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1、血红蛋白是由4条多肽链(2对)和4个可以结合铁和氧气的血红素组成一、原理:Hb中的珠蛋白和其他蛋白质一样为两性电解质,在不同的缓冲液中可带正或负电荷,在电场中向阴极或阳极移动,由于不同的蛋白质之间其等电点、分子大小、形态及所带电荷不同,其移动速率不同(电泳迁移率不同),在一定的支持介质中可借以分离。二、仪器:Helena BioSciences SAS-3样本分析系统(英国海伦娜生物科学)三、操作:(一)血红蛋白液的制取1、取一份红细胞(或全血)加十份生理盐水洗涤,3000转/分钟离心5分钟,弃盐水 2、洗涤三次后,弃盐水3、按压积红细胞体积加等体积蒸馏水,摇匀,再加1/2体积的四氯化碳震荡1
2、-3分钟,3000转/分钟离心5分钟,吸取上层血红蛋白溶液(此浓度约为10%)待用(二)仪器操作1、开机2、吸取30ul血红蛋白溶液加入样本盘3、取两片点样刀锋放在自动加样器2,14号位,点样的时候把梳子从14号的位置跳至12号位置4、电泳槽内加界面液(3100)5、揭掉电泳片表面的保护膜,放入电泳片,避免气泡,擦掉四周多余液6、用BLOTC吸去电泳片上多作的缓冲液7、放好碳棒,盖好盖子,按下箭头选择“”为测试项目再按“START”进入程序再按“Enter”开始电泳,约18分钟,仪器示警,按“STOP”结束操作,打开盖子,铲掉盐桥8、将电泳片放在染色架上,放入染色槽中,按下箭头选择“START”为测试项目约15分钟,仪器示警,表示已完成操作,按下“STOP”结束操作9、拿出电泳片即可扫描正常成人:HbA(2 22 2): 94.5%-98.5% HbF(2 22 2): 1% HbA2(2 22 2): 2.5%-3.5% Hb A: a2b2Hb F: a2g2Hb A2:a2d2 正常新生儿:HbA(2 22 2): 12%-40% HbF(2 22 2): 6%-93% HbA2(2 22 2):0.1%-1.0%Hb A: a2b2Hb F: a2g2Hb A2:a2d2 常见有HbJ,HbD