水发产品中甲醛的快速检测.docx

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1、 1 附件 4水发产品中甲醛的快速检测（征求意见稿）1 范围本方法规定了水发产品及其浸泡液中甲醛的快速检测方法。 本方法适用于银鱼、鱿鱼、牛肚、竹笋等水发产品及其浸泡液中甲醛的快速测定。AHMT法（比色卡法）2 原理样品中的甲醛经提取后，在碱性条件下与4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮杂茂 （AHMT）发生缩合，再被高碘酸钾氧化成6-巯基-S-三氮杂茂4，3-b-S-四氮杂苯的紫红色络合 物，其颜色的深浅在一定范围内与甲醛含量成正相关，通过色阶卡进行目视比色，对样品中甲醛 进行定性判定。3 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。 3.

2、1 试剂 3.1.1 氢氧化钾。 3.1.2 盐酸。 3.1.3 亚铁氰化钾。 3.1.4 乙酸锌。 3.1.5 冰乙酸。 3.1.6 乙二胺四乙酸二钠。 3.1.7 高碘酸钾。3.1.8 4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮杂茂 （AHMT）。 3.1.9 氢氧化钾溶液（5mol/L）：称取 280.5g 氢氧化钾（3.1.1），用水溶解并定容至 1000mL，混匀。 3.1.10 氢氧化钾溶液（0.2mol/L）：称取 11.22g 氢氧化钾（3.1.1），用水溶解并定容至 1000mL，混匀。 3.1.11 盐酸溶液（0.5mol/L）：量取 41mL 盐酸（3.1.2），用水

3、稀释并定容至 1000mL，混匀。3.1.12 亚铁氰化钾溶液（106g/L）：称取 10.6g 亚铁氰化钾（3.1.3），用水溶解并定容至 100mL，混匀。 3.1.13 乙酸锌溶液（220g/L）：称取 22g 乙酸锌（3.1.4），加入 3mL 冰乙酸（3.1.5）溶解， 用水稀释并定容至 100mL，混匀。 3.1.14 乙二胺四乙酸二钠溶液（100g/L）：称取 10g 乙二胺四乙酸二钠（3.1.6），用 5mol/L 氢氧化钾溶液（3.1.9）溶解，并定容至 100mL，混匀。3.1.15 AHMT 溶液（5g/L）：称取 0.5g 4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮

4、杂茂（3.1.8），用 2 0.5mol/L 盐酸溶液（3.1.11）溶解，并定容至 100mL，混匀后置于棕色瓶中，有效期 6 个月。 3.1.16 高碘酸钾溶液（15g/L）：称取 1.5g 高碘酸钾（3.1.7），用 0.2mol/L 氢氧化钾溶液 （3.1.9）溶解，并定容至 100mL，混匀。 3.1.17 甲醛标准品溶液（100g/mL）。 3.2 参考物质 甲醛参考物质的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子量见表 1。表 1 甲醛参考物质的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子量中文名称英文名称CAS 登录号分子式相对分子量甲醛Formaldehyd

5、e50-00-0HCHO30.033.3 标准溶液配制 甲醛标准工作液（10g/mL）：精密量取甲醛标准品溶液（100g/mL）（3.1.17）1mL，置 于10mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，制成浓度为10g/mL的甲醛标准工作液，临用新制。3.4 材料 3.4.1 甲醛快速检测试剂盒（AHMT 法-比色卡法）：适用基质为水发产品及其浸泡液，需在阴 凉、干燥、避光条件下保存。 3.4.2 滤纸：中速定性滤纸。4 仪器和设备4.1 移液器：200L，1mL，5mL。 4.2 涡旋混合器。 4.3 电子天平或手持式天平：感量为 0.01g。 4.4 离心机：转速4000r/min。 4.5

6、环境条件：温度 1535，湿度80%。5 分析步骤5.1 试样制备 取适量有代表性样品的可食部分或浸泡液，固体样品剪碎混匀，液体样品需充分混匀。 5.2 试样的提取 准确称取试样1g（精确至0.01g）或吸取试样1mL，置于15mL离心管中，加水定容至10mL， 涡旋提取1min，静置5min，取上清液作为提取液（如上清液浑浊，加入1mL亚铁氰化钾溶液 （3.1.12）和1mL乙酸锌溶液（3.1.13），涡旋混匀，4000r/min离心5min或滤纸（3.4.2）过滤，取 上清液或滤液作为提取液）。 5.3 测定步骤 准确移取提取液2mL于5mL离心管中，加入0.4mL乙二胺四乙酸二钠溶液（3

7、.1.14）和0.4mL AHMT溶液（3.1.15），涡旋混匀后静置10min，再加入0.1mL高碘酸钾溶液（3.1.16），涡旋混 匀后静置5min，立即与标准色阶卡目视比色，10min内判读结果。进行平行试验，两次测定结果 应一致，即显色结果无肉眼可辨识差异。 5.4 质控试验 每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。用色阶卡和质控试验同时对检测结果进行控 制。 5.4.1 空白试验 3 称取空白样品，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。 5.4.2 加标质控试验 加标质控样品：准确称取空白试样1g（精确至0.01g），置于15mL离心管中，加入0.5mL甲 醛标准工作液（10g/m

8、L）（3.3），使样品中甲醛含量为5mg/kg。 加标质控样品按5.2和5.3步骤与样品同法操作。6 结果判定要求观察检测管中样液颜色，与标准色阶卡比较判读样品中甲醛的含量。颜色浅于检出限 （5mg/kg）则为阴性样品；颜色接近或深于5mg/kg则为阳性样品。色阶卡见图1。图1 甲醛标准色阶卡质控试验要求：空白试验测定结果应为阴性，质控样品试验测定结果应在其标示量值允差范 围内，加标质控试验测定结果应与加标量相符。7 结论由于色阶卡目视判读存在一定误差，为尽量避免出现假阴性结果，读数时遵循就高不就低的 原则。当测定结果为阳性时，应对结果进行确证。8 性能指标8.1 检测限：5mg/kg 或 5

9、mg/L。 8.2 灵敏度：灵敏度应95%。 8.3 特异性：特异性应85%。 8.4 假阴性率：假阴性率应5%。 8.5 假阳性率：假阳性率应15%。注：性能指标计算方法见附录 A。AHMT法（分光光度法）9 原理样品中的甲醛经提取后，在碱性条件下与4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮杂茂 （AHMT）发生缩合，再被高碘酸钾氧化成6-巯基-S-三氮杂茂4，3-b-S-四氮杂苯的紫红色络合 物，其颜色的深浅在一定范围内与甲醛含量成正相关，用分光光度计在550nm处测定吸光度值， 与标准系列比较定量，得到样品中甲醛的含量。甲醛标准比色卡（mg/kg 或 mg/L）0 5 10 20 5

10、0 100 200 4 10 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。 10.1 试剂 同 3.1。 10.2 参考物质 同3.2。 10.3 标准溶液配制 同3.3。 10.4 材料 10.4.1 甲醛快速检测试剂盒（AHMT 法-分光光度法）：适用基质为水发产品及其浸泡液，需 在阴凉、干燥、避光条件下保存。 10.4.2 滤纸：中速定性滤纸。11 仪器和设备11.1 移液器：200L，1mL，5mL。 11.2 涡旋混合器。 11.3 电子天平或手持式天平：感量为 0.01g。 11.4 离心机：转速4000r/min。 11.5 分光光度计或

11、相应商品化测定仪。 11.6 环境条件：温度 1535，湿度80%。12 分析步骤12.1 试样制备 同5.1。 12.2 试样的提取 同5.2。 12.3 测定步骤 准确吸取甲醛标准工作液（10mg/L）0mL、0.1mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL分别置于5mL带刻度的具塞刻度试管中，加水定容至2mL，配制成浓度分别为 0mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、3mg/L、4mg/L、5mg/L的甲醛标准系列工作液。准确移取 13.2制备的提取液2mL置于5mL离心管中，加入0.4mL乙二胺四乙酸二钠溶液和0.4mL AHMT溶液， 涡旋

12、混匀后静置10min，再加入0.1mL高碘酸钾溶液，涡旋混匀后静置5min，将显示溶液置于1 cm比色皿中，以甲醛标准系列工作液的零点为参比调零，于550 nm测定吸光度值。 12.4 质控试验 每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。 12.4.1 空白试验 称取空白样品，按照12.2和12.3步骤与样品同法操作。 12.4.2 加标质控试验 加标质控样品：准确称取空白试样1g（精确至0.01g），置于15mL离心管中，加入0.5mL甲 醛标准工作液（10g/mL）（3.3），使样品中甲醛含量为5mg/kg。 加标质控样品按12.2和12.3步骤与样品同法操作。13 标准曲线的制作 5 以

13、标准系列工作液的浓度为横坐标，以其吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。14 分析结果的表述14.1 结果计算试样中甲醛的含量按式（1）计算：（1）式中：X试样中甲醛的含量，单位为毫克每千克或毫克每升（mg/kg 或 mg/L）；由标准曲线得到的试样提取液中甲醛的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；0由标准曲线得到的空白提取液中甲醛的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V试样定容体积，单位为毫升（mL）；m试样的取样量，单位为克或毫升（g 或 mL）；1000单位换算系数。计算结果保留两位有效数字。 14.2 结果判定 当测定结果5mg/kg或mg/L时，判定为阳性，阳性结果的试样需要重复检验2次以上。

14、 14.3 质量控制要求 空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果回收率应60%。15 结论当测定结果为阳性时，应对结果进行确证。16 性能指标16.1 检测限：5mg/kg 或 5mg/L。 16.2 灵敏度：灵敏度应95%。 16.3 特异性：特异性应85%。 16.4 假阴性率：假阴性率应5%。 16.5 假阳性率：假阳性率应15%。注：性能指标计算方法见附录 A。乙酰丙酮法（分光光度法）17 原理样品中的甲醛经提取后，在沸水浴条件下与乙酰丙酮发生反应，生成黄色物质，其颜色的深 浅在一定范围内与甲醛含量成正相关，用分光光度计在413nm处测定吸光度值，与标准系列比较 定量，得到样品

15、中甲醛的含量。18 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。 18.1 试剂 18.1.1 无水乙酸钠。10001000)(0 mVX 6 18.1.2 乙酰丙酮。 18.1.3 冰乙酸。 18.1.4 乙酰丙酮溶液：称取 25.0g 无水乙酸钠（18.1.1）溶于适量水中，移入 100mL 容量瓶中， 加 0.4 mL 乙酰丙酮和 3.0 mL 冰乙酸，加水定容至刻度，混匀，移至棕色试剂瓶中，28保 存，有效期 1 个月。 18.1.5 甲醛标准品溶液（100g/mL）。 18.2 参考物质 同3.2。 18.3 标准溶液配制 同3.3。 18.

16、4 材料 18.4.1 甲醛快速检测试剂盒（乙酰丙酮法-分光光度法）：适用基质为水发产品及其浸泡液， 需在阴凉、干燥、避光条件下保存。 18.4.2 滤纸：中速定性滤纸。19 仪器和设备19.1 移液器：200L，1mL，5mL。 19.2 涡旋混合器。 19.3 电子天平或手持式天平：感量为 0.01g。 19.4 离心机：转速4000r/min。 19.5 分光光度计或相应商品化测定仪。 19.6 环境条件：温度 1535，湿度80%。20 分析步骤20.1 试样制备 同5.1。 20.2 试样的提取 同5.2。 20.3 测定步骤 准确吸取甲醛标准工作液（10mg/L）0mL、0.1mL

17、、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL分别置于5mL带刻度的具塞刻度试管中，加水定容至2mL，配制成浓度分别为 0mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、3mg/L、4mg/L、5mg/L的甲醛标准系列工作液。准确移取 20.2制备的提取液2mL于5mL离心管中，加入0.2mL 乙酰丙酮溶液，混匀后沸水浴5min，取出冷 却至室温，将显示溶液置于1 cm比色皿中，以甲醛标准系列工作液的零点为参比调零，于413 nm 测定吸光度值。 20.4 质控试验 每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。 20.4.1 空白试验 称取空白样品，按照20.2和20.

18、3步骤与样品同法操作。 20.4.2 加标质控试验 加标质控样品：准确称取空白试样1g（精确至0.01g），置于15mL离心管中，加入0.5mL甲 醛标准工作液（10g/mL）（3.3），使样品中甲醛含量为5mg/kg。 加标质控样品按20.2和20.3步骤与样品同法操作。 7 21 标准曲线的制作同13。22 分析结果的表述22.1 结果计算同 14.1。 22.2 结果判定 同14.2。 22.3 质量控制要求 同14.3。23 结论当测定结果为阳性时，应对结果进行确证。24 性能指标24.1 检测限：5mg/kg 或 5mg/L。 24.2 灵敏度：灵敏度应95%。 24.3 特异性：特

19、异性应85%。 24.4 假阴性率：假阴性率应5%。 24.5 假阳性率：假阳性率应15%。注：性能指标计算方法见附录A。25 其他本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不作 限定。方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定 的各项性能指标。 本方法参比标准为SC/T 3025-2006水产品中甲醛的测定 液相色谱法或其他现行有效的 甲醛检测标准。 8 附录 A定性方法性能计算表表 A.1 性能指标计算方法检测结果b 样品情况a 阳性阴性总数阳性cN11N12N1.=N11+N12阴性N21N22N2.=N21+N22总

20、数N.1=N11+N12N.2=N21+N22N=N1.+N2.或 N.1+N.2显著性差异(2)2=(|N12-N21|-1)2/(N12+N21), 自由度（df）=1灵敏度(p+，%)p+=N11/N1.特异性(p-，%)p-=N22/N2.假阴性率(pf-，%)pf-=N12/N1.=100-灵敏度假阳性率(pf+，%)pf+=N21/N2.=100-特异性相对准确度，%d(N11+N22)/(N1.+N2.)注：a由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果；b由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。用于确认方法时，结果5mg/kg 时，判定为阳性（仅用于计算性能指标）；c本方法规定：用于计算灵敏度和假阴性率的阳性样品，由参比方法检验得到的结果回收率应60%。N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：N11 表示第一行， 第一列，N1.表示所有的第一行，N.2 表示所有的第二列；N12 表示第一行，第二列。d为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。本方法负责起草单位：南京工业大学（国家轻工业食品质量监督检测南京站）。 验证单位：南京市产品质量监督检验院、厦门市食品药品质量检验、江西省药品检验检测研究院 研究院。 主要起草人：熊晓辉、汪开银、聂小林、肖有玉、骆和东、章红。