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1、实验六白喉杆菌、厌氧菌、分枝杆菌病毒及其它微生物,实验内容,操作白喉棒状杆菌（吕氏血清斜面）：Albert染色法病毒血凝试验示教破伤风梭菌及产气荚膜梭菌的培养特性结核分枝杆菌的培养特性病原性真菌形态、培养特性血凝抑制试验示教片：观察结核分枝杆菌、钩端螺旋体、新型隐球菌和病毒包涵体的形态,目的要求,熟悉白喉棒状杆菌的形态熟悉结核分枝杆菌的形态和培养特性熟悉破伤风梭菌及产气荚膜梭菌的培养特性了解病原性真菌形态和培养特性掌握钩端螺旋体、病毒包涵体的基本形态了解恙虫病立克次体的基本形态了解病毒血凝试验、血凝抑制试验的方法，掌握基本原理,Albert染色法制片同革兰染色，甲液染5分钟水洗再以乙液（碘液）
2、染1分钟水洗印干油镜检,白喉棒状杆菌(C.diphtheriae)Albert染色：见异染颗粒，菌体蓝绿色，异染颗粒蓝黑色（用于鉴定）,病毒的血凝试验,血凝素（hemagglutininHA）：由病毒基因编码的糖蛋白刺突。与病毒吸附和传入宿主细胞有关。HA能与人或其它动物多种红细胞表面N乙酰神经氨酸酶受体结合引起红细胞凝集。滴定病毒的血凝效价，采用一定的病毒量，通常采用4个血凝单位。,血凝试验（血凝效价的滴定),将有机玻璃板孔从19进行编号，从第1孔起至第9孔，按下表加。将病毒液按下表进行稀释。自第9孔开始反方向向前每孔加入0.5%鸡红血球0.5ml，摇匀后放置室温45分钟,血凝试验结果判定,
3、结果判定：薄层（凝集）圆点（不凝集）凝集特别显著：“”凝集现象次之：“”凝集清楚可见：“”稍显凝集者：“”血凝单位：呈“”凝集时的最高稀释度。此时的稀释度即为1个血凝单位。,示教：破伤风梭菌及产气荚膜梭菌的培养特性的培养特性,示教：结核分枝杆菌的培养特性,专性需氧，最适37，营养要求高，生长缓慢，18h分裂一代。罗氏(Lowenstein-Jensen)培养基含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐、孔雀绿，26周可见菌落生长菌落特点：菜花、颗粒或结节状菌落，乳白色或黄色，不透明。,黄曲霉,示教：真菌的培养特性,多细胞真菌：观察气生菌丝，营养菌丝，表面隆起，浅沟及菌落基底颜色。,单细胞真菌：酵母型菌落新型
4、隐球菌：菌落圆形，较大，湿润呈蜡状，乳白色类酵母型菌落白假丝酵母菌：菌落圆形，较大，白色菌落底层有假菌丝,原理病毒引起的血凝现象能被相应的抗血凝素抗体所抑制，称血凝抑制。利用血凝素特异性抗体与病毒表面相应的HA相互作用，使病毒血凝现象抑制的试验称血凝抑制试验。4个血凝单位的病毒液,血凝抑制试验,血凝抑制试验结果判定,测定孔：圆点（不凝集）薄层（凝集）血清对照孔：圆点（不凝集）病毒对照孔：薄层（凝集）RBC对照孔：圆点（不凝集）血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制的最高血清稀释度。,抗酸染色法(acid-faststain)：以5石炭酸复红染色，再用3盐酸酒精脱色，然后用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色(+)，其他细菌和背景物质为蓝色(-)。实验过程：取痰液涂片（略厚）干燥固定石炭酸复红染色810分钟后用3%的盐酸酒精脱色约12分钟，脱色时轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止水洗后，用碱性美蓝复染1分钟水洗，印干镜检,结核分枝杆菌抗酸染色法示教片,Fontana镀银染色：镜下可见棕褐色两端有钩的螺旋体，菌体整齐，粗细均匀，呈“C”或“S”型，螺旋不明显。,钩端螺旋体Fontana镀银染色法示教片,内基小体示教片,新型隐球菌示教片,