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1、+ICS 65.020.01B 05DB37山东省 地方标准DB 37/ XXXXXXXXX银杏培育指南 组培育苗Guidebook for Ginkgo biloba cultivation Tissue culture for seedlings点击此处添加与国际标准一致性程度的标识报批稿报批稿XXXX - XX - XX 发布XXXX - XX - XX 实施山东省市场监督管理局 发 布DB37/T *前前 言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省自然资源厅提出。本标准由山东省林业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东农业大学、山东省林木种质资源中心本标准
2、主要起草人：孙霞、邢世岩、单超、鲁仪增、孙立民、门晓妍、张谦、曹钟允、许楠、李影、董遥、倪召欣DB37/T *银杏培育指南银杏培育指南 组培育苗组培育苗1 范围范围本标准规定了银杏组培育苗的外植体采集和消毒、培养基配制与保存、接种、瓶苗培 养、炼苗与移栽、质量标准、商品苗包装、运输和档案管理等技术要求。本标准适用于银杏的组培育苗。2 规范性引用文件规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版 本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。GB/T 6001 育苗技术规程LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规
3、程3 外植体采集和消毒外植体采集和消毒3.1 外植体采集外植体主要包括茎尖、茎段和胚。选取 12 年生生长健壮、具有品种典型性状的优良 单株，取幼苗外围当年生幼嫩枝条，采集时间在 34 月；胚取当年种仁，种子采集时间为 10 月上中旬，沙藏贮存 7090d。种核除去外种皮、中种皮和内种皮，分离出种胚。3.2 外植体消毒3.2.1 茎尖和茎段茎尖和茎段剪去叶片，用肥皂水擦洗，然后用自来水冲洗干净，无菌操作台下依次用 70%酒精消毒 30s，含有吐温 20 的 0.1%氯化汞消毒 810min，无菌水冲洗 35 次，然后用 无菌的滤纸吸去茎尖和茎段表面的水分。3.2.2 种胚种胚先用肥皂水擦洗，然
4、后用自来水冲洗干净，无菌操作台下依次用 70%酒精消毒 30s，含有吐温 20 的 0.1%氯化汞消毒 68min，无菌水冲洗 35 次，然后用无菌滤纸吸去 种胚表面的水分。3.3 外植体制备3.3.1 茎尖和茎段在无菌环境下，剪取 0.51.0cm 长的茎尖或 12cm 长的茎段，每段留 12 个腋芽或顶 芽，转入已消毒的培养皿中备用。3.3.2 胚DB37/T *将已消毒的种胚，转入培养皿中备用。4 培养基配制与保存培养基配制与保存培养基的配制与保存执行 LY/T 1882 标准。5 接种接种在无菌状态下，将培养皿中的外植体用镊子直插式接种于培养瓶中，每瓶接种 23 个。 封口膜要及时捆绑
5、。并将品种代号、培养基类型、个人编号以及接种日期标示在瓶上。6 瓶苗培养瓶苗培养6.1.初代培养茎段外植体的初代培养使用芽诱导培养基，配方为 MS+NAA 0.2mg/L+6-BA 1.5mg/L+0.20% AC；胚外植体的初代培养使用 MS 培养基，pH 5.86.0，培养温度为 25 2，置于 1500 lx2000 lx 的光照条件下培养 1015d，光照 812h/d。6.2 增殖培养外植体增殖 35 倍后，剪成 1.02.0cm 带芽小段，转入新的增殖培养基中，培养基配 方为 MS+NAA 0.10.5mg/L+6-BA 0.12.0mg/L+0.25% AC；培养条件同初代培养。
6、增殖周 期为 3045d。6.3 复壮 继代培养 810 代后进行复壮。6.4 生根培养选择生长健壮、叶色正常，高 35cm 的嫩茎接种于生根培养基中，培养基配方为 1/2MS+IBA 0.5mg/L。培养条件同初代培养。7 炼苗与移栽炼苗与移栽7.1 瓶苗炼苗选取有活力，生长健壮，叶色正常，根数5 条，根长0.8cm 的组培苗，温室自然光 闭口炼苗 23 周，开口炼苗 59d，温度保持 253。7.2 出瓶驯化洗净组培苗残留的培养基，移栽到无纺布容器中驯化。栽培基质采用细河沙+珍珠岩+ 草炭土，其体积比为 1:1:2，使用前 1224h 用 0.5%0.7%的高锰酸钾消毒。驯化期间保持 温度
7、 2030，空气湿度 70%80%，光照强烈时可使用遮光度 60%70%的遮阳网遮阳。 小苗长出新叶后，每 710d 喷施叶面肥一次。7.3 移栽经过 2530d 驯化即可移栽至大田。DB37/T *7.4 苗期管理执行 GB/T 6001 标准。8 质量标准质量标准8.1 组培苗质量标准苗木粗壮、挺直、有活力，具原品种特性。苗高 35cm，叶片3 片，大小协调、有 层次感、色泽正常。根 35 条，根长适中，长势好。同一批次达标的组培苗在 90%以上， 且培养基无污染。8.2 移栽苗的质量标准苗木健壮、挺拔，形态完整，具原品种特性。苗高 510cm，地径0.2cm。叶片6 片，大小协调，色泽正常。根系完整、发达。同一批次达标的组培苗在 90%以上，无检疫 性病虫害。9 包装、运输包装、运输9.1 包装瓶苗保留在培养瓶中，出瓶苗洗去琼脂后装入塑料小盒，移栽苗统一泡沫箱包装。可 再加外包装。9.2 运输琼脂苗应使用纸托盘运输。装车时切勿倒置。用有蓬车辆运输，高温和严寒季节选用 冷藏车。运输途中温度保持 815，72h 内到达目的地。移栽苗路途时间不能超过 48h。10 档案管理档案管理参照 GB/T6001 执行。