结肠癌细胞株.pdf

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1、TCHu101-TCHu101-人结肠癌细胞人结肠癌细胞SW620 人结肠癌细胞SW620 是从一个 51 岁男性白人组织中分离得到。 由 A.Leibovitz 等从一个淋巴结建株。 细胞系主要由无绒毛的小园球细胞和双极细胞组成。 它仅合成少量癌胚抗原 （CEA） 且在裸鼠中有高度的致瘤性.HCT 116 人结肠癌细胞HCT116 是 1979 年 M.Brattain 等从患结肠癌的男性病人中分离的三株恶性细胞之一。 在半固体琼脂糖培养基中形成克隆。 HCT116 在无胸腺的裸鼠有致瘤性，形成上皮样的肿瘤。LoVo 人结肠癌细胞LoVo 建自 1971 年， 从诊断为结肠腺癌的 56 岁男

2、性白人的一个转移到左锁骨上区的肿瘤结节建系。癌基因-myc, K-ras, H-ras, N-ras, Myb, sis 和 fos 的表达呈阳性。 癌基因 N-myc 的表达未做检测。 它在裸鼠中能成瘤。 与 107 细胞联合皮下接种只裸鼠 21 天后全部成瘤。 表达肿瘤特异的核基质蛋白蛋白 CC-3 和 CC-4。COLO 205 人结肠癌细胞该细胞系 1957 年由 T.U.Sample等从患有结肠癌的 70 岁男性白人的腹水分离。 该病人在取腹水样品前已用 5-氟尿嘧啶治疗 4-6 周。 角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。KCB200848YJ人结肠癌细胞SW480COLO 394 COL

3、O394人结肠癌细胞CW-2 CW2人结肠癌细胞上皮样贴壁生长该细胞来源于结肠癌，CEA 阳性，移植于裸鼠可成瘤。KCB200718YJ人结肠癌细胞LoVoKCB200508YJHT-29人结肠癌细胞KCB200706YJ人结肠癌细胞HCT 116KCB200719YJ人结肠癌细胞COLO 205KCB200848YJ人结肠癌细胞SW4803131C0001000700116-3131C0001000700116-人结肠癌细胞人结肠癌细胞资源编号英文名称中文名形态特性生长特性3131C0001000700116RKO人结肠癌细胞上皮样贴壁生长RKO 是一个低分化的结肠癌细胞系。 RKO 细胞含

4、有野生型P53，但缺乏人甲状腺受体核受体(h-TR beta 1)。 RKO 细胞特征特性的 P53 蛋白的水平高于 RKO-E6 细胞。 RKO 细胞系是 RKO-E6和 RKO-AS45-1 的亲本细胞系。 该细胞系在裸鼠中成瘤，且在软琼脂中形成集落。细胞名称：描述：COLO 205 人结肠癌细胞该细胞系 1957 年由 T.U.Sample 等从患有结肠癌的 70 岁男性白人的腹水分离。该病人在取腹水样品前已用 5-氟尿嘧啶治疗 4-6 周。 角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。动物种别：性别：组织来源：形态：人男结直肠腺癌，腹水转移。上皮样含有 2mM L-谷氨酰胺的 RPMI 1640，加

5、 10mM HEPES,1mM 丙酮培养基和添加剂：酸钠，4.5 克/升葡萄糖和 1.5 克/升碳酸氢钠，再添加10%胎牛血清。Caco-2 细胞模型是一种人克隆结肠腺癌细胞，结构和功能类似于分化的小肠上皮细胞，具有微绒毛等结构，并含有与小肠刷状缘上皮相关的酶系。可以用来进行模拟体内肠转运的实验。在细胞培养条件下，生长在多孔的可渗透聚碳酸酯膜上的细胞可融合并分化为肠上皮细胞，形成连续的单层，这与正常的成熟小肠上皮细胞在体外培育过程中出现反分化的情况不同。细胞亚显微结构研究表明，Caco-2 细胞与人小肠上皮细胞在形态学上相似，具有相同的细胞极性和紧密连接。胞饮功能的检测也表明，Caco-2细胞

6、与人小肠上皮细胞类似。Caco-2 细胞模型是一种人克隆结肠腺癌细胞，结构和功能类似于分化的小肠上皮细胞，具有微绒毛等结构，并含有与小肠刷状缘上皮相关的酶系。可以用来进行模拟体内肠转运的实验。在细胞培养条件下，生长在多孔的可渗透聚碳酸酯膜上的细胞可融合并分化为肠上皮细胞，形成连续的单层，这与正常的成熟小肠上皮细胞在体外培育过程中出现反分化的情况不同。细胞亚显微结构研究表明，Caco-2 细胞与人小肠上皮细胞在形态学上相似，具有相同的细胞极性和紧密连接。胞饮功能的检测也表明，Caco-2细胞与人小肠上皮细胞类似。作用：1. 研究药物吸收的潜力 2. 研究药物转运的机制，包括吸收机制和排除机制 3

7、. 研究药物、营养物质、植物性成分的肠道代谢判断药物吸收能力的方法：Papp（表观渗透系数）Papp2*10-6属于吸收好的药物如 Testosterone(睾酮):1.0*10-5cm/s Propranolol（普奈洛尔）:2.86*10-5cm/sPapp10-6cm/s 属于吸收差的药物如 Mannitol(甘露醇):1.0*10-7 cm/s Atenolol（阿替洛尔）:4.55*10-7 cm/s现代药物研发成功与否， 与药物的代谢特性密切相关。 人工合成和筛选有限数量的化合物已被大规模的化合物合成和高通量筛选所取代。 无论是开发新药还是开发新的给药途径，化合物在体内的吸收特性都

8、非常重要。以往传统的体内药代吸收筛选模型，由于所需药物量大、难以批量化、耗时长以及费用高等弊端，已经无法满足现代新药的研发要求，因而开发新的快速、准确以及需药量少的药物吸收筛选模型已成为新药研发的必然趋势。被广泛采用的三种筛选方法是：大鼠原位单次灌注法、大鼠外翻肠囊法以及体外人结肠腺癌（Caco-2）细胞系法。其中，Caco-2 细胞模型已经成为一种预测药物人体小肠吸收以及研究药物转运机制的标准体外筛选工具。结构与功能决定其应用价值Caco-2 细胞模型是十几年来国外广泛采用的一种研究药物小肠吸收的体外模型，具有相对简单、重复性较好、应用范围较广的特点。其来源于人的直肠癌，结构和功能类似于人小

9、肠上皮细胞，并含有与小肠刷状缘上皮相关的酶系。这些性质可以恒定维持约 20 天。由于 Caco-2 细胞性质类似小肠上皮细胞，因此可以在这段时间进行药物的跨膜转运实验。另外，存在于正常小肠上皮中的各种转运系统、代谢酶等在Caco-2 细胞中大都也有相同的表达，如细胞色素P450 同工酶、谷氨酰胺转肽酶、碱性磷酸酶、蔗糖酶、葡萄糖醛酸酶及糖、氨基酸、二肽、维生素B12 等多种主动转运系统在 Caco-2 细胞中都有与小肠上皮细胞类似的表达。由于其含有各种胃肠道代谢酶，因此更接近药物在人体内吸收的实际环境。研究药物小肠吸收的标准工具利用人小肠上皮 Caco-2 细胞单层来进行药物小肠吸收的细胞水平

10、实验， 已经成为一种预测药物在人体小肠吸收以及研究药物转运机制的标准筛选工具。评价新药的吸收在研究新的抗生素药物时， 如新药为水溶性很差的化合物， 则药物性质决定其不能制作成注射剂。为了改善其口服吸收生物利用度，国外研究人员使用了一些吸收增强剂，用 Caco-2 细胞来评价其吸收程度取得较好的结果。还有研究者使用Caco-2细胞模型评价了系列难溶性药物磷酸酯前药与其母药的吸收度，这些药物包括可的松、苯妥英等。结果发现，苯妥英等药物磷酯化后吸收大为增加，而可的松磷酯化后吸收程度有显著改变，这些结果在其他模型上也类似。在研究药物赋形剂对药物吸收的影响时， 同时使用了 Caco-2 细胞模型和大鼠离

11、体肠道进行评价，两模型的结果一致。这些都表明 Caco-2 细胞模型在新药吸收评价方面的重要价值。预测吸收过程中的药物相互作用Caco-2细胞中存在有与小肠上皮相同的各种转运系统、代谢酶，因此可以用来作为研究与吸收相关的药物相互作用的体外模型。小肠上皮的代谢、受体介导的转运、p-gP 对药物分子的泵出，是一个饱和过程。联合用药时，因为有可能存在药物竞争酶、载体或 p-gP 泵的作用，所以会与单独给药时的生物利用度存在差异。这种药物吸收过程中存在的相互作用可以应用Caco-2 细胞模型进行研究。此外，与药物吸收有关的相互作用还可来源于代谢酶、载体、p-gP 泵被特定药物重复给药引起的诱导。当药物

12、经细胞转运途径被吸收时，p-gP 泵成为药物吸收的一个重要生化屏障，它把进入细胞内的药物泵出，从而减少了药物的吸收，因此成为口服药物生物利用度低、波动大的一个重要影响因素。具有这种p-gP 泵出性质的药物分子在与 p-gP 泵抑制剂共同口服给药时，其透过细胞膜吸收的程度增强。研究吸收机制 Caco-2 细胞除了在吸收评价方面的大量应用外， 也比较适合用于吸收机制的研究。有研究人员分别利用Caco-2 细胞作为钠和铁吸收的模型细胞，结果发现，LRlipidraft在决定 PI3K/AKT2 信号转导过程中起到重要作用，包括增加了肠道的Na 吸收。拓展药物小肠代谢研究人体小肠中存在着丰富的细胞色素

13、 P450 同工酶，其中 P4503A4 占到该组织中所有细胞色素 P450 同工酶的约 50%，而其在 Caco-2 细胞单层中的表达已见报道。与人体小肠甚至空肠微粒体相比，Caco-2 细胞中的细胞色素 P450 同工酶为低水平表达，这是限制其作为口服给药化合物的小肠一相代谢研究模型的一个因素。为了克服这一局限，国外研究人员等利用 1 ，25-二羟基维生素 D3 处理过的 Caco-2 细胞单层作为研究小肠代谢动力学首过作用的体外模型。当将该系统应用于研究细胞色素P4503A4 底物咪唑安定的代谢动力学时，显示出与体内研究相似的结果。尽管细胞色素 P450 同工酶在 Caco-2 细胞中的

14、表达水平较低，但其他许多药物代谢酶的表达水平不经诱导就可以用于药物小肠代谢的研究。比如，像 羧酸酯酶、葡萄糖醛酸转移酶、谷胱甘肽-S-转移酶、磺基转移酶和儿茶酚-O-甲基转移酶等在 Caco-2 细胞中仍保持其功能特点。在这些酶中，二相磺基转移酶和葡萄糖醛酸转移酶对于口服给药化合物的生物利用度尤其重要， 因为具有药理活性的化合物与它们发生结合反应后通常会导致活性降低或消失。例如，人们已经发现在Caco-2 细胞中，类黄酮物质 5，7-二羟黄酮产生硫酸盐和葡(萄)糖苷酸的变化， 5， 7-二羟黄酮硫酸盐的产生速度是其葡(萄)糖苷酸化的两倍。类似研究也表明，Caco-2 细胞模型中酶的表达可以使其

15、应用于药物的小肠代谢研究。尽管 Caco2 细胞模型尚存在不足，如细胞培养时间过长（21 天）；该模型本身为纯细胞系，缺乏在小肠上皮细胞中的黏液层；缺少细胞培养标准以及试验操作标准，使结果有时缺乏可比性；由于 Caco-2 细胞来源于人结肠，因而该细胞的转运特性、酶的表达以及跨膜电阻相对更能反映结肠细胞而非小肠细胞等等。但是，不可否认的是，建立与应用 Caco2 细胞模型可以被认为是药物吸收研究方面取得的重要成就，而且随着改进细胞模型的建立和培养装置、检测设备等新技术的应用，其在新药研发中必将发挥出重要作用。题目:TLR 信号通路在嘎日迪治疗炎性结肠细胞模型中作用的研究思路：1、建立炎性结肠细胞模型2、加入嘎日迪看看其在炎性细胞模型的作用3、检测炎性细胞模型在嘎日迪作用前后其内 TLR 信号通路相关因子：MYD88，IRAK,IRAF6，NF-KB，MAPK;TRIF,IFN-b在蛋白质和核酸方面的变化，从而TLR 确定信号通路是否在嘎日迪治疗炎性结肠细胞模型中起作用，为嘎日迪的作用机制提供相应的研究资料。