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1、 3.2 体外受精和体外受精和早期胚胎培养早期胚胎培养精子的发生精子的发生卵子的发生卵子的发生受受精精过过程程准备阶段准备阶段受精阶段受精阶段卵子成熟卵子成熟精子获能精子获能穿越透明带穿越透明带穿越放射冠穿越放射冠进入卵黄膜进入卵黄膜雌雄原核形成雌雄原核形成合子形成合子形成早早期期胚胚胎胎发发育育减数分裂减数分裂受精卵受精卵2 2细胞细胞4 4细胞细胞8 8细胞细胞桑椹胚桑椹胚囊胚囊胚原肠胚原肠胚 知识回顾知识回顾 第一个试管婴儿于第一个试管婴儿于1978年年7月月25日在英国的奥尔德姆市医院诞日在英国的奥尔德姆市医院诞生，她的名字叫生，她的名字叫路易丝路易丝. .布朗布朗。路。路易丝易丝.布
2、朗的母亲梅布朗的母亲梅.布朗因输卵管布朗因输卵管阻塞而不能生育。阻塞而不能生育。首例试管婴儿首例试管婴儿 医生从梅医生从梅. .布朗（时年布朗（时年3131岁）体岁）体内提取卵子，再取她丈夫（时年内提取卵子，再取她丈夫（时年3838岁）岁）的精液，经处理在体外使卵子受精，的精液，经处理在体外使卵子受精，受精卵分裂形成受精卵分裂形成1616细胞胚后重新植入细胞胚后重新植入梅梅. .布朗的子宫内。布朗的子宫内。9 9个多月后就生下个多月后就生下了了路易丝路易丝. .布朗布朗。19881988年年3 3月月1010日我国首例试管婴儿诞生日我国首例试管婴儿诞生著名妇产科专家张丽珠教著名妇产科专家张丽珠
3、教授与中国首例试管婴儿授与中国首例试管婴儿19921992年年我国首例三胞胎试管婴儿我国首例三胞胎试管婴儿19821982年世界首例试管牛犊问世年世界首例试管牛犊问世试管牛（两头小牛）试管牛（两头小牛） 是指通过人工操作使是指通过人工操作使卵子和精子卵子和精子在在体外体外条件下条件下成成熟熟和和受精受精，并通过培养发育成，并通过培养发育成早期胚胎早期胚胎后，再经后，再经移植移植产生后代的技术。产生后代的技术。快速繁殖动物优良品种快速繁殖动物优良品种4 4、目的：、目的：3 3、技术手段：、技术手段： 体外受精体外受精、早期胚胎培养早期胚胎培养和胚胎移植。和胚胎移植。精子精子卵子卵子受精卵受精卵
4、 早期胚胎早期胚胎子宫子宫个体个体1 1、概念：、概念：2 2、过程：、过程：一、试管动物技术一、试管动物技术二、体外受精二、体外受精1.1.卵母细胞的采集和培养卵母细胞的采集和培养2.2.精子的收集和获能精子的收集和获能3.3.受精受精采集采集方法方法采集采集部位部位适宜适宜动物动物操作操作卵子可否直卵子可否直接受精接受精超数超数排卵排卵法法用用促性腺激素促性腺激素处理，处理，使其排出更多的卵使其排出更多的卵子，然后从输卵管子，然后从输卵管中冲取卵子中冲取卵子小鼠、小鼠、兔、猪、兔、猪、羊羊采集的卵子采集的卵子可可直接直接参与参与体外受精体外受精卵巢卵巢取卵取卵法法大家畜大家畜或大型或大型动
5、物，动物，如牛如牛已已屠宰屠宰母畜的母畜的卵卵巢巢中采集卵母细胞中采集卵母细胞借助工具借助工具，直接，直接从从活体动物活体动物的的卵巢卵巢中吸取卵母细胞中吸取卵母细胞采集的卵母采集的卵母细胞，要细胞，要体体外人工培养外人工培养成熟后成熟后，才，才能参与受精能参与受精输卵输卵管管卵巢卵巢1.1.卵母细胞的采集和培养卵母细胞的采集和培养采集方法采集方法适宜动物适宜动物操作操作假阴假阴道法道法手握法手握法电刺电刺激法激法体型小，易体型小，易控制的家畜，控制的家畜，如，猪、犬如，猪、犬野生动物或野生动物或经济动物经济动物麻醉动物，用麻醉动物，用特制电极特制电极伸入动物直伸入动物直肠，肠，直接刺激射精中
6、枢神经直接刺激射精中枢神经( (腰骶腰骶部部) )无需设备，徒手或戴上橡胶手套，无需设备，徒手或戴上橡胶手套，直接把握直接把握雄性动物的阴茎，给予适雄性动物的阴茎，给予适当的当的压力和刺激压力和刺激采用采用仿生学仿生学方法，方法，模仿发情雌性动模仿发情雌性动物阴道环境物阴道环境，满足雄性动物交配时，满足雄性动物交配时对压力、温度和润滑度的要求，同对压力、温度和润滑度的要求，同时配有时配有活台畜活台畜或或假台畜假台畜体型较大体型较大的家畜的家畜2.2.精子的采集和获能精子的采集和获能（1 1）. .精子的采集精子的采集获能方法获能方法适宜动物适宜动物培养液培养液啮齿类动物、啮齿类动物、家兔和猪等
7、家兔和猪等人工配制的人工配制的获能液获能液牛、羊等家畜牛、羊等家畜一定浓度的一定浓度的肝素肝素或或钙离钙离子载体子载体A23187A23187溶液溶液中中培养法培养法化学诱导法化学诱导法（2 2）. .精子的获能精子的获能获能溶液或获能溶液或专用的受精溶液专用的受精溶液精子和卵子一般要放在精子和卵子一般要放在培养液小滴内培养液小滴内共同培养共同培养一段时间一段时间才能完成受精才能完成受精3.3.受精受精卵巢卵巢卵母卵母细胞细胞新鲜或新鲜或解冻精液解冻精液卵母细卵母细胞培养胞培养精液离精液离心处理心处理精子获精子获能处理能处理 受精卵培养受精卵培养体外受精体外受精分离精子和精液分离精子和精液培养
8、法培养法化学诱导法化学诱导法 获能液获能液/专用受精溶液专用受精溶液3.3.受精受精 受精卵应移入受精卵应移入发育培养液发育培养液中继续培养，以中继续培养，以检查检查受精状况受精状况和和受精卵的发育能力受精卵的发育能力无机盐与无机盐与有机盐有机盐维生素、激素、氨基酸、核苷酸等维生素、激素、氨基酸、核苷酸等血清血清向受体移植向受体移植/ / 冷冻保存冷冻保存三、胚胎的早期培养三、胚胎的早期培养动物动物胚胎移植时间胚胎移植时间牛、羊等牛、羊等小鼠、家兔等实验动物小鼠、家兔等实验动物人人桑椹胚或囊胚阶段桑椹胚或囊胚阶段桑椹胚或囊胚前阶段桑椹胚或囊胚前阶段8 81616个细胞阶段个细胞阶段三、胚胎的早
9、期培养三、胚胎的早期培养澳大利亚海福特肉用牛澳大利亚海福特肉用牛良种荷斯坦奶牛良种荷斯坦奶牛A A、价格昂贵，资金的限制、价格昂贵，资金的限制B B、牛生育力低，一生只能生育、牛生育力低，一生只能生育4-54-5头头采集良种母牛的卵母细胞采集良种母牛的卵母细胞卵母细胞的体外培养卵母细胞的体外培养采集良种公牛精子采集良种公牛精子精子体外获能精子体外获能体外受精体外受精早期胚胎培养早期胚胎培养胚胎移植胚胎移植受体牛受体牛（子宫内孕育）（子宫内孕育）良种犊牛良种犊牛成熟期牛成熟期牛采集卵巢中采集卵巢中的卵母细胞的卵母细胞“试管牛试管牛”工厂化生产流程图工厂化生产流程图屠宰加工厂屠宰加工厂市场市场有性
10、生殖 无性生殖 核移植技术、胚胎移植遵循 不遵循体外受精体外受精胚胎移植胚胎移植 试管动物 克隆动物生殖方式技术手段遗传物质遗传规律来自2个个体 主要来自核供体 四、试管动物和克隆动物的比较四、试管动物和克隆动物的比较试管动物技术试管动物技术体外受精体外受精早期胚胎培养早期胚胎培养卵母细胞的卵母细胞的采集采集精子的获精子的获取取受精：受精：条件：条件：培养液成分：培养液成分：假阴道法假阴道法手握法手握法电刺激法电刺激法方法一：用促性腺激素处理，使其超数排卵，从输卵管中冲方法一：用促性腺激素处理，使其超数排卵，从输卵管中冲 取卵子取卵子方法二：从屠宰母畜卵巢中采集方法二：从屠宰母畜卵巢中采集 方
11、法三：直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞方法三：直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞受精卵在发育培养液中培养受精卵在发育培养液中培养 无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清等酸、血清等 获能的精子获能的精子 培养成熟的卵子培养成熟的卵子 完成受精完成受精本节小结本节小结1 1、下列关于体外受精和早期胚胎培养的、下列关于体外受精和早期胚胎培养的说法错误的是（说法错误的是（ ）A A、在体外受精前，要对精子进行获能处理、在体外受精前，要对精子进行获能处理B B、精子和卵子一般要放在培养液小滴内共、精子和卵子一般要放在培养液小滴内共同培养一段时间才
12、能完成受精作用同培养一段时间才能完成受精作用C C、受精卵在受精溶液中进行早期发育、受精卵在受精溶液中进行早期发育D D、胚胎发育到适当阶段可进行冷冻保存、胚胎发育到适当阶段可进行冷冻保存C受精溶液受精溶液区分：区分：获能溶液获能溶液受精溶液受精溶液发育培养液发育培养液精子获能精子获能受精受精胚胎的早期培养胚胎的早期培养胚胎移植胚胎移植2、根据下图回答、根据下图回答卵母细胞卵母细胞母体母体精子精子所作的处理为所作的处理为 ，是是 过程过程 ，是是 ，是是 。牛卵巢牛卵巢牛卵巢中采卵牛卵巢中采卵借助超声波探测仪和内窥镜的引导，从活母畜卵巢采集卵母借助超声波探测仪和内窥镜的引导，从活母畜卵巢采集卵母细胞。操作员先将带有超声波探头和吸卵针的采卵器通过生细胞。操作员先将带有超声波探头和吸卵针的采卵器通过生殖道插入子宫，同时将探头贴在卵巢上。根据殖道插入子宫，同时将探头贴在卵巢上。根据B B超屏幕所显示超屏幕所显示的卵泡位置，利用采卵针穿刺卵泡并同时抽吸卵母细胞。的卵泡位置，利用采卵针穿刺卵泡并同时抽吸卵母细胞。从活体卵巢中从活体卵巢中采集卵母细胞采集卵母细胞课件制作课件制作 仙游第一中学仙游第一中学 黄美洪黄美洪