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1、【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流微生物发酵饲料中乳酸含量的测定方法比较分析.精品文档.微生物发酵饲料中乳酸含量的测定方法比较分析摘 要：通过比较分析羟基联苯比色法、EDTA定钙法、乳酸脱氢酶法3种检测方法的准确性、简便性、经济性，找到适合于测定微生物发酵饲料中乳酸含量的方法。试验结果表明，乳酸脱氢酶法检测的准确性最好、迅速，但成本高；EDTA定钙法检测虽然简便、迅速，但准确性最差；羟基联苯比色法检测效果居中，较为准确和方便。因此，乳酸脱氢酶法适合于高精度、高效率的检测；EDTA定钙法适合于迅速简便、精度要求不高的检测；羟基联苯比色法可作为企业或科研单位精度要求不高的常规检测
2、。关键词：发酵饲料；乳酸；羟基联苯比色法；EDTA定钙法；乳酸脱氢酶法Comparative Analysis of Analytical Methods of Lactic AcidContent in Microbial Fermentation FeedsAbstract:To find a method that was used to measure the lactic acid content in microbial fermentation feeds,the accuracy, convenient and economy of hydroxybiphenol colori
3、metry method, EDTA titration method and lactic acid dehydrogenase method were contrasted in this study. The results showed that the accuracy of the test result wasbest and rapid using the lactic acid dehydrogenase method, but the cost was higher. The test of EDTA titration method was simple and rapi
4、d, but the accuracy was worst. The test results of hydroxybiphenol colorimetry method waspreferably, the methods had good specificity and convenient. Consequently, lactic acid dehydrogenase method wasfit for the tests require high precision and high efficiency. The EDTA titration method was fit for
5、the tests requiresimple and rapid, but the accuracy didn t ask for much. The hydroxybiphenol colorimetry method was used for routine undemanding accuracy test result in enterprise or institutes of scientific research.Key words:microbialfermentationfeeds;lacticacid;hydroxybiphenolcolorimetrymethod;ED
6、TAtitrationmethod;lacticaciddehydrogenasemethod收稿日期：2012-03-22基金项目：龙岩市科技计划重点项目（2011LY18作者简介：罗建（1962），男，福建龙岩人，硕士，研究方向为饲料的研发、生产与应用。通讯作者：教授，硕士生导师，E-mailLyyxy198837饲料博览 2012年第5期检测分析微生物发酵饲料的生产与应用是近年来饲料工业和养殖业最热门的话题之一。随着人民生活水平的不断提高和环境资源的日益恶化，利用农副产品和轻工副产物生产高质量、无污染的微生物发酵饲料已成为缓解饲料资源短缺、提高畜禽产品品质、减少畜产品药物抗生素残留的重要
7、手段 1 。微生物发酵饲料的生产菌种主要有乳酸菌、酵母菌和芽孢菌，其中乳酸菌包括发酵乳杆菌、嗜酸乳杆菌和粪肠球菌3种 2 。乳酸菌是发酵的主角，其在厌氧条件下大量繁殖占支配地位时产生大量的乳酸，抑制其他不良微生物的生长繁殖，从而制成了优质的微生物发酵饲料 3 。因此，发酵饲料中乳酸含量的高低是判断微生物发酵饲料品质优劣的一个重要指标。目前，乳酸含量的测定方法主要有羟基联苯比色法、EDTA定钙法、高效液相色谱法（HPLC酶法等，均有各自的适用范围和优缺点 4-7 。本文通过比较分析微生物发酵饲料中不同乳酸测定方法，以期得到适合于中小型饲料厂或科研单位快速、简便检测产品乳酸含量的方法。1 材料与方
8、法1.1 试验材料微生物发酵饲料由福建省龙岩市金和动物饲料有限公司提供。在规定的发酵时间内发酵完成后取样品1g，测定其乳酸含量。1.2 乳酸测定方法1.2.1羟基联苯比色法标准曲线的绘制：分别配置乳酸标准液123456 gmL-1，在比色管中分别加入乳酸标准液1 mL4.0%硫酸铜溶液0.05 mL，再加入浓硫酸6 mL，反应5 min，冷却至20 以下后，再分别于各比色管中加入1%碱溶性羟基联苯溶液0.05 mL，混合均匀，在室温下放置68 h，过夜，在570 nm下进行比色测定，绘制出标准曲线 8 样品测定：1 g发酵饲料溶解于100 mL蒸馏水中，4 000 rpm离心10 min，取上
9、清液1 mL，按标准曲线测定样品中乳酸含量（1.2.2 EDTA定钙法称取样品1 g（准确至0.0002 g）于100 mL杯中，加水80 mL，在电炉上加热至近沸，继续加热5 min（溶液不要溢出），冷却，定容至100 mL，待溶液澄清后（或过滤），吸取上清液（滤液）10 mL于锥形瓶中，加三乙醇胺10 mL、蒸馏水50 mL200 gL-1氢氧化钠溶液10 mL、盐酸羟胺0.5 g摇匀后，再加钙混合指示剂少许，立即用EDTA标准溶液0.05 moLL-1滴定，溶液呈现纯蓝色为滴定终点。乳酸的测定结果计算公式见式（1乳酸浓度（gL-1= 90.08CV1式中，V为滴定所消耗EDTA溶液体积（
10、mLC为EDTA浓度（moLL-190.08为乳酸的摩尔质量。为便于与其他方法测定结果比较，乳酸的测定结果最终转换成每克饲料乳酸含量（1.2.3乳酸脱氢酶法酶法测定乳酸含量操作步骤见表1酶法乳酸检测试剂盒购自南京建成生物工程有限公司，按照其使用说明，预先配置好酶工作液和反应显色剂（标准液和终止液试剂盒中已配好，直接使用）。取饲料样品1g溶解于50 mL蒸馏水中，4 000 rpm离心10 min，取上清液待测，蒸馏水调零，测定波长为530 nm测定结果计算公式见式（2式中，C为样品浓度mmoLL-150为样品稀释倍数。同理，乳酸的测定结果最终转换成每克饲料乳酸含量（2 结果与分析2.13种方法
11、测定发酵饲料乳酸含量分别采用羟基联苯比色法、EDTA定钙法、乳酸脱氢酶法测3种方法对同一发酵批次的微生物发酵饲料进行测定，取样3批、每批重复3次，进行统计学分析，结果见表2试 剂蒸馏水3 mmoLL-1标准液样本酶工作液显色剂混匀，37 水浴准确反应10 min终止液加样管空白管0.0210.22标准管0.0210.22测定管0.0210.22表1 酶法测定乳酸含量操作步骤mL乳酸浓度（mmoLL-12382012年第5期 饲料博览检测分析由表2可知，同一批次间和不同批次间检测，平均误差最小的方法是乳酸脱氢酶法，最差的是EDTA定钙法；对于同一批次检测结果，羟基联苯比色法和乳酸脱氢酶法检测结果
12、差异不显著（P0.05），而与EDTA定钙法差异显著（P0.05EDTA定钙法简便快速，但重复性差；HPLC法准确、灵敏；生物传感仪测定法比较准确和方便 9 。如发酵饲料生产企业有财力购置相关的设备，此方法也可作为微生物发酵饲料中乳酸含量的检测方法，检测结果可能更为真实可靠。 参 考 文 献 1 陆文清发酵饲料生产与应用技术M.北京中国轻工业出版社, 2011. 2 林标声罗建戴爱玲等微生物发酵饲料对断奶仔猪生长性能的影响J.安徽农业科学, 2010, 385: 2 378-2 380. 3 余伯良发酵饲料生产与应用新技术M.北京中国农业出版社, 1999. 4 高庆印建和穆华容等对羟基联苯法
13、测定啤酒中乳酸J.酿酒, 20056: 93-95. 5 郑志姜绍通潘丽军. EDTA定钙法测定发酵液中乳酸含量的探讨J.食品科学, 2003, 243: 102-105. 6 白冬梅班睿赵学明等反相高效液相色谱法测定米根霉乳酸发酵液中的乳酸J.色谱, 2000, 186: 527-528. 7 柳畅先度浔吴士钧酶法测定乳酸J.分析试验室, 2005, 249: 75-77. 8 梁琼鲁明波卢正东等对羟基联苯法定量测定发酵液中的乳酸J.食品科学, 2008, 296: 357-360. 9 樊永红王丽柳丹等米根霉发酵液中乳酸含量的测定方法研究J.生物技术, 2007, 171: 54-55.注
14、：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），肩标不同大写字母者表示差异极显著（P0.05提取方法羟基联苯比色法EDTA定钙法乳酸脱氢酶法准确性较好较差最好成本居中便宜昂贵操作繁简较繁琐简便简便检测时间较长适中很短测定方法羟基联苯比色法EDTA定钙法乳酸脱氢酶法乳酸含量批次11.070.012a1.180.185b0.990.008a批次20.900.018a0.990.178b0.950.008a批次30.950.020a1.260.147b0.960.006a平均误差0.0870.1400.020表2 不同测定方法测定同一批次发酵饲料的乳酸含量表3 3种方法测定发酵饲料乳酸含量应用分析39