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1、 药物分析方法验证 Validation of Analytical Method o 药物分析方法（药物分析方法（Ana1ytica1 procedure）o 是指进行药物分析实验的方式，应详细描述进是指进行药物分析实验的方式，应详细描述进行每个分析试验所必需的步骤行每个分析试验所必需的步骤o 包括（但不局限于）：样品、参比物、试剂的包括（但不局限于）：样品、参比物、试剂的制备，仪器的使用，校准曲线的绘制，计算公制备，仪器的使用，校准曲线的绘制，计算公式的运用等式的运用等o 各种药物分析方法学研究，在控制药品质量和研制新药质量标准中具有非常重要的作用o 为了保证药物分析方法的可靠、有效和耐用
2、性，须系统与科学地研究分析方法学o 不同分析方法具有各自特点，随分析对象而变化，需 采用特征性效能参数（performance parameters）加以验证（validation）典型的验证参数典型的验证参数(Characteristics)(Characteristics)m准确性准确性(Accuracy)(Accuracy)m精密度精密度(Precision)(Precision)o重复性重复性(Repeatablity)(Repeatablity)o中间精密度中间精密度(Intermediate Precision)(Intermediate Precision)m专属性专属性(Spe
3、cificity)(Specificity)m检测限检测限(Detection limit)(Detection limit)m定量限定量限(Quantitation limit)(Quantitation limit)m线性线性(Linearity)(Linearity)m范围范围(Range)(Range)m耐用性耐用性(Robustness)(Robustness)Validation Characteristics vs. Type of Analytical Procedure分析方法分析方法鉴别鉴别杂质检查杂质检查含量测定含量测定定量测定定量测定限度检查限度检查准确性准确性NoYe
4、sNoYes精密度精密度 重复性重复性NoYesNoYes 中间精密度中间精密度NoYesNoYes专属性专属性YesYesYesYes检出限检出限NoNoYesNo定量限定量限NoYesNoNo线性和范围线性和范围NoYesNoYes耐用性耐用性YesYesYesYeso 上述效能参数，根据药物不同的测定浓度范围、不同的样品基质、分析方法的不同目的等而有所选择不同类型药物分析方法学验证指标o 药物鉴别：专属性、耐用性。o 杂质检查可分为限度试验和定量测定两种情况。o限度检查：专属性、检测限和耐用性；o定量测定：专属性、定量限、线性、范围、准确性、精密度、耐用性。o 药物的含量测定：专属性、线
5、性、范围、准确性、精密度、耐用性。7 注意o整个分析方法学验证中，须采用经过完全确证、纯度已知的标准物质进行研究o标准物质的纯度要求与使用目的 应一致1专属性（Specificity） 专属性 系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的分析方法能正确测定出被测物的能力 。 由于干扰组分难以得知，可采用: 不同极性色谱固定相 不同极性流动相（展开剂） 不同检测器，紫外不同检测波长 专一性更强的方法如GC/MS、LC/MS、GC/IR 来确定方法的选择性或专属性2 2线性（线性（LinearityLinearity） 分析方法的线性是指分析方法的线性是指所得检测结果与样品中所得检
6、测结果与样品中被分析物的浓度（含量）成比例关系的性能被分析物的浓度（含量）成比例关系的性能3 3范围（范围（RangeRange） 分析方法的范围是指分析方法的范围是指在样品中被分析物的较在样品中被分析物的较高浓度高浓度( (量量) )和较低浓度和较低浓度( (量量) )之间的区间、已证实之间的区间、已证实区间内具有合适的准确性、精密度、线性区间内具有合适的准确性、精密度、线性仪器的响应值与被测药物浓度在一定范围内的比仪器的响应值与被测药物浓度在一定范围内的比例关系，例关系，既用于评价分析仪器的工作效能，也用既用于评价分析仪器的工作效能，也用作测量药物浓度的标准曲线作测量药物浓度的标准曲线 不
7、同的仪器或检测器有不同的线性范围，并随不同的仪器或检测器有不同的线性范围，并随分析的样品基质和药物不同而发生变化分析的样品基质和药物不同而发生变化 在药物低浓度区，由于仪器噪声和基质干扰大，在药物低浓度区，由于仪器噪声和基质干扰大，往往不呈线性；在过高的药物浓度区，由于检测器往往不呈线性；在过高的药物浓度区，由于检测器过载等原因也会失去线性过载等原因也会失去线性 非线性是定量误差的一个重要来源。非线性是定量误差的一个重要来源。4 4准确性准确性 系指分析方法测量值与真值系指分析方法测量值与真值（true valuetrue value）的接近程度。测定方法：）的接近程度。测定方法：回收率试验：
8、回收率试验：反映分析方法能否对样品中被测组反映分析方法能否对样品中被测组分的含量给予全量响应以及各步操作加和误差对分的含量给予全量响应以及各步操作加和误差对测量值的影响。测量值的影响。5.5.精密度精密度( (PrecisionPrecision) ) 是规定条件下对同一匀质样品多次取样进行是规定条件下对同一匀质样品多次取样进行一系列检测结果的一致程度（离散程度）一系列检测结果的一致程度（离散程度） 精密度可以从三方面考虑：重复性、中间精精密度可以从三方面考虑：重复性、中间精密度、重现性。密度、重现性。 分析方法的精密度通常以测量数据的变异性、分析方法的精密度通常以测量数据的变异性、标准偏差来
9、表示标准偏差来表示 5.15.1重复性重复性( (RepeatabilityRepeatability) ) 重复性是指在同样的操作条件下较短时间间隔重复性是指在同样的操作条件下较短时间间隔的精密度：也称为日内差的精密度：也称为日内差(Intra-assay (Intra-assay precision)precision)。5.25.2中间精密度中间精密度( (Intermediate PrecisionIntermediate Precision) ) 中间精密度指的是试验室内部条件改变（如：中间精密度指的是试验室内部条件改变（如：不同天、不同分析测试者、不同仪器等）情况下的不同天、不同分
10、析测试者、不同仪器等）情况下的精密度。精密度。 5.35.3重现性（重现性（ReproducibilityReproducibility） 指不同试验室之间的精密度，常用于合作试验指不同试验室之间的精密度，常用于合作试验研究研究 (collaborative studies)(collaborative studies)中的方法学的标准中的方法学的标准化研究。化研究。Q精密度试验精密度试验m应使用同一均质、可信的样品应使用同一均质、可信的样品m多次取样进行一系列试验多次取样进行一系列试验称量称量溶解溶解(回流提取、超声回流提取、超声)加各种试剂加各种试剂反应温度、时间、光照等时间影响反应温度、
11、时间、光照等时间影响供试液供试液测定测定o 精密是保证准确的前提，只有在已消除了系精密是保证准确的前提，只有在已消除了系统误差的条件下，才可能以精密度同时表达统误差的条件下，才可能以精密度同时表达准确性。准确性。o 分析方法的精密度表示测定的重现性和重复分析方法的精密度表示测定的重现性和重复性，准确度则表示分析方法的正确性性，准确度则表示分析方法的正确性分析方法的检测限（分析方法的检测限（LODLOD）系指试样中被测系指试样中被测物能被检测出的最低量或浓度，即能显著地与空物能被检测出的最低量或浓度，即能显著地与空白样品信号相区分的响应白样品信号相区分的响应，一般规定其信噪比，一般规定其信噪比（
12、S/NS/N）3 3 LODLOD仅作为限度试验参数和定性鉴别的依据，仅作为限度试验参数和定性鉴别的依据，没有定量意义没有定量意义6 6检测限（检测限（Detection limitDetection limit）197定量限（Quantitation limit） 具有合适准确性（RE%）和精密度（RSD%）的条件下，能够定量测定分析组分的最低量或浓度。 它是样品中含量低的化合物定量分析的参数，特别对于微量物质的含量测定 分析方法的三个主要测定区分析方法的三个主要测定区- - 0 0LOD LODLOD LODLOQ LOQLOQ LOQ不可检测范围不可检测范围 定性检测范围定性检测范围 定
13、量测定范围定量测定范围-8耐用性（Robustness） 分析方法的耐用性是指试验参数发生小改变时，测量能力保持不受影响，可用于说明正常使用时的可靠性 Testing varying some or all conditions, e.g., age of columns, column type, column temperature, pH of buffer in mobile phase, reagents, is normally performed. 耐用性 典型例子：o样品稳定性o提取时间o在HPLC中 流动相的pH值的变化 流动相组分的变化 柱子不同（不同批号和供应商） 温度不
14、同 流速不同o如分析方法对分析参数变化是敏感的，则如分析方法对分析参数变化是敏感的，则应适当控制该分析参数或在方法中注明应适当控制该分析参数或在方法中注明 药物分析要获得准确的结果，除了对分析方法进行验证外，还应加强实验室质量控制QC体系建设，并以标准操作规程SOP的形式加以固定和标准化。 QC体系主要用于经常性地检查所用药物分析方法的效能如检测偶然误差（精密度）、系统误差（准确性）、样品基质的影响、分析仪器的校正等。9质量控制 建立一种药物分析方法通常从建立一种药物分析方法通常从待测成分结构、待测成分结构、理化性质、理化性质、待测浓度范围、待测浓度范围、样品基质样品基质等方面考虑，并根据方法使用的不同要求，选等方面考虑，并根据方法使用的不同要求，选择上述特征性效能参数进行验证择上述特征性效能参数进行验证讨论