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1、【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流气相色谱法检测辛伐他汀残留溶剂的应用.精品文档.气相色谱法检测辛伐他汀残留溶剂的应用蒋瑜（重庆科技学院化学化工学院 工业分析与检验2008级 ）摘 要气相色谱是一种分离分析方法，适用与含挥发性或经裂解、衍生化等能气化的药品及及多组分混合化合物的定性、定量分析。各国药典主要用于原料药种残留溶剂，挥发性杂质的检查以及具有一定挥发性原料药及制剂的含量测定。本文主要使用浙江海正药业有限公司质检中心气相色谱实验室气相色谱仪器对原料药辛伐他汀的残留溶剂，挥发性杂质的检查含量测定。辛伐他汀是一种降脂类药物，适用于高脂血症、冠心病合并高胆固醇血症患者及患有杂
2、合子家族性高胆固醇血症的儿童患者。近期，国外药品管理当局发布了有关使用辛伐他汀引起严重肌损害的安全性信息，考虑到此风险在我国临床使用中也同样存在，我国在辛伐他汀残留溶剂检测也很严格。辛伐他汀生产工艺主要用到甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷，所以辛伐他汀的主要残留溶剂就是这些。本文主要用到的仪器，气相色谱仪型号为Agilent Technologies-6890N，进样器型号为Agilent Technologies-G1888和CTC Analytics-6500及计算机色谱工作站。关键词：气相色谱法 辛伐他汀 挥发性残留溶剂 含量测定中图分类号： 文献标示码：1 目 录摘要1
3、1 绪 论3 1.1气相色谱的发展历史3 1.2 气相色谱仪器及条件选择51.2.1 仪器组成51.2.1.1 气路系统及载气的选择61.2.1.2进样系统的选择 61.2.1.3柱箱71.2.1.4检测器的选择81.2.1.5色谱柱的选择81.2.1.6色谱数据收集处理系统111.3 辛伐他汀残留溶剂的挥发性111.4气相色谱法分析辛伐他汀残留溶剂含量的优点2辛伐他汀残留溶剂的分析实验及验证方法 3含量测定结果和结论参考文献附件 致 谢1 绪 论1.1 气相色谱的发展历史气相色谱（gas chromatography 简称GC）是二十世纪五十年代出现的一项重大科学技术成就。这是一种新的分离、
4、分析技术，它在工业、农业、国防、建设、科学研究中都得到了广泛应用。气相色谱可分为气固色谱和气液色谱。气相色谱可分为气固色谱和气液色谱。气固色谱的“气”字指流动相是气体，“固”字指固定相是固体物质。例如活性炭、硅胶等。气液色谱的“气”字指流动相是气体，“液”字指固定相是液体。例如在惰性材料硅藻土涂上一层角鲨烷，可以分离、测定纯乙烯中的微量甲烷、乙炔、丙烯、丙烷等杂质。GC色谱的发展与下面两个方面的发展是密不可分的。一是气相色谱分离技术的发展，二是其他学科和技术的发展。 1952年James和Martin提出气液相色谱法，同时也发明了第一个气相色谱检测器。这是一个接在填充柱出口的滴定装置，用来检测
5、脂肪酸的分离。用滴定溶液体积对时间做图，得到积分色谱图。以后，他们又发明了气体密度天平。1954年Ray提出热导计，开创了现代气相色谱检测器的时代。此后至1957年，是填充柱、TCD年代。 1958年Gloay首次提出毛细管，同年，Mcwillian和Harley同时发明了FID，Lovelock发明了氩电离检测器（AID）使检测方法的灵敏度提高了23个数量级。 20世纪60和70年代，由于气相色谱技术的发展，柱效大为提高，环境科学等学科的发展，提出了痕量分析的要求，又陆续出现了一些高灵敏度、高选择性的检测器。如1960年Lovelock提出电子俘获检测器（ECD）；1966年Brody等发明
6、了FPD；1974年Kolb和Bischoff提出了电加热的NPD；1976年美国HNU公司推出了实用的窗式光电离检测器（PID）等。同时，由于电子技术的发展，原有的检测器在结构和电路上又作了重大的改进。如TCD出现了衡电流、横热丝温度及衡热丝温度检测电路；ECD出现衡频率变电流、衡电流脉冲调制检测电路等，从而使性能又有所提高。 20世纪80年代，由于弹性石英毛细管柱的快速广泛应用，对检测器提出了体积小、响应快、灵敏度高、选择性好的要求，特别是计算机和软件的发展，使TCD、FID、ECD、和NPD的灵敏度和稳定性均有很大提高，TCD和ECD的池体积大大缩小。 进入20世纪90年代，由于电子技术
7、、计算机和软件的飞速发展使MSD生产成本和复杂性下降，以及稳定性和耐用性增加，从而成为最通用的气相色谱检测器之一。其间出现了非放射性的脉冲放电电子俘获检测器（PDECD）、脉冲放电氦电离检测器（PDHID）和脉冲放电光电离检测器（PDECD）以及集次三者为一体的脉冲放电检测器（PDD），4年后，美国Varian公司推出了商品仪器，它比通常FPD灵敏度高100倍。另外，快速GC和全二维GC等快速分离技术的迅猛发展，促使快速GC检测方法逐渐成熟。色谱流出曲线气相色谱法是指用气体作为流动相的色谱法。由于样品在气相中传递速度快，因此样品组分在流动相和固定相之间可以瞬间地达到平衡。另外加上可选作固定相的
8、物质很多，因此气相色谱法是一个分析速度快和分离效率高的分离分析方法。近年来采用高灵敏选择性检测器，使得它又具有分析灵敏度高、应用范围广等优点。气相分析流程图GC主要是利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异来实现混合物的分离，其过程如图气相分析流程图所示。 待分析样品在汽化室汽化后被惰性气体（即载气，也叫流动相）带入色谱柱，柱内含有液体或固体流动相，由于样品中各组分的沸点、极性或吸附性能不同，每种组分都倾向于在流动相和固定相之间形成分配或吸附平衡。但由于载气是流动的，这种平衡实际上很难建立起来。也正是由于载气的流动，使样品组分在运动中进行反复多次的分配或吸附/解吸附，结果是在载气中浓度大的组分先流
9、出色谱柱，而在固定相中分配浓度大的组分后流出。当组分流出色谱柱后，立即进入检测器。检测器能够将样品组分的与否转变为电信号，而电信号的大小与被测组分的量或浓度成正比。当将这些信号放大并记录下来时，就是气相色谱图了。气相色谱检测器示意图气相色谱仪由以下五大系统组成：气路系统、进样系统、分离系统、温控系统、检测记录系统。 组分能否分开，关键在于色谱柱；分离后组分能否鉴定出来则在于检测器，所以分离系统和检测系统是仪器的核心。在石油化学工业中大部分的原料和产品都可采用气相色谱法来分析；在电力部门中可用来检查变压器的潜伏性故障；在环境保护工作中可用来监测城市大气和水的质量；在农业上可用来监测农作物中残留的
10、农药；在商业部门可和来检验及鉴定食品质量的好坏；在医学上可用来研究人体新陈代谢、生理机能；在临床上用于鉴别药物中毒或疾病类型；在宇宙舴中可用来自动监测飞船密封仓内的气体等等。 色谱实际上是俄国植物学家茨维特（M.S.Tswett）在1901年首先发现的。1903 年3月，茨维特在华沙大学的一次学术会议上所作的报告中正式提出“chromatography”(即色谱)一词，标志着色谱的诞生。他因此被提名为1917年诺贝尔化学奖的候选人。当时茨维特研究的是液相色谱（LC）的分离技术，气相色谱出现在20世纪40年代，英国人马丁（A.J.P.Martin）和辛格(R.L.M.Synge)在研究分配色谱理
11、论的过程中，证实了气体作为色谱流动的可能性，并预言了GC的诞生。与此巧合的是，这两位科学家获得了当年的诺贝尔化学奖。尽管获奖成果是他们对分配色谱理论的贡献，但也有后人认为他们是因为GC而得奖的。这也从另一个方面说明了GC技术对整个化学发展的重要性。 虽然GC的出现较LC晚了50年，但其在此后20多年的发展却是LC所望尘莫及的。从1955年第一台商品GC仪器的推出，到1958年毛细管GC柱的问世；从毛细管GC理论的研究，到各种检测技术的应用，GC很快从实验室的研究技术变成了常规分析手段，几乎形成了色谱领域GC独领风骚的局面。1970年以来，电子技术，特别是计算机技术的发展，使得GC色谱技术如虎添
12、翼，1979年弹性石英毛细管柱的出现更使GC上了一个新台阶。这些既是高科技发展的结果，又是现代工农业生产的要求使然。反过来，色谱技术又大大促进了现代物质文明的发展。在现代社会的方方面面，色谱技术均发挥着重要作用。从天上的航天飞机，到水里游的航空母舰，都用GC来监测船舱中的气体质量；从日常生活中的食品和化妆品，到各种化工生产的工艺控制和产品质量检验，从司法检验中的物质鉴定，到地质勘探中的油气田寻找，从疾病诊断、医药分析、到考古发掘、环境保护，GC技术的应用极为广泛。本文主要讨论在医药分析中对原料药的残留溶剂的分析检测 气相色谱填充柱顶空进样法是气相色谱特有的一种进样方法。适用于挥发性大的组分分析
13、。测定时，精密称取标准溶液和供试品溶液各3-5 ml分别置于容积为8 ml的顶空取样瓶中。将各瓶在60摄氏度的水浴中加热30-40 min，使残留溶剂挥发达到饱和，再用在同一水浴中的空试管中加热的注射器抽取顶空气适量（通常为1 ml）。进样，重复进样3次，按溶剂直接进样法进行计算与处理。 顶空进样法使待测物挥发后进样，可免去样品萃取、浓集等步骤，还可避免供试品种非挥发组分对柱色谱的污染，但要求待测物具有足够的挥发性。 顶空分析是通过样品基质上方的气体成分来测定这些组分在原样品中的含量。其基本理论依据是在一定条件下气相和凝聚相（液相和固相）之间存在着分配平衡。所以，气相的组成能反映凝聚相的组成。
14、可以把顶空分析看作是一种气相萃取方法，即用气体做“溶剂”来萃取样品中的挥发性成分，因而，顶空分析就是一种理想的样品净化方法。传统的液液萃取以及SPE都是将样品溶在液体里，不可避免地会有一些共萃取物的干扰分析。况且溶剂本身的纯度也是一个问题，这在痕量分析中尤为重要。而其做溶剂可避免不必要的干扰，因为高纯度气体很容易得到，且成本较低。这也是顶空气相悖广泛采用的一个原因。 作为一种分析方法，顶空分析首先简单，它只取气体部分进行分析，大大减少了样品本身可能对分析的干扰或污染。作为GC分析的样品处理方法，顶空是最为简便的。其次，是可以使气化后进样，顶空分析有不同模式，可以通过优化操作参数而适合于各种样品
15、。第三，顶空分析的灵敏度能够满足法规的要求。第四，顶空进样可相对的减少用于溶解样品的沸点较高的溶剂的进样量，缩短分析时间，但对溶剂的纯度要求较高，尤其不能含有低沸点的杂质，否则会严重干扰测定。最后，与GC的定量分析能力相结合，顶空GC完全能够进行准确的定量分析。1.2气相色谱仪器及条件选择气相色谱法的流动相为气体。色谱柱分为填充柱和毛细管柱二种。填充剂内吸附剂，高分子多孔小球或涂渍固定液的载体，毛细管柱内壁涂渍或交联固定液。注入进样口的供试品被加热气化，并被载气带入色谱柱，在柱内各成分被分离后先后进入检测器，色谱信号用记录仪或积分仪记录。1.2.1 仪器组成气相色谱仪（以下简称GC）主要由气路
16、系统、进样系统、色谱柱、检测器、显示器及数据采集系统等组成。使用时应按仪器操作说明进行。仪器应定期检定。图1.1 安捷伦6890N的工作原理示意图1.2.1.1 气路系统及载气的选择1）载气气相色谱法的流动相为气体，称为载气，氮、氦和氢可用作载气，可由高压钢瓶或高纯度气体发生器提供，经过适当的减压装置，以一定流速经过进样器和色谱柱；根据供试品的性质和检测器种类选择载气，除另有规定外，本文用氮气为载气。氮纯度最好使用99.99%高纯氮。不过填充柱以氢火焰离子化检测器亦可用99.9%纯氮，氮多用6m3高压钢瓶装，按照高压容器安全操作规程操作。当气瓶气压下降到20kg/cm2时，应停止使用。由于氢分
17、子量小，热导系数大，粘度小等特点，因此在缺乏氦的情况下，常采用作热导检测器载气，在火焰离子化检测器中它是必用的燃气。为了提高载气的线速度，缩短分析时间，用毛细管柱分析某些样品可采用氢作载气、氮作尾吹（可以提高灵敏度）、空气助燃的办法。氢的来源用前除了氢高压钢瓶外，还可采用氢发生器，但要用超纯水，以防钯管失效。以采用钢瓶氢为宜。氢易燃、易爆。使用时应特别注意安全，特别要注意气路的各联接部分的试漏检查。空气是氢焰检测器助燃气体，可用小型光油型空气压缩机提供气源。2）气路连接、气流指示和调节在安装气瓶减压阀时，应先将瓶口联结处的灰尘擦干净，将瓶口向外，旋阀门开关放气数次，吹除灰尘，将减压阀用板手柠紧
18、，再用联接管将减压阀出口联至气相色谱仪。用检漏液（表面活性剂溶液）检查连接处气密性。3)气流的测定气体的流速气体的流速是以单位时间内通过色谱柱或检测器的气体体积大小来表示（ml/min）。现代仪器有电子流量检测器和电子压力控制器，可编程控制柱头压力和载气流量。1.2.1.2进样系统的选择GC进样系统包括样品引入装置（如手动微量注射器，自动进样器以及顶空进样器）和气化室（进样口）。进样量的大小、进样时间的长短，直接影响到柱的分离和最终定量结果。1）进样口 填充柱进样口 是目前最为常用、也是最简单、最容易操作的GC进样口，该进样口的作用就是提供一个样品气化室，所有气化的样品都被载气带入色谱柱进行分
19、离。进样口可以配置、也可以不配置隔垫吹扫装置。这种进样口可连接玻璃或不锈钢填充柱，还可连接大口径毛细管柱作直接进样析。 分流/不分流进样口 是最常用的毛细管柱进样口。它既可用作分流进样，也可用作不分流进样。与填充柱进样口相比，该进样口有分流气出口及其控制装置，除了进样口前有一个控制阀外，在分流气路上还有一个柱前压调节阀，而且二者使用的衬管结构不同。分流进样适合于大部分可挥发样品，能够有效的防止柱污染。分流进样的适用范围宽，灵活性很大，分流比可调范围广，为毛细管GC的首选进样方式。分流进样的进样量一般不超过2ml，最好控制在0.5ml 以下，常用的分流比为10：1200：1，样品浓度大或进样量大
20、时，分流比可相应增大，反之则减小。采用分流进样时要注意分流歧视现象（是指在一定分流比条件下，不同样品组分的实际分流比是不同的，这就会造成进入色谱柱的样品组成不同于原来的样品组成，从而影响定量分析的准确度）。不均匀气化是分流歧视的主要原因之一，另外一个原因是不同样品组分在载气中的扩散速度不同，所以，尽量使样品快速气化是消除分流歧视的重要措施，包括采用较高的气化温度，也包括使用合适的衬管。一般来说：分流比越大，越有可能造成分流歧视。具体分析中要消除分流歧视，还应注意色谱柱的初始温度尽可能的高一些，另外，在安装色谱柱时要保证柱入口端超过了分流点，二是要保证柱入口端处于气化室衬管的中央。通常在实际工作
21、中，只是在分流进样不能满足分析要求时（主要是灵敏度要求），才考虑使用不分流进样。2）进样技术进样方式一般可采用溶液直接进样或顶空进样。如果配备了自动进样器，这两种方式均可以通过色谱工作站的控制来实现在自动进样。 溶液直接进样 采用微量注射器、微量进样阀或分流装置的气化室进样，进样口温高于柱温3050，进样量不超过数微升，柱越细，进样量越少，采用毛细管柱时，一般应分流以免过载。 顶空进样 气相色谱顶空进样技术广泛应用于药物中的残留有机溶剂分析。顶空进样是通过样品基质上方的气体成分来测定这些组分在原样品中的含量，是一种简单而有效的样品净化方法。根据取样和进样方式的不同，顶空进样分为静态和动态。静态
22、顶空就是将样品溶液密封在一个容器（平衡瓶）中，在一定温度下（平衡温度）加热一段时间（平衡时间）使气液两相达到平衡，然后取气相部分进入GC分析，药物中的残留有机溶剂分析通常采用这种顶空进样方法。本文主要用到顶空进样法。在进行药物中残留有机溶剂检查时，应根据供试品中残留溶剂的沸点选择平衡温度。对沸点较高的残留溶剂，通常选择较高的平衡温度；但此时应兼顾供试品的热分解特性，尽量避免供试品产生的挥发性热分解产物对测定的干扰。平衡时间一般不应少于30分钟，以保证供试品溶液的气一液两相有足够的时间达到平衡。平衡的时间也不宜过长，通常不应超过60分钟，否则可能使顶空瓶的气密性变差导致定量准确性的降低。对照品溶
23、液与供试品溶液必须使用相同的顶空进样条件。顶空样品瓶最好只用一次，若要反复使用，建议的清洗方法是：先用洗涤剂清洗（太脏的瓶子可用洗液浸泡），然后用蒸馏水洗，再用色谱纯甲醇冲洗，置于烘箱中烘干备用。顶空进样分为手动进样和自动进样，由于手动进样的压力，温度以及进样量难以控制，导致分析结果的重现性差，建议采用自动顶空进样器。3) 气化室衬管容积是影响分析质量的重要参数，基本要求是衬管容积至少要等于样品中溶剂在设定温度、压力下气化后的体积。在实际工作中要注意衬管容积与样品的匹配性。4）进样密封硅橡胶垫应先加热老化，除去挥发性物质再用，并注意经常更换，另外也要注意经常更换衬管上端的密封硅橡胶圈。1.3.
24、1.3 柱箱及色谱柱柱箱温度的波动会影响色谱分析结果的重现性，因此要求柱箱控温精度应在1，且柱箱温度波动小于0.1/h。温度控制分恒温和程序升温两种，前者用于简单组分分析，后者用于复杂多组分分析。1.2.1.4 检测器气相色谱的检测器有：火焰离子化检测器（FID）；热导检测器（TCD）；电子俘获检测器（ECD）；火焰光度检测器（FPD）；氮磷检测器（NPD）；光离子化检测器（PID）；红外光谱检测器（IRD）和质谱检测器（MSD）等。在药物分析中火焰离子化检测器（FID）是最常用的检测器。本文用的是FID检测器 气体流速 FID检测器需用5 种不同的气体：载气、氢气和空气，由于毛细管柱的柱内载
25、气流量太低（常规柱为1-5ml/min），不能满足检测器的最佳操作条件，所以使用毛细管柱时要采用辅助气（尾吹气），即在色谱柱后增加一路载气直接进入检测器，就可保证检测器在高灵敏度状态下工作，尾吹气的另一个重要作用是消除检测器死体积的柱外效应。一般情况下，氮气（尾吹气; 载气）、空气和氢气三者的比例接近或等于1：10：1（如：氮气3040ml/min，空气300400ml/min，氢气3040ml/min）时，FID的灵敏度最高。 检测器温度 温度对FID, 检测器的灵敏度和噪声的影响不显著，为防止检测器被污染，检测器温度设置应不低于色谱柱实际工作的最高温度，一般情况下，检测器的温度不应低于15
26、0。 检测器清洗 FID检测器往往由于固定液流失，样品在喷嘴燃烧后产生积碳，或使用硅烷化衍生试剂汽积二氧化硅，污染检测器，喷嘴内径变小，点火困难，检测器线性范围变窄，收集极表面也沉积二氧化硅，使灵敏度下降，故最好卸下喷嘴和收集极清洗，先用通针通喷嘴，必要时用金相砂纸打磨，然后将喷嘴先用5%硝酸再用水超声12小时，清洗。在100120C烘干。收集极也按上述方法清洗。1.2.1.5色谱柱的选择色谱分析的好坏主要决定于色谱柱。气相色谱柱按照色谱柱内径的大小和长度，可分为填充柱和毛细管柱，前者的内径在24mm，长度为110m左右；后者内径在0.20.5mm，长度一般在25100m。柱形有U形、螺旋形。
27、新的或长期未使用的色谱柱使用前应用适宜的温度老化处理一段时间（老化时间由于色谱柱的不同而不同）；一般处理方法是将柱装入色谱仪中使载气缓缓通过色谱柱，然后在高于正常温度2050、而不超过固定液最高使用温度时加热24小时。安装色谱柱应注意进样口与检测器对应的方向，避免接反造成检测器污染；使用时应注意使用说明书所示使用温度范围，不能用过高或过低的柱温以免造成色谱柱损坏；色谱柱使用后拆出时，两端应用适宜的封头密封。色谱柱使用及维护保养时需填写H3-AM-10070-R01“色谱柱使用登记表”。1）填充柱 柱材、柱长与柱径常用有不锈钢柱和玻璃柱，不锈钢柱主要优点是坚固、耐用，但不适用于不稳定的化合物，玻
28、璃柱无以上缺点，但易破碎。柱长常用13m，以2m为 最常用。柱径一般为24mm，细径柱的柱效比粗径柱高 2）填料色谱柱内填料分为三大类：吸附剂类、多孔性高分子微球和涂布固定液的硅藻土类载体，吸附剂常用于气体分析。 3) 固定液对固定液的要求：在操作范围内蒸气压低，热稳定性好，样品各组分在其中应有足够溶解能力，选择性高，即对两个沸点相同或相近但属于不同类型的化合物有尽可能高的分离能力。固定液的种类很多，根据药物分析情况选择。一般按“相似相溶”的原则，即组分的结构、性质与固定液相似时，在固定液中的溶解度大，因而保留时间长；反之，溶解度小，保留时间短。如烃类化合物最好用一烃类固定液；而极性化合物用极
29、性固定液，如醇类用聚乙二醇等。但选择原则不是不变的。中国药典首选高分子微球，SE-30（或OV-1，OV-101），OV-17，PEG-20M几种。后者因系多羟基固定液，可用未经硅烷化载体。4）柱的老化填充好的柱应进行老化处理才能使用，老化的目的是除去填充物中残留挥发性成分，并使固定液再一次均匀牢固地分布在担体表面上，久未使用的色谱柱在重新使用前亦需再作老化处理，一般处理方法是将柱装入色谱仪中使载气缓缓通过色谱柱，然后在高于正常温度2050、而不超过固定液最高使用温度时加热24小时。为了避免柱污染检测器、在老化过程中不要将柱出口与检测器相接，让其放空，如有条件，可以用程序升温方法老化柱，效果更
30、好（以每分钟25的速率把温度升高到老化温度保持1224小时）。有些硅酮类的固定液如SE-30，可用一种特殊的顺序增强惰性及柱效，即保持250柱温1小时，同时通氮除去氧和溶剂，停止通氮，加热至340，维持4小时，然后降温至250，通氮老化直至基线稳定。如测定易分解的生物碱硫酸阿托品含量时，色谱柱必须经这样处理减少活性，否则产生色谱峰拖尾和组分分解。5）毛细管柱毛细管柱由于分离效能高，分析速度快，样品用量少等特点，自从1958年以来有很大发展，但柱易碎裂，安装不方便，受到一定的限制，自从1979年出现了弹性石英毛细管色谱柱（FSOT）以来，由于它化学隋性好、强度好，有一定弹性不易折断，安装、使用方
31、便。此外，国内、外已经有各种各样的商品柱，故使用日益广泛。表1.1最常用FSOT柱固定组成同类固定相极性应用使用温度聚二甲基硅氧烷AT-1BP-1CP-SIL-5DB-1DC-200HP-1MTX-1OV-17OV-101SPB-1RTX-1SE-302CBP-1SP-2100非极性胺类、烃类、酚类、硫化物、药物等温：60325程序升温：60350聚5%二苯基95%二甲基氧烷DB-5AT-5HP-5SPB-5CBP-5Ultra-5Ultra-2弱极性生物碱、卤代化合物、脂肪酸甲酯，芳香化合物，药物等温：60325程序升温：60350聚 6%氰丙基-94%二甲基硅氧烷AT-1301DB-624
32、DB-1301HP-1301Rtx624Rtx1301中等极性杀虫剂、醇类、氧化剂等温：20280程序升温：20300聚50%三氟丙基50%甲基硅氧烷AT-210HP-210DB-210Rtx200中等极性醛类、酮类、有机磷、杀虫剂等温：45240程序升温：45260聚乙二醇20M-TPAHP-FFAPAT-1000SUPEROX-FASP-1000DB-FFAP极性酸类、醇类、醛类、酮类、腈类、丙烯酸类等温：60240程序升温：60250聚乙二醇20MDB-WaxHP-WaxHP-INNOWaxBP-20CBP-20SUPEROX-2Supelco-Wax极性醇类、乙二醇类、芳香族类等温：2
33、0240程序升温：202646) FSOT柱的选择(1)固定相 大多数分析工作可以在聚二甲基硅氧烷和聚乙二醇%-20M上完成。在进行样品分析时，首先选用非极性固定相，因为这种柱性能好，如柱效高、对氧不敏感、最高使用温度高、柱寿命长等优点。当然，必要时应选用极性较高的固定相，以增加组分与固定液的相互作用，达到较好的分离效果。(2)柱内径与固定相液膜厚度 内径0.53mm，液膜厚5.0mm的柱是常用柱，兼顾了柱效和样品容量。为了增加样品容量，可选择内径较大、液膜较厚的柱，如内径0.35mm，液膜厚0.50mm 的柱。另外有一种用于快速GC分析的微径柱，内径不大于0.1mm，液膜厚度不超过0.50m
34、m，柱长一般为10m 左右，采用快速GC可比常规毛细管柱的分析速度提高310 倍，而且柱效也有很大提高。大口径柱（不小于0.53mm）是一类特殊的毛细管柱，它的液膜厚度一般较大（15mm），故有较大的柱容量，在一定程度上可代替填充柱，且具有较高的柱效，对仪器及操作者的要求较低，定量分析的再现性也较填充柱有所提高。(3) 柱长 商品柱一般有30m、60m 三种，一般分析工作中使用30m长柱较多，复杂样品需用较长的柱。如样品中组分不多，性质不同，则用短柱比较有利，这样可以加快分析速度，减少固定相流失。由上面的几个条件得出，HP-5型号（30m*0.53mm*5.0um）的是比较适合对辛伐他汀残留溶
35、剂检测实验的，因为HP-5型号符合以上优点，适合各溶剂的出峰。(4) 柱的老化、维护与贮存 新柱需要老化，以除去残留溶剂及低分子量的聚合物。此外，老的柱也应定期老化，尤其是出现基线漂移，某些色谱峰开始拖尾时，以除去样品中的难挥发物在柱头的积累。一般在比最高分析温度高20或最高柱温（温度更低者）的条件下老化柱子2小时，如果在高温10 分钟后背景不下降，立即将柱子降温并检查柱子是否有泄漏。如果用Vespel密封圈的话，老化完后重新检查密封程度。要用高纯度的载气，以免缩短柱寿命，如聚乙二醇固定相柱最易被氧化、毛细管柱的前端数厘米处易损坏，如不挥发物的积累，进样溶剂的侵蚀及机械损伤等。可以切除这受损害
36、的几厘米处，不至于影响总的柱效。切除时切口应平整。如果是横向交联或键合相柱，则可用适当的溶剂洗涤除去污染物，以使柱再生。选择何种溶剂取决于污染的性质、程度和固定相的种类。一般用戊烷来洗涤。如污染物极性较大，可用二氯甲烷或甲醇。但横向交联的聚乙二醇-20M，应避免用极性溶剂和二氯甲烷洗涤。洗涤FSOT柱，一般用2ml溶剂已足够。选用一装置，加压以使溶剂自出口端向入口端缓缓通过色谱柱。洗涤后，先在低温下除去溶剂，再进行老化处理。毛细管色谱柱如不使用，应小心贮存，可用硅橡胶块将两端封闭，置于盒中。 1.2.1.6 色谱数据收集处理系统气相色谱仪可以利用色谱工作站完成数据收集和处理，也可以对色谱仪的进
37、样器，柱温、检测器、温度程序等参数进行控制，使色谱分析自动化，因商品规格型号不同，具体操作也不一样，可根据仪器操作规程进行操作。1.3 辛伐他汀残留溶剂的挥发性 残留溶剂是指在原料药或赋形剂的生产中,以及在制剂制备过程中产生或使用的有机挥发性化合物,他们在工艺中不能完全除尽.由于残留溶剂没有疗效,故所有残留溶剂均应尽可能除去,以符合产品规范、GMP或其他基本的质量要求。辛伐他汀的生产工艺中主要用到的甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷，这些溶剂受热易挥发，用顶空进样法能准确有效快速的检测出其含量（ppm）。1.4 气相色谱法分析辛伐他汀残留溶剂含量的优点高灵敏度：可检出010mg的
38、物质，可作超纯气体、高分子单体的痕迹量杂质分析和辛伐他汀微量毒物的分析。 高选择性：可有效地分离性质极为相近的各种同分异构体和各种同位素。 高效能：可把组分复杂的样品分离成单组分。 速度快：一般分析、只需几分钟即可完成，有利于指导和控制生产。 应用范围广：即可分析低含量的气、液体，亦可分析高含量的气、液体，可不受组分含量的限制。 所需试样量少：一般气体样用几毫升，液体样用几微升或几十微升。2辛伐他汀残留溶剂的分析实验及验证2.1气相色谱法检验辛伐他汀的残留溶剂实验1 目的建立辛伐他汀的残留溶剂项目的检验方法，以确保本公司生产的辛伐他汀原料药残留溶剂项目的检验符合规范。2 适用范围本标准适用于辛
39、伐他汀原料药的残留溶剂项目的检验。3 责任3.1 API QC气相岗位人员确保按照批准的检验方法进行检验。4 方法4.1 产品信息：中文名称：辛伐他汀 英文名称：Simvastatin分子式：C25H38O5 分子量：418.57 CAS No: 79902-63-9化学名称：丁酸，2，2-二甲基-，1，2，3，7，8，8a-六氢-3，7-二甲基-8-2-(四氢-4-羟基-6-氧代-2H-吡喃-2)-已基-1-萘已酯，1S-1a，3a，7b，8b，(2S*，4S*)，8ab。4.2 质量标准编号链接：H3-QS-100024.3 检验方法：4.3.1 国外注册方法：A试剂环己烷，分析纯乙醇，分
40、析纯乙酸乙酯，分析纯二氯甲烷，分析纯二甲基甲酰胺，色谱纯四氢呋喃，分析纯甲醇，分析纯氮气，经过滤空气，经过滤氢气，经过滤B仪器气相色谱仪，备有一个火焰离子检测器和一个Agilent化学工作站。顶空自动进样器经过校正的玻璃容量仪器一台校正过的分析天平经过校正的微量进样器（25ml，10ml和1ml）其他的实验室标准仪器和设备C实验条件1 顶空实验条件小瓶加热平衡时间（vial EQ time)15分钟小瓶平衡温度(vial temperature)125C注射时间(injection time)1分钟传输线温度(transfer line)150C加压时间（pressurize time)0.2
41、分钟2 色谱分离条件色谱柱：HP-5毛细管柱 直径：0.53mm涂膜厚度：5.0mm 柱长：30米载气：氮气载气流速：4.0ml/min分流比：5：1尾吹流量：28ml/min进样口温度：250检测器温度：250柱温：80氢气：35ml/min空气：350ml/minD检验操作1 标准溶液的配制向已有约80ml DMF的100ml容量瓶中，加入甲醇6.0ml，乙醇12.5ml，二氯甲烷1.0ml，环己烷1.0ml，乙酸乙酯2.0ml，四氢呋喃3.3ml。以DMF稀释至刻度并混合均匀。2 样品溶液的配制准确称取约120mg样品置于10ml顶空小瓶中，加入3.0mlDMF，溶解后加盖密封。3 检测
42、取1个顶空小瓶，加入3.0ml溶剂DMF，顶空进样，记录图谱，应无干扰峰；取6个顶空小瓶，各加入3.0ml标准溶液，顶空进样，记录图谱，计算RSD不得大于15%。再取样品进样。根据峰面积计算各残留溶剂含量，计算公式如下：残留量(ppm) =AiVs /100106AsWi/ViAi 分别为测试液中各残留溶剂的峰面积As 分别为标准液中各残留溶剂的平均峰面积Vs 分别为标准液中各残留溶剂加入的体积，ml 分别为各残留溶剂的密度，mg/ml100 标准液中各残留溶剂稀释的体积，mlWi 测试液中样品的称量，mgV i 测试液中样品稀释的体积，ml溶剂名称A工艺B工艺C工艺定量限密度二氯甲烷600p
43、pm600ppm600ppm33 ppm1.326103m g/ml乙酸乙酯5000ppm2600ppm2600ppm18 ppm0.902103m g/ml环己烷3880ppm3880ppm3880ppm8 ppm0.778103m g/ml甲醇3000ppm200ppm200ppm24 ppm0.792103m g/ml乙醇5000ppm5000ppm5000ppm25 ppm0.789103m g/ml四氢呋喃/720ppm/18 ppm0.889103m g/ml备注：检测结果如果小于上表中定量限的，报告为“定量限”（例如二氯甲烷为33ppm）2.2对辛伐他汀部分残留溶剂的验证目的：通
44、过对1.1-二氯乙烯溶剂气相检测的专属性，定量限,检测限的确定以及六批辛伐他汀样品和原料二氯甲烷中的1.1-二氯乙烯的检测来证明辛伐他汀中不含1.1-二氯乙烯.测定方法：A 试剂和样品名称级别批号厂家1. 甲醇分析纯070503浙江临安青山化工试剂厂2. 乙醇分析纯0611073601安徽安特生物化学有限公司3. 二氯甲烷分析纯20051115浙江临安青山化工试剂厂4. 乙酸乙酯分析纯20060705浙江临安青山化工试剂厂5. 四氢呋喃分析纯20070303浙江临安青山化工试剂厂6. 环己烷分析纯20060805浙江临安青山化工试剂厂7. 1.1-二氯乙烯分析纯20050106中国上海试剂总厂8. 吡啶分析纯051110中国上海试剂总厂9. DMF色谱纯070103美国天地公司10. 氮气高纯，经过滤11. 空气高纯，经过滤12. 氢气高纯，经过滤13. 辛伐他汀样品原料药07081318本厂生产14. 二氯甲烷样品原辅料070901浙江临安青山化工试剂厂B仪器2. 气相色谱仪AGILENT6890N，备有一个火焰离子检测器和一个AGILENT化学工作站。3. AGI