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1、 1 2一、植物组织培养的概念及分类一、植物组织培养的概念及分类w植物组织培养（plant tissue culture）的原始/狭义概念：由源于植物各种器官的培养材料（外植体）在离体条件下增殖形成的愈伤组织的培养。w植物组织培养的广义概念：植物及植物器官、组织、细胞和原生质体等植物各种离体生活部份的培养。w植物组织培养也称植物离体培养（culture in vitro）。 3w植物组织培养的分类可以归纳如下： 植株培养 胚胎培养 器官培养 培养材料 组织培养（包括愈伤组织培养） 细胞培养 原生质体培养 固体培养 培养方式 振荡培养 液体培养 旋转培养 静止培养（包括纸桥培养） 4三、植物组织
2、培养的应用三、植物组织培养的应用w无性系的快速繁殖（包括脱毒苗繁殖）w花药培养与单倍体育种w体细胞杂交和突变体筛选w植物次生代谢产物的生产二、植物组织培养的生理依据二、植物组织培养的生理依据 5四、植物组织培养的操作技术四、植物组织培养的操作技术 w决定植物组织培养成败与效果的关键因素有二： 培养基、无菌操作。w植物组织培养技术中最关键的技术是无菌操作技术！ w根据操作的先后顺序，可以把植物组织培养过程分以下三大步骤：培养基配制、接种 、培养。w研究方法：查阅资料、实验（正交试验法） 6 植物组织培养过程植物组织培养过程 培养基配制培养基配制 接种接种 培养培养 （取材）（取材） 接种室、超净
3、工作台清洁、消毒接种室、超净工作台清洁、消毒 植物材料的表面消毒植物材料的表面消毒 无菌操作（接种）无菌操作（接种） 7 1、培养基配制、培养基配制 （1）培养基母液的配制）培养基母液的配制 植物组培常用基本培养基有：MS、White、B5、N6等w无机盐：大量元素：100 微量元素（Ca盐、Fe盐单配）：1000w有机物：维生素（VB1，等）：100-1000 氨基酸（甘氨酸，等）：100-1000w生长物质：2,4-D、NAA、IBA：500-1000 6-BA、KT、ZT：500-1000 8（2）培养基的配制培养基的配制w吸取母液w加入琼脂：0.6-0.8 %w加热溶解w加入蔗糖：2-
4、3 %w定容w调pH（MS=5.8）w分装（3）培养基的消毒培养基的消毒w 排冷气、放气出芽、生根培养基出芽、生根培养基的差别的差别：（1）CTK/生长素（2）蔗糖（3）琼脂 92、接种、接种（1）取材）取材 生长季节取材 晴天取材 内部组织（2 ）接种室、超净工作台清洁、消毒）接种室、超净工作台清洁、消毒 操作者 接种室 超净台 10（3）植物材料的表面消毒）植物材料的表面消毒 常用消毒剂： 70-75 %乙醇：30 s 0.1-0.2 %升汞：5-10 min 2-5 %次氯酸钠：5-10 min 饱和漂白粉上清液：5-10 min （4）无菌操作（接种）无菌操作（接种） 接种工具：镊子、手术刀、剪刀 接种区域： 接种方法：叶片、顶芽、茎段 无菌苗的培育无菌苗的培育！ 113、培养、培养w温度：w光照：愈伤的培养、生根；光自养培养w湿度： 12五、试管苗移栽五、试管苗移栽w晾苗：w炼苗： 两段生根法w移栽：温度、湿度的控制返回