀限制性内切酶限制性内切酶1.来源来源：猜一猜：限制酶存在于原核生物中的作猜一猜：限制酶存在于原核生物中的作用是什么呢？用是什么呢？将外来的将外来的DNA切断，即能够限制异源切断，即能够限制异源DNA的入侵并使之失去活动，但对自己的的入侵并使之失去活动，但对自己的DNA却无损害作用，保护细胞原有的遗传信息。却无损害作用，保护细胞原有的遗传信息。主要从原核生物中分离出来主要从原核生物中分离出来2.作用特点作用特点：具有特异性：具有特异性Sma1限制酶限制酶能识别能识别CCCGGG序列，
2、序列，能够识别双链能够识别双链DNA分子中的分子中的某种特定核某种特定核苷酸序列苷酸序列，并在，并在特定部位特定部位将其切断将其切断限制酶切割的是限制酶切割的是每一条链中特定部每一条链中特定部位的两个核苷酸之位的两个核苷酸之间的间的磷酸二酯键磷酸二酯键3.切点切点：磷酸二酯键：磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键学生活动：学生活动：用用“剪刀剪刀”代表限制酶，纸条代表限制酶，纸条上的碱基序列代表限制酶识别上的碱基序列代表限制酶识别的序列，请剪下碱基序列被限的序列，请剪下碱基序列被限制酶切割后，所形成的结果制酶切割后，所形成的结果Sma1限制酶识别的限制酶识别的CCCGGG序列，序列，小结：限制酶小结
3、：限制酶1.来源来源：主要从原核生物中分离出来。主要从原核生物中分离出来。2.作用特点作用特点：具有特异性，识别特定核苷：具有特异性，识别特定核苷酸序列，在特定部位切割酸序列，在特定部位切割3.切点切点：磷酸二酯键：磷酸二酯键4.切割结果切割结果：黏性末端、平末端：黏性末端、平末端1.分类分类E.coliDNA连接酶连接酶T4DNA连接酶连接酶作用：将切下来的作用：将切下来的DNA片段拼接成片段拼接成 新的新的DNA分子分子AATTGCCTTAAG2.缝合的位置：磷酸二酯键缝合的位置：磷酸二酯键 E.coliDNAE.coliDNA连接酶连接酶，只能将双链，只能将双链DNADNA片段片段互补的
4、黏性末端之间连接。互补的黏性末端之间连接。 T T4 4DNADNA连接酶连接酶，既可以，既可以“缝合缝合”双链双链DNADNA片段互补的黏性末端，又可以片段互补的黏性末端，又可以“缝合缝合”双链双链DNADNA片段的平末端，但连接平末端之片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。间的效率比较低。DNA连接酶连接酶DNA聚合酶聚合酶连接连接DNA链链双链双链单链单链连接部位连接部位在两在两DNA片段之间片段之间形成形成磷酸二酯键磷酸二酯键将单个核苷酸加将单个核苷酸加到已存在的核酸到已存在的核酸片段的片段的3末端的末端的羟基上，形成羟基上，形成磷磷酸二酯键酸二酯键想一想：想一想：DNA连接酶和
5、连接酶和DNA聚合酶有什聚合酶有什么区别呢？么区别呢？巩固练习巩固练习限制酶在限制酶在DNADNA的任何部位都能将的任何部位都能将DNADNA切开吗？以下切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的是四种不同限制酶切割形成的DNADNA片段：片段：(1) CTGCA (2) AC (3) GC(1) CTGCA (2) AC (3) GC G TG CG G TG CG（4 4） G (5) G (6) GCG (5) G (6) GC CTTAA ACGTC CG CTTAA ACGTC CG(7) GT (8)AATTC(7) GT (8)AATTC CA G CA G你是否能用你是否能用DNA
6、DNA连接酶将它们连接起来？连接酶将它们连接起来？_和和_能连接形成能连接形成_和和_能连接形成能连接形成_和和_能连接形成能连接形成_和和_能连接形成能连接形成_（1）（5）（2）（7）（3）（6）（4）（8）CTGCAGGACGTCACGTTGCAGCGCCGCGGAATTCCTTAAG一、基因工程的概念一、基因工程的概念二、基因工程基本工具二、基因工程基本工具（一）本节小结本节小结课后思考：作为分子运输车课后思考：作为分子运输车载体载体需要什么条件呢？需要什么条件呢？4.如果载体对受体细胞有害怎样？不如果载体对受体细胞有害怎样？不能分离怎样？能分离怎样？2.假如目的基因导入受体细胞后不能
7、假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？复制将怎样？1.作为载体没有切割位点将怎样？作为载体没有切割位点将怎样？3.假如目的基因导入受体细胞，你如假如目的基因导入受体细胞，你如何去察觉？何去察觉？作用：将外源基因送入受体细胞。作用：将外源基因送入受体细胞。 常用的运载体：常用的运载体：质粒质粒噬菌体的衍生物噬菌体的衍生物动、植物病毒等动、植物病毒等质粒：质粒：来源：原核生物来源：原核生物结构：环状双链的结构：环状双链的DNA分子分子想一想：为什么质粒可以作为载体想一想：为什么质粒可以作为载体4.如果载体对受体细胞有害怎如果载体对受体细胞有害怎样？不能分离怎样？样？不能分离怎样？2.假如目的基
8、因导入受体假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？细胞后不能复制将怎样？1.作为载体没有切割位点作为载体没有切割位点将怎样？将怎样？3.假如目的基因导入受体细假如目的基因导入受体细胞，你如何去察觉？胞，你如何去察觉？能复制并带着插能复制并带着插入的目的基因一入的目的基因一起复制起复制有切割位点有切割位点有标记基因的存有标记基因的存在，将来可用含在，将来可用含青霉素的培养基青霉素的培养基鉴别。鉴别。课后作业：模拟制作课后作业：模拟制作重组重组DNA分子的模拟操作分子的模拟操作一、基因工程的概念一、基因工程的概念二、基因工程基本工具二、基因工程基本工具（一）记住了记住了记住了记住了3 3、下列不
9、适合用于基因工程的运载体、下列不适合用于基因工程的运载体是（是（ ） A A、质粒、质粒 B B、噬菌体、噬菌体 C C、细菌、细菌 D D、病毒、病毒选选我我C4、下列说法正确的是、下列说法正确的是：（：（ ） A、限制酶的切口一定是、限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列碱基序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、重组技术所用的工具酶是限制酶、重组技术所用的工具酶是限制酶、 连接酶、运载体连接酶、运载体 D、利用运载体在宿主细胞内对目的基因、利用运载体在宿主细胞内对目的基因 进行大量复制的过程可称为进行大量复制的过程可称为“克隆克隆”选选我我D5、下列黏性末端属于同种内切酶切割而成的、下列黏性末端属于同种内切酶切割而成的 是（是（ ） A、 B、 C、 D、选选我我AT C GA G C T T A AA GG T T C C AA G C T T C A G A A T T C GAATTGCCTTAAG