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1、生物制品化学规定规程生物制品化学规定规程本规程载人的化学检定项目，如采用其他方法测定，其结果与本规程所列应无显着差异。如遇制品质量存在疑问时，其最后判定应以本规程所列方法测定结果为准。标准液的配制与标定方法参看最新版中国药典。PHPH 值测定（电位法）值测定（电位法）1 1 仪器校准（定位）用标准缓冲溶液仪器校准（定位）用标准缓冲溶液应使用分析纯标准缓冲物质配制。1.1 0.05mol/L 邻苯二甲酸氢钾溶液称取于 1155干燥 23 小时的邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4）10.120.01g，溶于蒸馏水，并稀释至 1000ml。1.20.025mol/L 磷酸氢二钠和 0.025mol/L
2、 磷酸二氢钾混合溶液分别称取在 1155干燥 23 小时的磷酸氢二钠（Na2HPO4）3.530.01g 和磷酸二氢钾（KH2PO4）3.390.01g，溶于预先煮沸过 1530 分钟并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至 1000ml。1.30.01mol/L 硼砂溶液称取硼砂（Na2B4O710H2O）3.800.01g（注意：不能烘！），溶于预先煮沸过 1530 分钟并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至 1000ml。置聚乙烯塑料瓶中密闭保存。标准缓冲溶液于 050的标准 pH 值温度()0.05mol/L 邻苯二甲酸氢钾0.025mol/L 混合磷酸盐0.01mol/L 硼砂04.016.989.4
3、654.006.959.39104.006.929.33154.006.909.28204.006.889.23254.006.869.18304.016.859.14354.026.849.10404.036.849.07454.046.839.04504.066.839.022 2 操作操作使用玻璃电极酸度计测定，操作方法按仪器说明书进行。用两种标准缓冲溶液校正或核对，相差不得超过 0.05。固体总量测定固体总量测定甲、甲、105105干烤法干烤法1 操作精确量取一定体积样品于干燥至恒重的扁称量瓶中，置105烤箱中烘至恒重。2 计算烘干后样品重量样品固体总量%（g/ml）= 100样品 m
4、l 数乙、乙、5050干烤法干烤法1 操作精确量取 1mlA 群脑膜炎球菌多糖菌苗半成品原液于已干燥至恒重的称量瓶（22.5cm）中，置 50干燥箱中，干燥至恒重。2 计算同 105干烤法。半微量定氮法半微量定氮法1 1 试剂试剂1.1 硫酸化学纯，比重 1.84。1.2 消化剂硫酸铜（CuSO45H2O）1 份与硫酸钾（K2SO4）10 份共同研细混匀即成。1.3 12.5mol/L 氢氧化钠液取氢氧化钠 500g，加蒸馏水至 1000ml，摇匀。1.4 2%硼酸吸收液硼酸 20g 加蒸馏水使溶解成 1000ml，加混合指标剂 10ml，摇匀。1.5 混合指示剂0.2%（g/ml）溴甲酚绿酒
5、精溶液 5 份与 0.1%（g/ml）甲基红酒精溶液 2 份混合配成。1.6 标准 0.01mol/L 盐酸或 0.005mol/L 硫酸溶液。2 2 操作操作2.1 消化准确量取一定体积样品（含氮量在 12mg 左右）于凯氏定氮瓶中，加消化剂约 0.3g，浓硫酸 1.0ml 进行消化，至澄明蓝绿色，继续消化约 60 分钟，同时做空白。2.2 蒸馏与滴定取 10ml 硼酸吸收液于 100ml 三角瓶内，将凯氏蒸馏器冷凝管末端浸入硼酸吸收液内，将消化好的样品移入凯氏蒸馏器内，用蒸馏水洗定氮瓶 34 次，洗液亦移入蒸馏器内，再加 5ml 12.5mol/L 氢氧化钠溶液，然后进行蒸馏，待接收液总体
6、积约3550ml,将冷凝管末端取出液面，让蒸汽冲洗约 1 分钟，再用少量蒸馏水冲洗冷凝管末端，接收液用标准 0.01mol/L 盐酸或0.005mol/L 硫酸进行滴定，至溶液显著变色。3 计算（样品滴定数 空白滴定数）标准盐酸 mol/L14样品总氮含量(mg/ml)样品 ml 数附注附注1.蒸馏前应蒸洗蒸馏器 15 分钟。2.蒸汽发生瓶内应加数滴硫酸及甲基红指示剂至呈明显红色。蛋白质含量测定蛋白质含量测定甲、钨酸沉淀法甲、钨酸沉淀法1 试剂1.110%钨酸钠溶液取钨酸钠 10g，加蒸馏水使溶解成 100ml。1.2 0.33mol/L 硫酸溶液量取化学纯硫酸 1.86ml，缓缓注入适量的蒸
7、馏水中，待冷加水稀释至 100ml。1.30.145mol/L 氯化钠溶液取氯化钠 9g，加蒸馏水使溶解成 1000ml。2 操作2.1 钨酸除蛋白质精确量取样品 2ml 加蒸馏水 14ml，加 10%钨酸钠2ml，0.33mol/L 硫酸 2ml，摇匀，静置 30 分钟过滤。2.2 精确量取样品 1ml，用 0.145mol/L 氯化钠溶液准确稀释至每 ml 含氮量 1mg 左右。2.3 精确量取稀释液 1ml 及除蛋白质滤液 5ml，分别移入凯氏定氮瓶中，用半微量定氮法测定样品的总氮及非蛋白氮含量。3 计算样品总氮含量(mg/ml)=（样品滴定数-空白滴定数）标准盐酸 mol/L14稀释倍
8、数样品非蛋白氮含量(mg/ml)=（样品滴定数-空白滴定数）标准盐酸 mol/L1412样品蛋白质含量(g/ml)=（总氮-非蛋白氮）6.251/10附注1.样品蛋白质含量如超过 10%(g/ml)，除蛋白质时应适当加大样品稀释倍数，10%钨酸钠及 0.33mol/L 硫酸用量相应地按比例增加，使溶液钨酸浓度仍保持 1%。2.总氮与非蛋白氮可用同一空白。乙、三氯醋酸沉淀法乙、三氯醋酸沉淀法1 2%三氯醋酸溶液取三氯醋酸 12g，加蒸馏水溶解至 100ml。2 操作精确量取一定体积的样品（含蛋白质 612mg 左右，于10ml 尖底离心管中，加等体积的 12%三氯醋酸混匀，放置半小时后 3000
9、r/min 离心 30 分钟，倾净上清，沉淀用蒸馏水约3ml（分数次）洗入凯氏烧瓶，按半数量定氮法测定氮含量。3 计算（样品滴定数 空白滴定数）标准盐酸 mol/L14样品蛋白质含量(mg/ml)6.25样品 ml 数丙、微量法（丙、微量法（LowryLowry 法）法）1.试剂1.1 4%碳酸钠溶液取 4g 碳酸钠，加蒸馏水溶解成 100ml。1.2 0.2mol/L 氢氧化钠溶液取 0.8g 氢氧化钠加蒸馏水，溶解成 100ml。1.3 0.04mol/L 硫酸铜溶液取 1gCuSO45H2O 加蒸馏水溶解成 100ml。1.42%酒石酸钾（或 0.1mol/L 酒石酸钠）取 2g 酒石酸
10、钾（或酒石酸钠），加蒸馏水溶解成 100ml。1.5 碱性铜液临用前取试剂 1.1 和 1.2 各 25ml，试剂 1.3 和 1.3 各0.5ml 混匀配制而成。1.6 酚试剂称取 100g 钨酸钠(Na2WO42H2O),25g 钼酸钠(Na2MoO42H2O)，置 1500ml 烧瓶中，加入 700ml 蒸馏水，50ml 85%磷酸及 100ml 浓盐酸，上联回流管（使用木塞或锡纸包裹的橡皮塞）微沸加流 10 小时，取下回流管，加入 150g 硫酸锂，50ml 蒸馏水，几滴溴液，煮沸约 15 分钟，驱除过量的溴。冷却，加蒸馏水稀释至 1000ml，过滤，为酚试剂贮备液。酚试剂贮备液经标准
11、氢氧化钠液滴定，测定酸浓度，而后用蒸馏水稀释至相当 1mol/L 盐酸浓度，即为酚试剂。1.7 标准蛋白质溶液取牛血清白蛋白标准品（由检定所统一标定发给），准确稀释至 1mg/ml(含 0.02%NaN3)，为标准蛋白质贮备液。精确量取标准蛋白质贮备液 2.5ml 于 25ml 容量瓶中，用含 0.02%NaN3的蒸馏水稀释至刻度，为标准蛋白质溶液（100g/ml）。2 操作2.1 样品精确量取一定体积样品（含蛋白质 50g 左右）于试管中，加 5ml 碱性铜液，混匀，于室温放置 10 分钟，快速加入 0.5ml酚试剂，摇匀，于室温放置 30 分钟，用 650nm 波长或红色滤光片比色（呈色后，如发现混浊，经 3000r/min 离心 15 分钟后再比色）。2.2 标准曲线精确量取标准蛋白质溶液（100g/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置于试管中，加蒸馏水补至 1ml，其余操作同样品，可得一标准曲线。3 计算从标准曲线查出样品相当标准蛋白质溶液之 ml 数 A；A0.01%样品蛋白质含量（g/ml）= 样品 ml 数附注附注检测 A 群脑膜炎多糖抗原半成品原液可取 1ml（含抗原310mg）。