考点加强课7[精选].doc

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1、重点题型1目的微生物的选择 与鉴定1.不离微生物的原理与措施(1)原理：自然环境中的微生物是混杂在一同的，因而不离取得纯培育物应首先采用的办法是将单个的微生物与其他微生物不离，再给该微生物提供适合的养分和条件，使其生长成为可见的群体。(2)常用措施接种进程中尽量使微生物分散开来，如平板划线法、稀释涂布平板法。运用选择培育基的作用特点，在培育基中添加某种特定的物质，抑制不需求的微生物的生长，促进所需微生物的生长。2.选择培育基四种罕见制备办法或实例【例证】 (2017全国卷，37)某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和应用。回答以下征询 题：(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌那么

2、不能，缘故是前者能发生。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，缘故是_，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的要紧作用是_(答出两点即可)。(2)为了选择 可分解尿素的细菌，在配制培育基时，应选择(填“尿素“NH4NO3或“尿素NH4NO3)作为氮源，不选择其他两组的缘故是_。(3)用来选择 分解尿素细菌的培育基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有_(答出两点即可)。解析(1)只要能分解脲酶的微生物才干分解尿素，以尿素作为氮源。能分解尿素的细菌是一种分解者，属于异养型生物，不能以尿素的分解产物CO2作为碳源。能分解尿素的细菌能够 以葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖

3、的要紧作用是：一方面可氧化分解为细胞生命活动提供能量，另一方面其代谢两头产物可为多种无机物的分解提供原料。(2)为了选择 可分解尿素的细菌，在配制培育基时，应选择以尿素作为独一氮源的选择培育基，而其他两组都含有含氮物质NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能应用NH4NO3不能起到选择 作用。(3)用来选择 分解尿素细菌的培育基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用：KH2PO4和Na2HPO4构成缓冲液，可维持培育基的pH绝对波动；KH2PO4和Na2HPO4能为微生物生长提供无机盐离子。答案(1)脲酶分解尿素的细菌是异养生物，不能应用CO2来分解无机物为细胞生命活动提供能量

4、，为其他无机物的分解提供原料(2)尿素其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能应用NH4NO3，不能起到选择 作用(3)为细菌生长提供无机盐离子，作为缓冲剂坚持细胞生长进程中pH波动(2019天津市调研)下面是选择 抗链霉素大肠杆菌的实验步骤及相关图解。实验步骤：把少量对链霉素敏感的大肠杆菌接种在不含链霉素的培育基1的表面，停顿培育。待其长出密集的小菌落后，用影印法接种到不含链霉素的培育基2上，随即再影印到含有链霉素的培育基3上，停顿培育。在培育基3上出现了个不抗链霉素的菌落，将其选择 出。请回答：(1)配制培育基时除了满足全然 的养分条件外，还需满足微生物生长对特

5、不养分物质、的要求。(2)从功用上看，含有链霉素的培育基属于培育基。假定在培育基中参与伊红和美蓝，那么培育皿中长出的菌落颜色为。由图可知，1号培育基接种的办法为_。(3)对2和3停顿比拟，在2上寻 到与3上相应的菌落，挑取其中一个菌落接种到(填“含链霉素或“不含链霉素)的培育基上，假定有较多的菌落出现，那么阐明该抗性基因渐变发作在该菌接触链霉素之(填“前或“后)。(4)3中的菌落比1、2中的菌落少特不 多，这阐明了基因渐变具有的特点。解析(1)配制培育基时在提供几种全然 养分条件的基础上，还需满足微生物生长对pH、特不养分物质以及氧气的要求。(2)链霉素是抗生素，对大肠杆菌具有选择作用。在伊红

6、和美蓝培育基上.大肠杆菌菌落颜色为黑色。由题图可知，1号培育基接种的办法为稀释涂布平板法。(3)培育基2和培育基3上一样的菌落，是具有一样性状的大肠杆菌构成的，将培育基2中一个相应菌落接种到含链霉素的培育基上，假定出现较多的菌落，那么阐明该抗性基因渐变发作在该菌接触链霉素之前。(4)抗链霉素性状是大肠杆菌基因渐变后取得的性状.3号培育皿中的菌落比1号、2号中的菌落少特不 多，这阐明了基因渐变频率特不 低。答案(1)pH氧气(2)选择黑色稀释涂布平板法(3)含链霉素前(4)频率低/低频性影印法接种的详细进程是：将待测的稀释菌悬液涂在适合的平板上，等其长好后作为母平板(每个平板上的菌落操纵在303

7、00个)；用一小块灭菌的丝绒固定在直径较平板略小的圆柱形木块上，构成印章(即接种工具)；然后把长有菌落的母平板倒置在丝绒的印章上，悄悄印一下；再把此印章在另一含有选择培育基的平板上悄悄印一下，经培育后，选择培育基平板上长出的菌落与母平板上的菌落地位对应，比拟影印平板与母平板上菌落生长状况，即可从相应地位的母平板上选出待测的渐变型菌落。影印法最后是为证明微生物的抗药性渐变是自发的、与相应的环境要素有关而设计的接种办法，目前已普遍运用于养分缺陷型微生物的选择 以及抗药性菌株选择 等研讨任务中。重点题型2微生物的不离与计数微生物计数的办法专项归结1.直接计数法(也叫活菌计数法)常用的是稀释涂布平板法

8、。(1)原理：当样品的稀释度足够高时，培育基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，经过统计平板上的菌落数，就能揣测出样品中大约含有多少个活菌。(2)操作：设置反复组，增强实验的压服力与精确性。将待测样品经一系列10倍稀释，选择三个稀释度的菌液，分不取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布于整个平板表面，放在适合的温度下培育，计算菌落数。为使后果接近真实值，可将同一稀释度的样液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培育，计算出菌落均匀数。为了保证后果精确，普通选择菌落数为30300个的平板停顿计数，假定设置的反复组中后果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。计算

9、公式：每克样品中的细菌数(C/V)M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的均匀菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。提示此种办法统计的菌落数往往比活菌的实践数目低。这是由于当两个或多个细胞连在一同时，平板上观看 到的只是一个菌落。2.显微镜直截了当 计数法(1)原理：应用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量，但不能区分细菌的死活。计数板是一块特制的载玻片，下面有一个特定面积(1 mm2)和高(0.1 mm)的计数室，在1 mm2的面积里又被划分红25个(或16个)中格，每个中格进一步划分红16个(或25个)小格，但计数室全然 上 由

10、400个小格组成的。(2)操作：将清洁单调的血球计数板盖上盖玻片，再将稀释的样品滴在计数板上，稍等片刻，待细菌全部沉落到计数室底部再在显微镜下统计45个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的均匀数，再按公式求出每毫升样品中所含的细菌数。(3)计算公式：每毫升原液所含细菌数每小格均匀细菌数40010 000稀释倍数。 3.滤膜法以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例，将曾经明白体积的水过滤后，将滤膜放于伊红美蓝培育基上培育，在该培育基上，大肠杆菌的菌落出现黑色，可依照培育基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。【例证】 (2018经典高考)酵母的蛋白质含量可达本身干重的一半，可作为饲料蛋白的

11、来源。有些酵母能够 应用工业废甲醇作为碳源停顿培育，如此 既可增加净化又可落低消费本钞票 。研讨人员拟从土壤样品中不离该类酵母，并停顿少量培育。如以下图为操作流程，请回答以下征询 题：(1)配制培育基时，依照培育基配方精确称量各组分，将其溶解、定容后，调理培育基的，及时对培育基停顿分装，并停顿灭菌。(2)取步骤中不同梯度的稀释液参与标志好的无菌培育皿中，在步骤中将温度约(在25 、50 或80 中选择)的培育基倒入培育皿混匀，冷凝后倒置培育。(3)挑取不离平板中长出的单菌落，按步骤所示停顿划线。以下表达合理的有。a.为保证无菌操作，接种针、接种环运用前都必需灭菌b.划线时应避免划破培育基表面，

12、以免不能构成正常菌落c.挑取菌落时，应挑取多个菌落，分不测定酵母细胞中甲醇的含量d.能够 经过逐渐提高培育基中甲醇的浓度，取得甲醇高耐受株(4)步骤中，为使酵母数量迅速添加，培育进程中需保证充足的养分和供给。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1 000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用2516型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，实际上色细胞的个数应特别 多 于，才干抵达每毫升3109个活细胞的预期密度。解析(1)配制培育基时，依照培育基配方精确称取各组分，之后溶解定容，再调理培育基的pH，普通状况下，采用高压蒸汽灭菌法对培育基停顿灭菌。(2)对培育基停顿高压蒸汽灭菌后，需将温度落至50 左右

13、后倒入培育皿混匀，冷凝后倒置培育。(3)在对酵母菌停顿划线纯化时，为保证无菌操作，接种针、接种环运用前都必需灭菌；且在划线时应避免划破培育基表面，以免不能构成正常菌落；本实验是为了取得能以工业废甲醇作为碳源的酵母，故在实验进程中能够 经过逐渐提高培育基中甲醇的浓度，取得甲醇耐受株。(4)酵母菌是兼性厌氧型真菌，有氧条件下少量繁衍。酵母菌扩展培育时，需保证充足的养分和氧气供给。“用等体积台盼蓝染液染色，即计数室中培育液体积实践只要0.120.05 mm3，设5个中方格中无色(活细胞不被台盼蓝染色)的细胞数目为x个，那么3109x/5251 0001 0000.05，解得x30。答案(1)pH高压

14、蒸汽(干冷)(2)50 (3)a、b、d(4)氧气无301.(2018山东烟台一模)为了调查某河流的水质状况，某研讨小组测定了该河流水样中的细菌含量，并停顿了细菌不离和培育等任务。回答以下征询 题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。为了检测培育基平板灭菌能否合格，可在涂布接种前，；然后，将1 mL水样稀释1 000倍，在3个平板上用涂布法分不接入0.1 mL稀释液；经适当培育后，3个平板上的菌落数分不为39、38和37，据此可得出每升水样中的活菌数为。(2)该小组采用平板划线法不离水样中的细菌。操作时，接种环经过灭菌，为了将靠拢 的菌体逐渐稀释以便取得单个菌落，在第二次及当前的

15、划线时，一定要。表示图A和B中，表示的是用稀释涂布平板法接种培育后失掉的后果。通常，对取得的纯菌种能够 依照对细菌停顿初步的鉴定和分类。(3)该小组将失掉的菌株接种到液体培育基中并混匀，一局部停顿静置培育，另一局部停顿振荡培育。后果察觉 ：振荡培育的细菌比静置培育的细菌生长速度快。剖析其缘故是：振荡培育能提高培育液中的含量，同时可使菌体与培育液充沛接触，提高的应用率。解析(1)为了确定培育基的灭菌能否合格，能够 随机取假定干灭菌后的空白平板培育一段时辰 ，观看 培育基上能否有菌落生成。由题意知1 mL水样中的菌落数是(393837)30.11 0003.8105，每升水样中的活菌数为3.810

16、51033.8108。(2)接种环用灼烧法停顿灭菌。在第二次及当前划线时，总是从上一次划线的末端开场划线，如此 做的目的是：经过划线次数的添加，将靠拢 的菌体逐渐稀释分散，使每次划线时菌体的数目逐渐增加，以便取得由单个细胞繁衍而来的单个菌落。图A是用平板划线法接种培育后失掉的后果，图B表示的是用稀释涂布平板法接种培育后失掉的后果。能够 依照菌落的外形、大小等特征对细菌停顿初步的鉴定和分类。(3)振荡培育能够 添加液体培育基的氧气含量，促进好氧型微生物的生长；同时还能使菌体与培育液充沛接触，提高养分物质的应用率。答案(1)随机取假定干灭菌后的空白平板先行培育一段时辰 3.8108(2)灼烧从上一

17、次划线的末端开场划线B落菌的外形、大小等菌落特征(3)溶解氧养分物质2.尿素是一种重要的农业氮胖。尿素并不能直截了当 被农作物吸收，只要当土壤中的细菌将尿素分解之后，才干被植物应用。如图是从土壤中选择 分解尿素的细菌的进程，请回答以下征询 题。(1)土壤中的细菌之因而 能将尿素分解，是由于细菌能分解。因而，图中选择培育基应以为独一氮源，尿素会被分解成，使培育基的碱性增强。鉴不培育基还需添加作指示剂，分解尿素的细菌在该培育基上生长一段时辰 后，其菌落四周的指示剂将变成色。(2)制备实验所需的培育基时，在各成分都溶化后、分装前，要停顿的是和灭菌，对培育基停顿灭菌的常用办法是。倒平板时要待平板冷凝后

18、，将平板倒置，其要紧目的是_。(3)为检验培育基及培育皿灭菌能否合格，可采取的措施是_。(4)现将10 mL的尿素分解菌悬液停顿梯度稀释(通常以10倍梯度稀释，即取1 mL菌液接种到mL的培育液中)，分不取0.1 mL稀释倍数为105的样液接种到5个培育基上，培育一段时辰 后，统计菌落数分不为39、41、42、43、45，那么1 mL悬液中活菌数量为个，上述进程采用的接种办法是。答案(1)脲酶尿素氨酚红红(2)调pH高压蒸汽灭菌避免培育皿盖上的冷凝水落入培育基，形成净化(3)独自设置一个灭菌后不接种菌液的培育皿(含培育基)停顿培育(4)94.2107稀释涂布平板法课后增强训练 (时辰 ：15分

19、钟)1.(2019河南名校联盟调研)如以下图为从土壤中不离、纯化和扩展培育某种微生物的流程图。回答以下征询 题：(1)称量土样时，土壤(填“需求或“不需求)停顿消毒和灭菌。(2)停顿梯度稀释操作时，假定待稀释菌液取1 mL，注入9 mL的无菌水，那么该1 mL待稀释菌液被稀释了倍。(3)平板浇注法不离指的是将1 mL稀释的样品放于空白的无菌培育皿之后，将冷却到4550 的培育基倒入，轻摇混匀、凝结，然后放于恒温箱中培育。从土壤中不离酵母菌和醋酸菌时，能够 运用平板浇注法的是，理由是_。(4)划线纯化阶段，对图示培育皿停顿划线时接种环取菌液次，该培育皿划线完成时接种环共需停顿灼烧灭菌次。(5)扩

20、展培育阶段，所用培育基是(填“液体或“固体)培育基。解析依照平板浇注法的定义可知，适合该办法不离的微生物应该是兼性厌氧型生物，而酵母菌契合该条件。答案(1)不需求(2)10(3)酵母菌平板浇注会使局部菌体埋入培育基中，酵母菌是兼性厌氧型生物，能够 在低氧甚至无氧环境下生活繁衍(4)16(5)液体2.(2018山东菏泽一模)为探求大肠杆菌CV101菌株和CV103菌株的养分需求，某团队在养分红分一样的含醋酸盐的培育液中分不接种CV101菌株和CV103菌株，并置于一样且适合的环境中培育，每隔一段时辰 统计两种菌株的生长状况。实验数据如以以下图所示，回答以下征询 题：(1)醋酸盐培育基从物理性质下

21、去看属于培育基，该培育基要紧运用是；从功用下去看属于培育基。(2)由图可知：更习惯 醋酸盐培育基环境的菌株是，其依照是_，缘故是_。(3)假定要统计培育30小时后醋酸盐培育基中的CV101活菌数，可采用法；为保证能在固体培育基上取得单个菌落，接种前，需取1 mL该菌液停顿处置。解析(1)依照题干信息剖析，某团队在养分红分一样的含醋酸盐的培育液中分不接种CV101菌株和CV103菌株，因而该培育基属于液体培育基，有利于菌种的扩展培育；从功用上看其属于选择培育基。(2)据图剖析可知，在一定时辰 内，CV101菌株在该培育基中数量继续增多，而CV103菌株的数量增加且维持在较低水平，阐明CV101菌

22、株能以醋酸盐为碳源，因而CV101菌株是更习惯 醋酸盐培育基环境的菌株。(3)常用的微生物接种办法有平板划线法和稀释涂布平板法，其中后者能够 用于菌种的计数；为保证能在固体培育基上取得单个菌落，接种前，需取1 mL该菌液停顿梯度稀释处置。答案(1)液体扩展培育选择(2)CV101菌株在一定时辰 内，CV101菌株在该培育基中数量继续增多，而CV103菌株的数量增加且维持在较低水平CV101菌株能以醋酸盐为碳源(3)稀释涂布平板梯度稀释3.(2018开封市高三定位考试)烧伤病人容易感染绿脓杆菌，惹起化脓性感染。比阿培南、美罗培南、头孢菌素和碳青霉烯类抗生素全然 上 特不 经典的抗绿脓杆菌的药物。

23、临床运用时，有时需求做细菌耐药实验。实验时，从病人身上猎取 大批样本，按以下一定的实验步骤操作，以确定病人体内的绿脓杆菌对不同抗生素的敏理性。(1)猎取 绿脓杆菌单菌落配制培育基。要紧步骤是计算称量溶化分装倒平板。图2所示接种办法为法，这种办法的要紧目的是使接种物。图1的操作中，第一次划线前灼烧接种环的目的是避免杂菌净化，第二次及之后的几次划线前灼烧接种环的目的是。在图2所示操作前，需求随机取假定干灭菌后的空白平板先行培育一段时辰 ，如此 做的目的是。(2)检测绿脓杆菌对不同抗生素的敏感度绿脓杆菌对不同抗生素的敏感度的对比、对照实验后果如图3所示：在恒温箱培育3天后，培育基上有绿脓杆菌繁殖，且

24、除浸有无菌水的圆纸片外，其他浸有美罗培南、比阿培南、头孢菌素或碳青霉烯类抗生素的圆纸片四周都出现了抑菌环。假定你是大夫，建议患者最好选用抗生素，推断 的理由是_。(3)菌种保藏将不离纯化后的菌株接种到上，在适合条件下培育。当菌落长成后，将试管置于4 冰箱中保藏待用。(4)常采用法统计活菌数目直截了当 从静置的培育液中取样计数的做法是错误的，正确的操作是_。答案(1)调pH和灭菌平板划线逐渐稀释(以便取得单个菌落)杀死上次划线后接种环上残留的菌种(使下一次划线时，接种环上的菌种直截了当 来源于上次划线的末端)检测培育基平板灭菌能否合格(2)美罗培南抑菌圈最大，阐明对绿脓杆菌的杀伤效果最好(3)固

25、体歪 面培育基(4)稀释涂布平板法将培育液摇匀后取样计数4.(2019焦作市新高三定位考试)某环保部门为了检测饮用水能否被大肠杆菌净化，停顿了相关实验。如图是检测大肠杆菌的流程，请回答以下征询 题：(1)培育大肠杆菌的培育基普通除含有碳源、氮源外，还要有微生物生长所需求的；对培育基常采用法灭菌；培育基宜将pH调理至。(2)最常用的两种接种办法是和，在培育进程中需求随机取假定干灭菌后的空平板先行培育一段时辰 ，如此 做的目的是_。(3)假定用图示办法统计大肠杆菌数量，那么实际上统计值比实践值。(4)国度生活饮用水卫生规范规则：接种1 mL水样在牛肉膏蛋白胨琼脂培育基上，经37 、24 h培育后，

26、所生长出的菌落总数不得大于100。为了了解某种水能否契合饮用水卫生规范，某检测部门取10 mL水样按图示和要求操作，后果如下表：平板1平板2平板3菌落数/个370350380据上表后果推断 ，所取水样测定后果(填“契合或“不契合)饮用水的卫生规范。解析(1)培育基中普通除含有碳源、氮源外，还应含有水和无机盐，微生物培育进程中要留意避免杂菌净化，培育基常用高压蒸汽灭菌法停顿灭菌，培育细菌的培育基宜将pH调至中性或微碱性。(2)常用的纯化微生物的接种办法有平板划线法和稀释涂布平板法，为了检测培育基的配制(灭菌)能否合格，在培育进程中需求随机取假定干灭菌后的空平板先行培育一段时辰 。(3)两个或多个大肠杆菌连在一同时，平板上观看 到的只是一个菌落，因而该办法统计大肠杆菌数量时，实际上统计值比实践值偏低。(4)表格中3个平板的均匀菌落数为367个，那么1 mL水样中的菌落数为36.7个，低于国度规则的规范，因而所取水样契合饮用水的卫生规范。答案(1)水和无机盐高压蒸汽灭菌中性或微碱性(2)平板划线法稀释涂布平板法(两空顺序可颠倒)检测培育基的配制(灭菌)能否合格(3)偏低(或偏小)(4)契合