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1、卫生理化检验卫生理化检验1三氮指标三氮指标(zhbio)测定测定 重庆医科大学公共卫生学院(xuyun) 代兴碧 2011-05-16第一页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验2三氮指标三氮指标(zhbio)测测定定 主要内容主要内容 一、概一、概 述述 (一一)三氮指标三氮指标(zhbio)的概念的概念 (二二)卫生学意义卫生学意义 (三）三氮指标三）三氮指标(zhbio)的一般情况的一般情况 （四）三氮物质对人体健康的影响及卫（四）三氮物质对人体健康的影响及卫生标准生标准 （五）样品的采集和保存（五）样品的采集和保存 （六）测定方法（六）测定方法 二、水中亚硝酸盐氮的测定二、水中亚硝酸盐氮
2、的测定第二页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验3重点内容重点内容(nirng)：水中亚硝酸盐氮的测定水中亚硝酸盐氮的测定第三页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验4三氮指标三氮指标(zhbio)测定测定一、概一、概 述述 (一一)三氮指标的概念三氮指标的概念(ginin)1.氨氮氨氮(NH3N，ammonia nitrogen)氨氮（氨氮（ NH3-N）即以氨（）即以氨（ NH3 ）形）形式存在的氮（式存在的氮（N）。测定的是氨）。测定的是氨（ NH3），但测定结果以氮的量），但测定结果以氮的量表示出来表示出来(N, mg/L) 。第四页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验5三氮指标三氮指标
3、(zhbio)测测定定2.亚硝酸盐氮亚硝酸盐氮(NO2N，nitrite nitrogen)亚硝酸盐氮（亚硝酸盐氮（NO2-N）即以亚硝酸盐）即以亚硝酸盐（NO2）形式存在的氮（）形式存在的氮（N）。测定）。测定(cdng)的是亚硝酸盐（的是亚硝酸盐（NO2），但测），但测定定(cdng)结果以氮的量表示出来结果以氮的量表示出来(N, mg/L) 。3.硝酸盐氮硝酸盐氮(NO3N，nitrate nitrogen)硝酸盐氮（硝酸盐氮（NO3-N）即以硝酸盐（）即以硝酸盐（NO3）形式存在的氮（）形式存在的氮（N）。测定）。测定(cdng)的是硝酸盐（的是硝酸盐（NO3），但测定），但测定(cd
4、ng)结果以氮的量表示出来结果以氮的量表示出来(N, mg/L) 。第五页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验6三氮指标三氮指标(zhbio)测测定定（二）卫生学意义（二）卫生学意义 有机物中含氮有机物最不稳定，最初进有机物中含氮有机物最不稳定，最初进入水中时，多是复杂的有机氮形式，例入水中时，多是复杂的有机氮形式，例如，各种蛋白质等。受微生物作用后，如，各种蛋白质等。受微生物作用后，逐渐分解成多肽逐渐分解成多肽(du ti)(du ti)、氨基酸、氨、氨基酸、氨（NH4+NH4+）、亚硝酸盐（）、亚硝酸盐（NO2NO2）、硝酸盐）、硝酸盐（ NO3 NO3 ）。）。蛋白质蛋白质多肽多肽(du
5、 ti)(du ti)氨基酸氨基酸氨氨亚亚硝酸盐硝酸盐硝酸盐硝酸盐尿素尿素氨氨亚硝酸盐亚硝酸盐硝酸盐硝酸盐 这样一个过程是有机物无机化的过程，这样一个过程是有机物无机化的过程，也是河流自净的过程。在这个过程中，也是河流自净的过程。在这个过程中，如果由于人畜粪便污染而存在致病微生如果由于人畜粪便污染而存在致病微生物，也能逐渐消除。所以，测定各类含物，也能逐渐消除。所以，测定各类含氮化合物可以了解水源被含氮有机物污氮化合物可以了解水源被含氮有机物污染的情况，并协作了解水源自净的情况染的情况，并协作了解水源自净的情况和致病微生物是否消除的情况。和致病微生物是否消除的情况。第六页，共56页。卫生理化检
6、验卫生理化检验7三氮指标三氮指标(zhbio)测测定定用三氮指标用三氮指标(zhbio)(zhbio)进行水质卫生学评价进行水质卫生学评价可参考下表：可参考下表：第七页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验8三氮指标三氮指标(zhbio)测定测定表表 三种含氮化合物在水中出现的意义三种含氮化合物在水中出现的意义 NH3-N NO2-N NO3-N 意意 义义 +0.050.5 - 0. 01少少 - 1.0少少 表示水新近被污染表示水新近被污染 + 0.050.5 + 0. 010.3 - 1.0少少 表示新近被污染，分解正在进行表示新近被污染，分解正在进行 + 0.050.5 + 0. 010
7、.3 + 1.0多多 以前被污染，已开始分解并仍有新污染以前被污染，已开始分解并仍有新污染 - 0.05少少 + 0. 010.3 - 1.0少少 水中污染物已分解，趋向自净水中污染物已分解，趋向自净 + 0.050.5 - 0. 01少少 + 1.0多多 污染物分解已完成，现又有污染污染物分解已完成，现又有污染 - 0.05少少 + 0. 010.3 + 1.0多多 污染物已分解，但未完全自净污染物已分解，但未完全自净, 或是硝酸盐还原成还原成亚硝酸盐或是硝酸盐还原成还原成亚硝酸盐 - 0.05少少 - 0. 01少少 + 1.0多多 水中污染物都已分解达到了净化水中污染物都已分解达到了净化
8、 - 0.05少少 - 0. 01少少 - 1.0少少清洁水清洁水注：注：“+”表示出现。表示出现。“-”表示没有出现。表示没有出现。（二）卫生学意义（二）卫生学意义(yy)第八页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验9三氮指标三氮指标(zhbio)测定测定 ( (三）三氮指标的一般情况三）三氮指标的一般情况 1.1.氨氮氨氮(NH3N(NH3N，ammonia nitrogen)ammonia nitrogen) 氨氮氨氮(NH3N(NH3N，ammonia nitrogen)ammonia nitrogen)以游离氨以游离氨(NH3(NH3，也称非离子氨，也称非离子氨) )或铵盐或铵盐(NH
9、4+)(NH4+)的形式的形式(xngsh)(xngsh)普遍存在于地下水及地面水中，普遍存在于地下水及地面水中，其存在形式其存在形式(xngsh)(xngsh)取决于水体的酸碱度。取决于水体的酸碱度。未受污染的地下水中氨氮含量一般低于未受污染的地下水中氨氮含量一般低于L L，地表水中氨氮含量比地下水高。用氯胺消毒地表水中氨氮含量比地下水高。用氯胺消毒的饮水可产生微量氨氮。由于生活污水中含的饮水可产生微量氨氮。由于生活污水中含氮有机物受微生物作用可产生大量氨氮，人氮有机物受微生物作用可产生大量氨氮，人畜粪便和某些工业废水中尿素和氨的含量很畜粪便和某些工业废水中尿素和氨的含量很高，所以水体受生活
10、污水、人畜粪便、以及高，所以水体受生活污水、人畜粪便、以及某些工业废水污染后，氨氮浓度将明显增加。某些工业废水污染后，氨氮浓度将明显增加。除此之外水中的亚硝酸盐在氧气不足的条件除此之外水中的亚硝酸盐在氧气不足的条件下亦可受微生物作用还原成氨，水中尿素也下亦可受微生物作用还原成氨，水中尿素也可转变成氨氮。可转变成氨氮。第九页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验10三氮指标三氮指标(zhbio)测测定定2.亚硝酸盐氮亚硝酸盐氮(NO2N，nitrite nitrogen)亚硝酸盐氮是含氮有机物受细菌作用分解亚硝酸盐氮是含氮有机物受细菌作用分解(fnji)的中间的中间产物，在水中不稳定，在氧和微生物
11、的作用下易被氧产物，在水中不稳定，在氧和微生物的作用下易被氧化成硝酸盐，在缺氧条件下也可被还原为氨。水中化成硝酸盐，在缺氧条件下也可被还原为氨。水中N02N的来源主要为生活污水中含氮有机物的分的来源主要为生活污水中含氮有机物的分解解(fnji)和化肥、酸洗等工业废水，此外农田排水也和化肥、酸洗等工业废水，此外农田排水也可引入较高浓度的可引入较高浓度的NO2。未受污染地面水中亚硝酸。未受污染地面水中亚硝酸盐氮一般低于盐氮一般低于L，某些地下水可能会由于地层结构，某些地下水可能会由于地层结构的还原作用出现较高浓度的亚硝酸盐。的还原作用出现较高浓度的亚硝酸盐。第十页，共56页。卫生理化检验卫生理化检
12、验11三氮指标三氮指标(zhbio)测定测定3.硝酸盐氮硝酸盐氮(NO3N，nitrate nitrogen)硝酸盐氮是含氮有机化合物的在水体中的硝酸盐氮是含氮有机化合物的在水体中的最终氧化产物。环境水体中硝酸盐的污最终氧化产物。环境水体中硝酸盐的污染来源除硝酸盐类化肥使用和生活污水、染来源除硝酸盐类化肥使用和生活污水、生活垃圾、生产含氮废弃物与人畜粪便生活垃圾、生产含氮废弃物与人畜粪便等的自然降解过程外，空气中氧化氮污等的自然降解过程外，空气中氧化氮污染物经降水淋溶后形成染物经降水淋溶后形成(xngchng)的硝的硝酸盐也是重要的污染来源。地表水中硝酸盐也是重要的污染来源。地表水中硝酸盐氮含
13、量一般较低，但某些地下水中酸盐氮含量一般较低，但某些地下水中含量很高。含量很高。第十一页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验12三氮指标三氮指标(zhbio)测定测定（四）三氮物质对人体健康的影响及卫生标准（四）三氮物质对人体健康的影响及卫生标准1. 氨氮氨氮对鱼类等水生生物有毒害作用。我国渔业水质对鱼类等水生生物有毒害作用。我国渔业水质标 准 、 地 表 水 环 境 质 量 标 准 规 定标 准 、 地 表 水 环 境 质 量 标 准 规 定(gudng)I类水中游离氨的浓度不得超过类水中游离氨的浓度不得超过L,类水不得超过。类水不得超过。对人体健康的影响较小，我国生活饮用水卫生对人体健康的
14、影响较小，我国生活饮用水卫生规范规范(2001)未规定未规定(gudng)限量指标，世界卫限量指标，世界卫生组织和一些发达国家规定生组织和一些发达国家规定(gudng)饮用水中氨饮用水中氨氮含量不得超过氮含量不得超过L。第十二页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验13三氮指标三氮指标(zhbio)测测定定2.亚硝酸盐亚硝酸盐可将低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，使之失可将低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，使之失去去(shq)输送氧的能力。输送氧的能力。在酸性介质中亚硝酸盐可与二级胺类形成致癌物在酸性介质中亚硝酸盐可与二级胺类形成致癌物亚硝胺。反应式如下：亚硝胺。反应式如下：R1R2NH+ HONO
15、R1R2N-NO+ H2O（仲胺）（仲胺） （亚硝酸）（亚硝酸） 亚硝胺亚硝胺第十三页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验14三氮指标三氮指标(zhbio)测定测定一般饮水中亚硝酸盐氮含量很低，不会对人体健康一般饮水中亚硝酸盐氮含量很低，不会对人体健康产生产生(chnshng)影响。某些地下水可能会由于地影响。某些地下水可能会由于地层结构的还原作用出现较高浓度的亚硝酸盐。层结构的还原作用出现较高浓度的亚硝酸盐。我国生活饮用水卫生规范我国生活饮用水卫生规范(2001)未对未对NO2N作出限量要求。作出限量要求。我国地面水环境质量标准规定我国地面水环境质量标准规定I类水中亚硝酸类水中亚硝酸盐氮含量
16、盐氮含量L，类水类水L；类水类水L；V类水类水L。第十四页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验15三氮指标三氮指标(zhbio)测定测定3. 3. 硝酸盐氮硝酸盐氮对人健康的影响与亚硝酸盐一样，因为进对人健康的影响与亚硝酸盐一样，因为进入体内的硝酸盐也可被还原为亚硝酸盐。入体内的硝酸盐也可被还原为亚硝酸盐。亚硝酸盐与人体血液作用，形成高铁血亚硝酸盐与人体血液作用，形成高铁血红蛋白，从而使血液失去红蛋白，从而使血液失去(shq)(shq)携氧功携氧功能，另外可与二级胺类形成致癌物亚硝能，另外可与二级胺类形成致癌物亚硝胺。一般饮水中硝酸盐氮均可检出，我胺。一般饮水中硝酸盐氮均可检出，我国生活饮用水
17、卫生规范国生活饮用水卫生规范(2001)(2001)规定规定其含量不得超过其含量不得超过20mg20mgL L。第十五页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验16三氮指标三氮指标(zhbio)测定测定（五）样品（五）样品(yngpn)的采集和保存的采集和保存1.用于氨氮检测的水样需用聚乙烯瓶或玻用于氨氮检测的水样需用聚乙烯瓶或玻璃瓶采集。璃瓶采集。水中氨氮的稳定性差，一般要求采样后立水中氨氮的稳定性差，一般要求采样后立即测定。如不能立即测定，须在每升水即测定。如不能立即测定，须在每升水样加入浓硫酸样加入浓硫酸(调调pH2)，于，于4冰箱保存，冰箱保存，酸化样品酸化样品(yngpn)应注意防止空气
18、中氨应注意防止空气中氨的污染。的污染。第十六页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验17三氮指标三氮指标(zhbio)测测定定2.2.亚硝酸盐氮的水样采集亚硝酸盐氮的水样采集可用玻璃瓶或聚乙烯塑料瓶，采样后应可用玻璃瓶或聚乙烯塑料瓶，采样后应尽快测定，以避免细菌将亚硝酸盐还原尽快测定，以避免细菌将亚硝酸盐还原成氨。若不能立即测定，可于每升水样成氨。若不能立即测定，可于每升水样中加入中加入40mg40mg氯化汞抑菌，并置氯化汞抑菌，并置44冰箱冰箱(bngxing)(bngxing)闭光保存，可稳定闭光保存，可稳定12d12d。第十七页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验18三氮指标三氮指标(zh
19、bio)测测定定3.用于硝酸盐氮测定的水样用于硝酸盐氮测定的水样需用玻璃瓶或聚乙烯瓶采集，采样后应需用玻璃瓶或聚乙烯瓶采集，采样后应尽快测定。如不能及时测定，为了抑止尽快测定。如不能及时测定，为了抑止微生物活动对氮平衡的影响，需于每升微生物活动对氮平衡的影响，需于每升水样中加入浓硫酸，并于水样中加入浓硫酸，并于04保存保存(bocn)，24h内完成测定。内完成测定。第十八页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验19三氮指标三氮指标(zhbio)测定测定 （六）测定方法（六）测定方法 1.水中氨氮测定方法较多。纳氏试剂光度水中氨氮测定方法较多。纳氏试剂光度法是最经典的测定方法，该法操作简便、法是最
20、经典的测定方法，该法操作简便、灵敏度较高，适应范围广，但该法需使灵敏度较高，适应范围广，但该法需使用有毒试剂四碘汞钾和强碱，对操作人用有毒试剂四碘汞钾和强碱，对操作人员和环境影响大，现在使用得较多的是员和环境影响大，现在使用得较多的是酚盐光度法和水杨酸光度法。酚盐法也酚盐光度法和水杨酸光度法。酚盐法也是氨氮测定的经典方法，国际标准化组是氨氮测定的经典方法，国际标准化组织织 ( I n t e r n a t i o n a I S t a n d a r d Organization，ISO)和我国已分别将水杨和我国已分别将水杨酸光度法列为推荐方法和标准方法。酸光度法列为推荐方法和标准方法。
21、此外，水中氨氮测定方法还有氨电极此外，水中氨氮测定方法还有氨电极(dinj)法、离子色谱法、蒸馏一滴定法法、离子色谱法、蒸馏一滴定法和氨氮在线自动检测法等。和氨氮在线自动检测法等。第十九页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验20三氮指标三氮指标(zhbio)测定测定2.水中亚硝酸盐氮的测定方法水中亚硝酸盐氮的测定方法主要有光度法、离子色谱法和示波极谱法等。而主要有光度法、离子色谱法和示波极谱法等。而应用最广泛的是重氮化偶合光度法，该法简便应用最广泛的是重氮化偶合光度法，该法简便快速，灵敏度高，但色度快速，灵敏度高，但色度(s d)和浊度对测定和浊度对测定有干扰。该法是我国水质检验标准方法。有干
22、扰。该法是我国水质检验标准方法。 离子色谱法简便快速，可同时测定包括亚硝酸离子色谱法简便快速，可同时测定包括亚硝酸根、硝酸根、硫酸根、氯离子和氟离子等多种根、硝酸根、硫酸根、氯离子和氟离子等多种阴离子，但需要离子色谱仪，分析成本较高。阴离子，但需要离子色谱仪，分析成本较高。示波极谱法简便快速，灵敏度高，水样色度示波极谱法简便快速，灵敏度高，水样色度(s d)和浊度对测定基本无干扰。和浊度对测定基本无干扰。第二十页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验21三氮指标三氮指标(zhbio)测定测定3.3.水中硝酸盐氮的测定方法有紫外光度水中硝酸盐氮的测定方法有紫外光度法、离子法、离子(lz)(lz)选
23、择性电极法、光度选择性电极法、光度法、离子法、离子(lz)(lz)色谱法和示波极谱法色谱法和示波极谱法等。我国卫生部生活饮用水卫生规等。我国卫生部生活饮用水卫生规范范(2001)(2001)规定的标准检验方法是麝规定的标准检验方法是麝香草酚光度法、镉柱还原法、紫外光香草酚光度法、镉柱还原法、紫外光度法和离子度法和离子(lz)(lz)色谱法。色谱法。第二十一页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验22二、亚硝酸盐氮的测定二、亚硝酸盐氮的测定(cdng) 见见P95 1.原理原理 2.消除干扰消除干扰(gnro) 3. 试剂的配制试剂的配制 4.测定亚硝酸盐氮测定亚硝酸盐氮 5.测定亚硝酸盐氮的有关
24、计算测定亚硝酸盐氮的有关计算第二十二页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验23N-N-（1-1-萘基）萘基）乙烯乙烯(y x)(y x)二胺分光光度法二胺分光光度法 ( (又叫重氮化偶合分光光度法又叫重氮化偶合分光光度法 ) )分光光度法的方法名称一般用显色剂的名称命名分光光度法的方法名称一般用显色剂的名称命名1.1.原理原理在在pHpH值以下，水中亚硝酸盐与对氨基苯磺酰胺发生重值以下，水中亚硝酸盐与对氨基苯磺酰胺发生重氮化反应，再与盐酸氮化反应，再与盐酸N-N-（1-1-萘基）萘基）乙烯二胺（又叫盐乙烯二胺（又叫盐酸萘乙二胺）产生酸萘乙二胺）产生(chnshng)(chnshng)偶合反应，
25、生成紫红色的偶氮染偶合反应，生成紫红色的偶氮染料，料，比色定量。比色定量。第二十三页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验24N-N-（1-1-萘基）萘基）乙烯乙烯(y x)(y x)二胺分光光度二胺分光光度法法 2.消除干扰消除干扰有些金属离子如铁、铅、汞、银等含量较高时，有些金属离子如铁、铅、汞、银等含量较高时，在测定中会产生沉淀，二价铜离子能催化分解重在测定中会产生沉淀，二价铜离子能催化分解重氮盐而产生干扰，必要氮盐而产生干扰，必要(byo)时可加入适量时可加入适量EDTA，使，使其其与上述金属离子形成配合物来消除干扰；若水样与上述金属离子形成配合物来消除干扰；若水样浑浊或色度较大，可加入
26、氢氧化铝悬浮液，利用浑浊或色度较大，可加入氢氧化铝悬浮液，利用混凝沉淀的原理消除干扰。混凝沉淀的原理消除干扰。第二十四页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验25N-N-（1-1-萘基）萘基）乙烯乙烯(y x)(y x)二胺分光光度法二胺分光光度法 3. 试剂试剂（1）实验用水均为无亚硝酸盐水。无亚硝）实验用水均为无亚硝酸盐水。无亚硝酸盐水酸盐水 于纯水中加入少许高锰酸钾晶体，于纯水中加入少许高锰酸钾晶体，使呈红色，再加氢氧化钠，使呈碱性，置于使呈红色，再加氢氧化钠，使呈碱性，置于全玻璃蒸馏器中重蒸馏，弃去全玻璃蒸馏器中重蒸馏，弃去50ml初馏液，初馏液，收集中间收集中间70%部分。部分。（2）
27、0.05mol/L(1/5KMnO4)高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液 称取高锰酸钾，溶于无亚硝酸盐水中，煮沸称取高锰酸钾，溶于无亚硝酸盐水中，煮沸30min，使体积减少至，使体积减少至1L左右左右(zuyu)，放，放置过夜，用置过夜，用G3型玻砂漏斗过滤，滤液贮于型玻砂漏斗过滤，滤液贮于棕色瓶中保存。棕色瓶中保存。（3）（）（1/2Na2C2O4）草酸钠标准溶液）草酸钠标准溶液 称称取经取经105干燥干燥2h的草酸钠的草酸钠3. 3500g，溶于，溶于无亚硝酸盐水中，并定容于无亚硝酸盐水中，并定容于1L容量瓶中。容量瓶中。第二十五页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验26N-N-（1-1-萘基）萘基
28、）乙烯乙烯(y x)(y x)二胺分光光度法二胺分光光度法（4）亚硝酸盐氮标准储备液）亚硝酸盐氮标准储备液 准确称取亚硝准确称取亚硝酸钠酸钠(NaNO2，溶于无亚硝酸盐水中，并稀，溶于无亚硝酸盐水中，并稀释至释至1L，加入氯仿，加入氯仿1ml，其亚硝酸盐氮的浓，其亚硝酸盐氮的浓度为（度为（NO2-N，），）0.25 mg/ml 。（5）亚硝酸盐氮标准应用溶液）亚硝酸盐氮标准应用溶液(rngy) 临用临用前，将上述贮备溶液前，将上述贮备溶液(rngy)用无亚硝酸盐用无亚硝酸盐水稀释成水稀释成1ml含含2-N的标准溶液的标准溶液(rngy)（先稀释成（先稀释成1ml含含2-N的中间溶液的中间溶液(
29、rngy)）。）。（6）对氨基苯磺酰胺溶液）对氨基苯磺酰胺溶液(rngy) 称取对氨称取对氨基苯磺酰胺基苯磺酰胺5g，溶于，溶于350ml 1+6盐酸溶液盐酸溶液(rngy)中，用无亚硝酸盐水稀释至中，用无亚硝酸盐水稀释至500ml，此溶液此溶液(rngy)可稳定数月。可稳定数月。第二十六页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验27N-N-（1-1-萘基）萘基）乙烯乙烯(y x)(y x)二胺分光光度二胺分光光度法法（7）盐酸）盐酸N-（1-萘基）萘基）乙烯二胺溶液乙烯二胺溶液 称取盐酸称取盐酸N-（1-萘基）萘基）乙烯二胺，溶于乙烯二胺，溶于500 ml无亚硝酸盐水中，无亚硝酸盐水中，贮于棕色
30、瓶内，于冰箱内保存，可稳定数周。如变贮于棕色瓶内，于冰箱内保存，可稳定数周。如变为深棕色，则应重配，本试剂有毒，避免与皮肤接为深棕色，则应重配，本试剂有毒，避免与皮肤接触或吸入体内。触或吸入体内。（8）氢氧化铝悬浮液）氢氧化铝悬浮液 称取化学纯硫酸铝钾称取化学纯硫酸铝钾KAl(SO4) 212H2O125g,或硫酸铝铵或硫酸铝铵NH4Al(SO4) 212H2O 125g, 溶于溶于1L无亚硝酸盐水中。加热至无亚硝酸盐水中。加热至60，缓缓，缓缓加入浓氨水加入浓氨水55ml，使成氢氧化铝沉淀。充分搅拌后，使成氢氧化铝沉淀。充分搅拌后静置，弃去上清液，反复用无亚硝酸盐水洗涤沉淀静置，弃去上清液，
31、反复用无亚硝酸盐水洗涤沉淀至倾出液无至倾出液无Cl（用硝酸银检查）为止，最后加入（用硝酸银检查）为止，最后加入无亚硝酸盐水无亚硝酸盐水30ml,使成悬浮液。使用前振荡均匀使成悬浮液。使用前振荡均匀(jnyn)。（9）磷酸）磷酸第二十七页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验28N-N-（1-1-萘基）萘基）乙烯乙烯(y x)(y x)二胺分光光度法二胺分光光度法 4.测定亚硝酸盐氮测定亚硝酸盐氮 （1）取水样（或经处理后的水样），置于）取水样（或经处理后的水样），置于50ml比色管中。比色管中。 （2）另取）另取50ml比色管比色管5-7支，分别加入亚硝酸支，分别加入亚硝酸盐氮标准应用溶液盐氮标
32、准应用溶液0ml、和，加无亚硝、和，加无亚硝酸盐水至酸盐水至50ml标线。标线。 （3）向水样及标准管中分别加入对氨基苯磺酰）向水样及标准管中分别加入对氨基苯磺酰胺溶液，摇匀后，放置胺溶液，摇匀后，放置(fngzh)2min8min。加。加入盐酸入盐酸N-（1-萘基）萘基）乙烯二胺溶液，立即混乙烯二胺溶液，立即混匀，静置匀，静置10min。第二十八页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验29N-N-（1-1-萘基）萘基）乙烯乙烯(y x)(y x)二胺分光光度法二胺分光光度法 （4）显色后，在）显色后，在2h内于波长内于波长(bchng)540nm处，用处，用1cm比色比色皿，以无亚硝酸盐水为参
33、比，测量吸光度。若亚硝酸盐氮皿，以无亚硝酸盐水为参比，测量吸光度。若亚硝酸盐氮浓度低于浓度低于4g/L时，用时，用3 cm比色皿。比色皿。第二十九页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验（5）若水样经处理，则以无亚硝酸盐水代替水样，作全程）若水样经处理，则以无亚硝酸盐水代替水样，作全程序序(chngx)空白测定。空白测定。（6）绘制亚硝酸盐氮含量（）绘制亚硝酸盐氮含量（g）对吸光度）对吸光度(A)的校准曲线。的校准曲线。将水样的吸光度减去空白的吸光度，再从校准曲线上查出亚将水样的吸光度减去空白的吸光度，再从校准曲线上查出亚硝酸盐氮含量硝酸盐氮含量(g)。第三十页，共56页。卫生理化检验卫生理化检
34、验31N-N-（1-1-萘基）萘基）乙烯乙烯(y x)(y x)二胺分光二胺分光光度法光度法 用表格用表格(biog)概括如下表：见后概括如下表：见后第三十一页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验32标准标准(biozhn)系列系列空白空白钟钟10分分静置静置混匀，混匀，8min 2min静置静置混匀混匀1.001.001.001.001.001.00 1.001.001.00盐酸萘乙二胺盐酸萘乙二胺(ml)1.001.001.001.001.001.001.001.001.00对氨基苯磺酰对氨基苯磺酰胺溶液胺溶液(ml)？1.000.750.500.250.100.050N氮量氮量(g)50
35、 ml容容 至至水水 定定氮氮酸盐酸盐亚硝亚硝用无用无(ml)空白液空白液50 ml样品液样品液50 ml10.007.505.002.501.000.500标准应用液标准应用液1ml=0.1g空白液空白液样品液样品液6543210编号编号第三十二页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验33比色定量比色定量 在波长在波长540nm540nm处，用处，用1cm1cm比色皿，以溶剂调零，比色皿，以溶剂调零，测量吸光度测量吸光度(gungd)(gungd)，记录吸光度，记录吸光度(gungd)(gungd)值。值。第三十三页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验34 注意：注意：1. 样品的测定样品的测
36、定(cdng)和标准系列的测定和标准系列的测定(cdng)应同时进行，以尽量保证实验条件应同时进行，以尽量保证实验条件的一致性。的一致性。2. 盐酸萘乙二胺有毒，勿将比色液弄在手盐酸萘乙二胺有毒，勿将比色液弄在手上。上。第三十四页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验35方法灵敏度和检测上限方法灵敏度和检测上限(shngxin)： 2-N，若取，若取50ml水样测定，则最低检水样测定，则最低检出浓度为出浓度为0.001mg/L，测定上限，测定上限(shngxin)为为0.20mg/L。第三十五页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验365.5.测定测定(cdng)(cdng)亚硝酸盐氮的有关亚硝酸
37、盐氮的有关计算计算（1）配制标准溶液的计算）配制标准溶液的计算（2）水样中被测物质含量）水样中被测物质含量(hnling)的计算的计算 1）绘制标准曲线的方法）绘制标准曲线的方法 2）用最小二乘法公式求回归方程的方法）用最小二乘法公式求回归方程的方法 用公式计算的方法用公式计算的方法 用计算器计算的方法用计算器计算的方法（3）是水样亚硝酸盐氮）是水样亚硝酸盐氮(N,mg/L) 的计算的计算 第三十六页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验375.5.测定测定(cdng)(cdng)亚硝酸盐氮的有关亚硝酸盐氮的有关计算计算（1）配制标准溶液的计算）配制标准溶液的计算已知重量和配制的体积，求浓度是多
38、少已知重量和配制的体积，求浓度是多少(dusho)？ 这里有一个考点，即对亚硝酸盐氮的概念的理解。这里有一个考点，即对亚硝酸盐氮的概念的理解。亚硝酸钠亚硝酸钠(NaNO2)的分子量为的分子量为69，其中，其中N的量为的量为14。不是不是NO2的量，也不是的量，也不是NaNO2的量。的量。例如：亚硝酸盐氮标准贮备溶液的配制。例如：亚硝酸盐氮标准贮备溶液的配制。称取亚硝酸钠称取亚硝酸钠(NaNO2，溶于无亚硝酸盐水中，并稀释，溶于无亚硝酸盐水中，并稀释至至1L，加入氯仿，加入氯仿1ml，其亚硝酸盐氮的浓度，其亚硝酸盐氮的浓度（N， mg/ml ）为多少）为多少(dusho)？第三十七页，共56页。
39、卫生理化检验卫生理化检验38亚硝酸钠中的亚硝酸钠中的“N”的量的量设设1.2321g亚硝酸钠中的亚硝酸钠中的N的量为的量为X， 则则 求亚硝酸盐氮的浓度求亚硝酸盐氮的浓度(nngd)（ mg/ml ）为多少？）为多少？gx25. 02321. 16914第三十八页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验395.5.测定测定(cdng)(cdng)亚硝酸盐氮的有亚硝酸盐氮的有关计算关计算已知浓度和体积，求亚硝酸钠的准确称量的计算已知浓度和体积，求亚硝酸钠的准确称量的计算(j sun) 这里有两个考点：这里有两个考点：亚硝酸盐氮的概念。亚硝酸盐氮的概念。 准确称量的概念。准确称量的概念。例如：欲配例如
40、：欲配 的亚硝酸盐氮的标准溶液的亚硝酸盐氮的标准溶液500ml，应准确称取，应准确称取多少克亚硝酸钠多少克亚硝酸钠(NaNO2)？计算计算(j sun)方法如下：方法如下： （ NO2-N ）。）。ggx.2321. 125. 01469第三十九页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验40学而时习之学而时习之 1、欲配、欲配 的亚硝酸盐氮的标准溶液的亚硝酸盐氮的标准溶液500.00ml，应准确称取多少克亚硝酸钠应准确称取多少克亚硝酸钠(NaNO2)？Na=23，N=14，O=16 即应准确称取即应准确称取0.2464克亚硝酸钠。计算数据一定克亚硝酸钠。计算数据一定(ydng)要书写至小数点后第四
41、位。要书写至小数点后第四位。ggmlmgx2464. 05 . 0146950011469第四十页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验41学而时习之学而时习之2、 称取亚硝酸钠称取亚硝酸钠(NaNO2)1.5821，溶于无亚，溶于无亚硝酸盐水中，并稀释硝酸盐水中，并稀释(xsh)至至1L，加入氯仿，加入氯仿1ml，此溶液，此溶液1ml含亚硝酸盐氮为多少含亚硝酸盐氮为多少mg？计算方法如下：计算方法如下： 设设1.5821g亚硝酸钠中的亚硝酸钠中的N的量为的量为X，则，则gx32. 05821. 16914第四十一页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验42（2）水样中被测物质）水样中被测物质(w
42、zh)含量的计算含量的计算 1）标准曲线法）标准曲线法用查图图算的方法计算水样中被测物质用查图图算的方法计算水样中被测物质(wzh)含量及其注意事项含量及其注意事项 第四十二页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验43亚硝酸盐氮含量亚硝酸盐氮含量(hnling)（g）吸吸光光度度(A)正确的绘制正确的绘制(huzh)方法方法第四十三页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验44亚硝酸盐氮含量亚硝酸盐氮含量(hnling)（g）吸吸光光度度(A)第四十四页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验45亚硝酸盐氮含量亚硝酸盐氮含量(hnling)（g）吸吸光光度度(A)第四十五页，共56页。卫生理化检验卫生理
43、化检验462 2）最小二乘法）最小二乘法(chngf) (chngf) 计算回归方程的计算回归方程的方法方法 用公式计算的方法用公式计算的方法 即用最小二乘法公式计算出直线回归方程即用最小二乘法公式计算出直线回归方程 （=a+bx）中的）中的a值（直线在值（直线在Y轴的截距）和轴的截距）和b值（直线的斜率或称回归系数）。值（直线的斜率或称回归系数）。a值、值、b值计算出来了，这条直线也就确定了。值计算出来了，这条直线也就确定了。但要注意但要注意(zh y)公式公式=a+bx中中的概念，的概念，为为响应值的估计值，表示从回归方程式计算出来响应值的估计值，表示从回归方程式计算出来的值，以区别于实测
44、值的值，以区别于实测值Y。第四十六页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验47例如：用新铜试剂法测定水中铜的含量，配一标准系列测得吸光度例如：用新铜试剂法测定水中铜的含量，配一标准系列测得吸光度(gungd)(gungd)如下：试用计算法拟合标准曲线。如下：试用计算法拟合标准曲线。表表1 1：新铜试剂法测定水中铜含量和吸光度：新铜试剂法测定水中铜含量和吸光度(gungd)(gungd)原始数据原始数据 0.4370.4370.2920.2920.2340.2340.1620.1620.0860.0860.0420.0420 0吸光度吸光度（A A）0.600.600.400.400.300.30
45、0.200.200.100.100.040.040.000.00铜含量铜含量x x（gg）7654321编号编号第四十七页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验48 表表2 2：新铜试剂：新铜试剂(shj)(shj)法测定水中铜的含量相关系数及法测定水中铜的含量相关系数及回归方程计算表回归方程计算表0.491880.26220.360.190970.4370.670.66160.3676561.2531.640.11680.160.0865260.2920.4600.001680.00860.03240.070200.00160.010.040.0900.001760.00740.026240.
46、054760.000.0420.0860.1620.2340.000.040.100.200.3012345xyxy x x2 2 y y2 2 y y x x 编号编号 解解: : 列表列表(li bio)(li bio)计算计算xx、yy、x2x2、y2y2、xyxy第四十八页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验49 计算(j sun)a值、b值nxxnyxb222)()(- x 175. 07)64. 1 (6616. 07)253. 1)(64. 1 (-1.64 2nxbnyxbya011. 0764. 1175. 07253. 1第四十九页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验50即
47、：新铜试剂法测定水中铜的含量即：新铜试剂法测定水中铜的含量(hnling)(hnling)，铜含量铜含量(hnling)(hnling)的标准系列及对应吸光度的直的标准系列及对应吸光度的直线回归方程为：线回归方程为： = 0.011 + 0.715 X = 0.011 + 0.715 X第五十页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验51计算标准曲线计算标准曲线(qxin)(qxin)的相关系数的相关系数计算相关系数计算相关系数(r)(r)公式为：公式为：将表将表2 2中的中的x=1.64x=1.64， y=1.253 y=1.253，y2=0.367656y2=0.367656， x2 x2等数
48、据带入公式中即可算出等数据带入公式中即可算出r r值。值。9990932. 0)7)253. 1 (36639. 0()7)64. 1 (6616. 0(7253. 164. 149188. 022)y)(y()()(2222nnxxnyxxyr第五十一页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验52用回归方程计算用回归方程计算(j sun)(j sun)检验结果检验结果测定样品吸光度（）后，可将值看作测定样品吸光度（）后，可将值看作代入公式中计代入公式中计算算(j sun)(j sun)出含量值出含量值 X X， 这叫公式计算这叫公式计算(j sun)(j sun)法。法。也可在测定范围内任意设也
49、可在测定范围内任意设2 2点，如点，如选择直角坐标纸，以含量选择直角坐标纸，以含量x x为横坐标，以响应值为横坐标，以响应值为纵坐为纵坐标，将这两点描在直角坐标纸上，并连成一条直线，即标，将这两点描在直角坐标纸上，并连成一条直线，即为该测定的标准曲线。在该标准曲线上，样品测定的吸为该测定的标准曲线。在该标准曲线上，样品测定的吸光度值（）对应的光度值（）对应的X X值，即为样品的含量值。值，即为样品的含量值。这叫图算法这叫图算法第五十二页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验53 用计算用计算(j sun)器计算器计算(j sun)的方法的方法第五十三页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验54（3
50、）水样亚硝酸盐氮）水样亚硝酸盐氮(N,mg/L) 的计算的计算(j sun)亚硝酸盐氮亚硝酸盐氮(N,mg/L)=m / V式中：式中：m为从校准曲线上查出的（或回归方程计算为从校准曲线上查出的（或回归方程计算(j sun)出的）亚硝酸盐氮含量出的）亚硝酸盐氮含量(g)，V为水为水样体积（样体积（ml）第五十四页，共56页。卫生理化检验卫生理化检验55【说明】【说明】1、 精密度和准确度：五个实验室分析含精密度和准确度：五个实验室分析含0.083mg/L0.18mg/L亚硝酸盐氮的加标水样，单个实验亚硝酸盐氮的加标水样，单个实验室的相对标准偏差不超过室的相对标准偏差不超过2.8%；加标回收率为