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1、血清碱性磷酸酶血清碱性磷酸酶 ALPALP 磷酸对硝基苯酚法测定磷酸对硝基苯酚法测定1 1. . 实实验验原原理理碱性磷酸酶的活性由在pH 值为 10.4，2-氨基 -2 甲基-1-丙醇（ AMP）存在的情况下测量p-硝基 -磷酸苯酯（pNPP）的转换速率决定。ALPpNPP + AMP -pNP+AMP-PO4在 410/480nm 测定 pNP 的生成速率，它与标本中ALP 的活性成正比。2 2. . 标标本本采采集集与与处处理理：2.1 病人准备：无特殊要求。2.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。2.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。避免使用含 EDTA 或草酸
2、盐的血浆。3 3. . 标标本本存存放放 ：23 天内的活性损失： 1525保存：10%；标本稳定性： 48保存稳定 7 天； -20保存至少可稳定 2 个月 标本。如果分析延迟8 小时以上，最好把血清冷藏。冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。4 4. . 标标本本运运输输： 常温条件下运输5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准： 细菌污染的不能做测定。6 6. . 实实验验材材料料 ：6.1 上海奥林巴斯 ALP 测定试剂盒 试剂 1 试剂 2 6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。6.1.2 试剂稳定性与贮存：原试剂避光保存于28，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.3
3、变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。6.1.4 注意事项：碱性磷酸酶试剂中含叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜。反应过程中产生的对硝基苯酚有毒性，切勿吸入、吞食、接触皮肤或粘膜。若反应液与皮肤或粘膜接触，请速用水冲洗。6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。7 7. . 仪仪器器 ：奥林巴斯 AU2700 生化分析仪8 8. . 操操作作步步骤骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700 生化分析仪项目测定参数 .SOP 文件8.2 仪器操作
4、步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700 生化分析仪操作规程 .SOP 文件9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以2S 为质控警告限，3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP 文件。1 11 1. . 计计算算方方法法： 以 TruCal U 复合校准品 ALP 校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行ALP 活力检测，可以直接使用A/min 均值乘以计算因子得到结果，但是这样
5、所得结果的可靠性不如使用校准品。计算ALP 活力的计算因子见下：A A/ /m mi in n因因子子 = = A AL LP P 活活力力 U U/ /L L 底物起始的反应（ 37） 样品起始的反应（37）05 nm 3433 27571 12 2. . 参参考考值值范范围围成年人4男性 2050 岁 53128U/L男性 60 岁以上 56119U/L女性 2050 岁 42 98U/L女性 60 岁以上 53141U/L儿童5男性 女性130 天 75319U/L 48406U/L1 个月 1 岁 82383U/L 124341U/L1 岁 3 岁 104345U/L 108317U/
6、L4 岁 6 岁 93309U/L 96297U/L7 岁 9 岁 86315U/L 69325U/L10 岁 12 岁 42362U/L 51332U/L13 岁 15 岁 74390U/L 50162U/L16 岁 18 岁 52171U/L 47119U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。1 13 3. . 临临床床意意义义 1 1, ,2 2 ：碱性磷酸酶（ ALP）是一种在碱性条件下具有较强活性的水解酶，并以多种形态存在于血液中，其大多来自骨骼的成骨细胞和肝脏，也来源于其他一些组织例如肾脏、胎盘、肠、睾丸、胸腺、肺及肿
7、瘤。在儿童生长期和妊娠期，血清中ALP 生理性活性增高，骨疾病与肝胆疾病等引起ALP 病理性活性增高。在肝胆疾病中引起ALP 活性增高的原因包括胆道梗阻，例如因胆结石、肿瘤或炎症造成的胆汁郁积。在传染性肝炎中也可发现ALP 活性增高。在骨疾病中， Paget 病、骨软化症（佝偻病） 、骨转移瘤和甲状旁腺功能亢进等，使成骨活性升高引起ALP 活力增高。1 14 4. . 操操作作性性能能14.1 线性范围 2850U/L14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS 推荐的典型方法5，AU2700 批内不精密度小于5%，总不精密度小于10%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS 的规
8、则7。批内精密度n=20x(U/L)s(U/L)CV(%)批间精密度n=20x(U/L)s(U/L)CV(%)样品 197.81.151.18样品 11031.061.02样品 21891.820.96样品 21881.040.55样品 32351.680.72样品 32361.640.7014.3 方法学比较：本公司试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对 78 个样品进行 ALP 活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.00U/L；r =0.999。14.4 灵敏度：本试剂的检测限为2U/L。14.5 病人结果可报告范围： 2850U/L1 15 5. .
9、超超出出范范围围结结果果处处理理： 本法对 ALP 活力检测的最大A/min 在 405nm 为 0.25。当样品测定值超过上限时，应将样品用 9 g/L 氯化钠溶液作 1+9 稀释，重新测定，结果乘以 10。1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理1 17 7. . 方方法法局局限限性性17.1 本法对 ALP 活力检测的最大A/min 在 405nm 为0.25。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L 氯化钠溶液作 1+9 稀释，重新测定，结果乘以10。17.2 干扰物质 ：当样品中抗坏血酸浓度 1704mol/L，胆红素浓度 684mol/L，血红蛋白浓度 2.00g/L
10、，甘油三酯浓度 22.6mmol/L 时没有观察到干扰1 18 8. . 补补救救措措施施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。1 19 9. . 参参考考文文献献1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt： TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p. 36-46.2. Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In： Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz textbook of cl
11、inical chemistry. 3rd ed. Philadelphia： W. B. Saunders Company; 1999. p.617-721.3. Tietz NW, Rinker D, Shaw LM. IFCC method for alkaline phosphatase. J Clin Chem Clin Biochem 1983; 21： 731-48.4. Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 3rd ed. Philadelphia： W. B. Saunders Company; 1999. p. 1829.5. Soldin JS, Hicks JM. Pediatric reference ranges. Washington： AACC Press, 1996. p. 5.2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。