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1、【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流分子生物学教学大纲八年制.精品文档.医学分子生物学教学大纲（临床医学八年制）课程编号：38030011课程名称：医学分子生物学学分：3总学时：56学时理论学时：40实验学时：16 先修课程要求：细胞生物学和生物化学适应专业：临床医学八年制参考教材：1. 胡维新主编医学分子生物学.北京:科学出版社. 20072冯作化主编.医学分子生物学.北京: 人民卫生出版社. 20053.(美)本杰明卢因编著.基因VIII. 北京：科学出版社. 20044. Robert F. Weaver编著. Molecular Biology(第二版). 北京：科学出
2、版社. 2002 5. Sambrook and Ruussell编著. Molecular Cloning(第三版). 西安：世界图书出版公司. 20026. 胡维新主编.医学分子生物学长沙：中南大学出版社. 20017Timothy M. Cox & John Sinclair编著. Medicine Molecular Biology. 北京：科学出版社. 20008冯作化主编.医学分子生物学.北京: 人民卫生出版社. 20019陈丙莺，陈子兴，主编. 分子生物学基础与临床. 南京：东南大学出版社. 200010. 张迺蘅主编. 医学分子生物学. 北京：北京医科大学出版社，1999一、课
3、程在培养方案中的地位、目的和任务本课程是口腔医学七年制、临床医学八年制必修基础课，分子生物学是一门从分子水平研究生命现象、生命本质及其规律的科学，近年来已在医药卫生及其它领域有着突飞猛进的发展，已成为医学生教学不可缺少的一部分。本课程的教学目的和任务，是使学生掌握分子生物学的基本理论、基本知识与基本技能，同时熟悉分子生物学在医学领域的应用。了解分子生物学的主要新进展和新技术。二、课程的基本要求1. 基本理论和基本知识1. 基本理论和基本知识（1） 了解分子生物学的发展简史和医学的关系。（2） 基因、结构基因及基因组的概念；真核基因与原核基因的结构特点；顺式作用元件的类型及特点；病毒、原核生物和
4、真核生物基因组结构特点；人类基因组结构特点。（3） 基因表达、基因表达调控、操纵子、多顺反子、反式作用因子、顺式作用元件等基本概念；原核生物基因转录起始的调控机制；真核生物转录水平的调控机制。DNA损伤与修复的概念；DNA修复的主要方式：切除修复、重组修复和跨损伤修复的概念及机制。（4） DNA双脱氧末端终止法、Southern blot杂交、Northern blot杂交、DNA芯片技术和PCR等技术原理及其应用；RT-PCR和Real-time PCR技术原理及应用。（5） 限制性核酸内切酶的概念与特点；载体的概念；质粒的特点；基因克隆的基本过程；外源基因在大肠杆菌和哺乳动物细胞中表达的基
5、本要素。（6） 蛋白质组、蛋白质组学的概念；蛋白质组学的基本研究方法：双向电泳、质谱技术。（7） 基因突变的概念；基因突变的类型及特点；基因突变的遗传学效应；常用的基因功能分析方法：转基因技术、基因敲除技术、反义技术、RNA干扰技术。（8） 基因诊断的概念及其特点；基因诊断的常用技术。（9） 基因治疗的概念、基本策略及常用载体；治疗基因的受控表达原理与方法。2、基本技能 （1） 掌握人类基因组DNA提取的原理与方法。（2） 掌握琼脂糖凝胶电泳的原理和方法。（3） 掌握碱裂解法小量提取质粒DNA的原理和电泳分析方法。（4） 掌握重组质粒DNA的酶切鉴定及电泳分析方法。（5） 掌握PCR反应的操作
6、步骤及PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测方法。三、课程的基本内容以及重点难点第一章 绪论目的要求了解：分子生物学的定义、研究对象和研究内容；分子生物学发展简史；生物遗传物质的发现；现代分子生物学的建立和深入发展；分子生物学与相关学科的关系；分子生物学在医学和生物学中的应用。讲课时数：2 学时教学内容：第一节 分子生物学的研究对象1.分子生物学的定义2.分子生物学的研究内容第二节 分子生物学发展简史1.生物遗传物质的发现2.现代分子生物学的建立3.现代分子生物学的深入发展第三节 分子生物学与相关学科的关系1.分子生物学与生物化学2.分子生物学与细胞生物学3.分子生物学与遗传学4.分子生物学与生物技术第
7、四节 分子生物学与医学未来1.分子生物学在医学和生物学中的应用2.分子生物学与基础医学 3.分子生物学和病理学 教学方法（建议）： 讲授法教学手段：多媒体教学自学内容：第二章 基因与基因组目的要求掌握：基因、结构基因及基因组的概念；真核基因与原核基因的结构特点；顺式作用元件的类型及特点；病毒、原核生物和真核生物基因组结构特点；人类基因组结构特点。熟悉：基因组学的概念；人类基因组作图；质粒、转座因子、基因家族的特征。了解：乙肝病毒、反转录病毒基因组结构特点；人类基因组计划；基因组学的研究内容。重点：基因的结构，顺式作用元件的类型及特点；病毒、原核生物和真核生物基因组结构特 点；人类基因组特点。难
8、点：基因的结构；人类基因组的结构特点。讲课时数：4 学时教学内容：第一节 基因1. 基因概念的发展2. 基因的化学本质3. 基因的概念4. 基因的结构第二节 基因组1. 病毒基因组2. 原核基因组3. 真核基因组4. 人类基因组5. 基因组学教学方法（建议）： 讲授法为主教学手段：多媒体教学第五章 基因表达的调控目的要求掌握: 基因表达、基因表达调控、操纵子、多顺反子、反式作用因子、顺式作用元件等基本概念；原核生物基因转录起始的调控机制；真核生物转录水平的调控机制。熟悉: 原核基因表达和真核基因表达的特点；原核生物基因转录终止的调控；真核生物基因组DNA水平调控的不同方式；转录后调控的不同环节
9、及意义；翻译水平和翻译后水平调控的基本环节。了解: 原核生物翻译水平的调控机制；反式作用因子的作用方式；基因表达的调控网络与协同控制。重点: 乳糖操纵子的转录调控机制；真核基因转录水平及转录后水平的调控机制。难点：原核基因操纵子的转录终止的调控机制。讲课时数：4学时教学内容：第一节 原核生物基因表达的调控1原核生物基因表达的特点2原核生物基因表达调控的机制 转录起始的调控；转录终止的调控；翻译水平的调控第二节 真核生物基因表达的调控1真核生物基因表达的特点2真核生物基因表达调控的机制 基因组DNA水平的调控；转录水平的调控；转录后水平的调控；翻译水平的调控； 翻译后水平调控第三节 基因表达的调
10、控网络与协同控制教学方法（建议）：讲授法教学手段：多媒体教学第六章 DNA损伤与修复目的要求掌握：DNA损伤与修复的概念；切除修复、重组修复和跨损伤修复的概念及机制。熟悉：真核生物诱导修复的主要机制。了解：DNA损伤的因素；DNA损伤和修复的生物学意义。重点：切除修复、重组修复和跨损伤修复的机制。难点: 真核生物诱导修复的主要机制与特点。讲课时数：2 学时教学内容：第一节 DNA损伤的原因及后果1 DNA分子的自发性损伤DNA复制产生误差；DNA的自发性化学变化；2 物理因素引起的DNA损伤紫外线照射引起的DNA损伤；电离辐射引起的DNA损伤；3 化学因素引起的DNA损伤烷化剂对DNA的损伤；
11、碱基类似物、修饰剂对DNA的损伤；DNA损伤的后果 4. DNA损伤的检测和DNA损伤相关的蛋白质第二节 DNA修复1错配修复2. 直接修复3碱基切除修复4. 核苷酸切除修复5重组修复6跨损伤修复7线粒体损伤和修复8. 基因的损伤与修复异常所致的疾病教学方法（建议）： 讲授法教学手段：多媒体教学第七章 基因结构与表达分析的基本策略目的要求：掌握：DNA双脱氧末端终止法、Southern blot杂交、Northern blot杂交、DNA芯片技术和PCR等技术原理及其应用；RT-PCR和Real-time PCR技术原理及应用。熟悉：Western blot 原理及其应用。了解：RNA酶保护试
12、验原理及应用；原位杂交技术；流式细胞术的应用；免疫组化方法的应用；其它PCR衍生技术。重点：Southern blot杂交和PCR等技术原理及应用；Northern blot杂交、DNA芯片技术、RT-PCR和Real-time PCR技术原理及应用。难点：DNA双脱氧末端终止法测序、RNA酶保护试验原理及应用及Real-time PCR原理。讲课时数：6学时教学方法（建议）： 讲授法教学手段：多媒体教学教学内容： 第一节 DNA序列分析1. 双脱氧末端终止法2. 化学降解法3. DNA序列分析的自动化第二节 核酸分子杂交技术1 核酸分子杂交的原理2 Southern印迹杂交3 Norther
13、n 印迹杂交4 斑点杂交和狭缝印迹杂交5 原位杂交6 液相杂交第三节 聚合酶链式反应1. PCR反应基本原理2. 耐热的DNA聚合酶3. PCR引物及设计原则4. PCR反应条件的优化5. 常用的PCR改进技术第四节 基因芯片和微阵列技术 1芯片制备技术 2样品制备与杂交反应 3DNA芯片技术的主要应用第五节 Western免疫印迹技术第六节 基因结构与表达分析的其它技术1.cDNA末端快速扩增技术2.PCR产物单链构象多态性检测3.限制性片段长度多态性第八章 基因工程与基因体外表达目的要求掌握：限制性核酸内切酶的概念与特点；载体的概念；质粒的特点；基因克隆的基本过程；外源基因在大肠杆菌和哺乳
14、动物细胞中表达的基本要素。熟悉：其他常用工具酶的特点；定点诱变技术原理；真核细胞转染的方法及基本原理。了解：昆虫表达系统、酵母表达系统特点；电子克隆概念。重点：基因克隆的基本过程。难点：互补筛选；转染细胞的筛选；定点诱变技术原理。讲课时数：6学时教学内容：第一节 基因克隆工具酶1.限制性核酸内切酶2.其他常用工具酶第二节 基因克隆的载体1.常用的克隆载体 质粒、噬菌体、黏性质粒、M13噬菌体、病毒载体2.表达载体 原核表达载体、真核表达载体第三节 基因克隆的基本过程1.目的基因获取2.载体的选择和准备3.DNA片段的体外连接4.重组DNA导入宿主细胞5.重组DNA的筛选与鉴定第四节 真核细胞的
15、转染1.真核细胞转染的方法与基本原理2.转染细胞的筛选第五节 基因的改造1.基因定点诱变技术2.基因定点诱变技术的应用第六节 克隆基因的表达1.大肠杆菌表达系统2.哺乳动物细胞表达系统3.其他表达系统第七节 电子克隆教学方法（建议）： 讲授法教学手段：多媒体教学第九章 蛋白质组学的研究方法和进展目的要求掌握：蛋白质组、蛋白质组学的概念；蛋白质组学的基本研究方法：双向电泳、质谱技术。熟悉：生物信息学在蛋白质组学研究中的应用；酵母双杂交技术；噬菌体表面显示技术及基于质谱的蛋白质相互作用研究方法；蛋白质芯片技术。了解：蛋白质组学的产生与发展；定量蛋白质组学；疾病蛋白质组学的概念；蛋白质组学在 疾病研
16、究中的应用。重点：蛋白质组学的基本研究方法。难点：蛋白质功能模式的研究方法。授课学时：2 学时基本内容第一节 蛋白质组学的概念及其发展简史1蛋白质组学的概念2蛋白质组学的产生和发展第二节 蛋白质组学研究方法概述1蛋白质组表达模式的研究方法2蛋白质组功能模式的研究方法第三节 蛋白质组学在疾病研究中的应用教学方法（建议）：讲授法教学手段：多媒体教学第十一章 疾病产生的分子基础目的要求掌握：基因突变的概念；基因突变的类型及特点；基因突变的遗传学效应；常用的基因功能 分析方法：转基因技术、基因敲除技术、反义技术、RNA干扰技术。熟悉：血红蛋白病的发病分子机制；突变基因的结构分析方法、基因表达异常的主要
17、分析方法的原理。了解：细胞间异常信号、细胞内因素、翻译后加工运输障碍及病原生物基因导致的疾病。重点：基因突变的类型、特点及遗传学效应；常用的基因功能分析方法。难点：疾病分子机制的研究策略。讲课时数：4 学时教学内容：第一节 基因结构改变引起疾病1基因突变的类型2基因突变的遗传效应4 结构基因变异引起疾病5 调控序列变异引起疾病第二节 细胞间异常信号导致基因表达异常 1细胞间信号异常与疾病第三节 细胞内因素导致基因表达异常引起的疾病1细胞内信号异常2异常DNA甲基化第四节 翻译后加工运输障碍引起疾病1 翻译后加工2 酪氨酸酶翻译后加工异常与白化病第五节 蛋白质降解异常引起疾病1 蛋白质降解异常2
18、 泛素-蛋白酶体途径第六节 病原生物基因引起疾病 1病原生物基因引起疾病的机理及特点第七节 疾病分子机制的研究策略1 基因结构人分析主要方法2 基因表达水平分析主要技术3 基因功能研究与疾病机制分析教学方法（建议）： 讲授法教学手段：多媒体教学第十二章 基因诊断目的要求掌握：基因诊断的概念及其特点；基因诊断的常用技术。熟悉：基因诊断技术路线和方法的选择。 了解：血红蛋白病、传染病和肿瘤的基因诊断；指纹图的应用。重点：基因诊断的常用技术。 难点：遗传病、肿瘤等疾病的基因诊断。讲课时数：4学时教学内容：第一节 基因诊断的技术和方法 1. 基因诊断概念、特点及临床意义 2. 基因诊断中常用的分子生物
19、学技术 核酸分子杂交、聚合酶链式反应、单链构象多态性、限制性片段长度多态性、单核苷 酸多态性、DNA序列测定、生物芯片 3. 基因诊断技术路线和方法的选择 直接诊断途径、间接诊断途径第二节遗传病的基因诊断1. 血红蛋白病 镰状细胞贫血病、地中海贫血第三节传染病的基因诊断 1. 病毒性疾病 2. 细菌引起的疾病第四节肿瘤的基因诊断 1. 原癌基因与抑癌基因的检测 2. 常见肿瘤的基因诊断第五节基因诊断在法医学上的应用1.指纹图教学方法（建议）： 讲授法教学手段：多媒体教学第十三章 基因治疗原理与研究进展目的要求掌握：基因治疗的概念、基本策略及常用载体；治疗基因的受控表达原理与方法。 熟悉：基因转
20、移的基本技术；基因干预的基本策略；基因治疗的应用研究。了解：基因转移的靶细胞;基因治疗的前景与问题。重点：基因治疗的基本策略及常用载体；治疗基因的受控表达原理与方法。难点：治疗基因的受控表达原理与方法。讲课时数：4学时教学内容：第一节 基因治疗的基本策略1基因置换2基因添加 3基因干预4自杀基因治疗 自杀基因系统；旁观者效应 5基因免疫治疗第二节 基因转移的基本技术1病毒介导的基因转移系统反转录病毒载体：反转录病毒前病毒的结构特点腺病毒载体腺病毒相关病毒（AAV）载体单纯性疱疹病毒(HSV)载体：HSV的特点与用途2非病毒载体介导的基因转移系统脂质体介导的基因转移技术受体介导的转移技术基因直接
21、注射技术第三节 基因转移的靶细胞 1造血细胞 2皮肤成纤维细胞 3肝细胞 4血管内皮细胞5. 淋巴细胞6. 肌肉细胞7. 肿瘤细胞8.其他细胞 第四节 基因干预1 反义RNA 反义RNA与基因表达调控；受体介导反义RNA转移技术；反义RNA的应用前景 基因内部调节机制2 RNA干扰 RNA干扰现象；RNA干扰的机制；RNA干扰的应用前景3 核酶 核酶的设计；核酶的应用1 三链DNA 三链DNA与基因表达；作用机制；技术关键；三链DNA的应用研究；体内应用面临 的问题第五节 治疗基因的受控表达 1基因内部的调节机制2基因外部的调节机制 3利用病灶微环境使治疗基因特异性表达4. 治疗基因的诱导表达
22、 Tet-Off/Tet-On基因表达调控系统的原理第六节 基因治疗的应用研究1. 遗传病的基因治疗研究2. 恶性肿瘤基因治疗研究 肿瘤基因治疗的基本策略；肿瘤基因治疗的常用方法；3. 病毒性疾病的基因治疗研究 调节机体免疫应答；抗病毒复制4. 其他疾病的基因治疗研究基因治疗的应用研究基本技术的原理与方法的原理3 病毒性疾病4 其他疾病第七节 基因治疗的前景与问题1 安全性问题2 伦理问题3. 当前存在的技术问题： 基因调控元件的选择；安全高效载体的构建和转移技术的选择；靶细胞的选择教学方法（建议）： 讲授法教学手段：多媒体教学四、实验要求1、实验目的：分子生物学实验是医学生实验技能与素质培养
23、不可缺少的一个重要环节。通过分子生物学实验的教学，不仅使学生巩固和加强课堂所学的基础理论知识，更重要的是培养学生的实验操作能力、分析问题和解决问题的能力，养成严肃认真、实事求是的科学态度和严谨的工作作风，培养学生的创新精神和创新能力。2、基本原理主要包括人类基因组DNA的提取原理、凝胶电泳基本原理、质粒DNA提取原理、限制性核酸内切酶作用原理、聚合酶链反应原理等。3、实验方式与基本要求实验方式：实验在老师的指导下，由学生自己采取两人一组完成实验操作。具体基本要求如下：实验一：人类基因组DNA提取及琼脂糖凝胶电泳分析1熟悉分子生物学实验的操作特点。2掌握人类基因组DNA提取的基本原理。3熟悉人类
24、基因组DNA提取的基本方法。4熟悉琼脂糖凝胶电泳的原理和操作。实验二：质粒DNA的提取及电泳分析1掌握碱裂解法小量提取质粒DNA的原理和方法。2掌握琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA方法。3熟悉质粒DNA提取与真核细胞核DNA提取的异同点。实验三：DNA的限制性酶切及电泳分析1掌握限制性核酸内切酶消化DNA的原理。2掌握重组质粒DNA的酶切鉴定方法。3掌握琼脂糖凝胶电泳分析酶切结果。实验四：PCR及其产物电泳分析1熟悉PCR反应的原理。2掌握PCR反应的操作步骤以及PCR反应参数的选择与优化。3掌握PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测方法。4、实验项目的设置与内容提要序号实验项目名称实验时数每组人数实
25、验类型实验要求实验类别内容提要1人类基因组DNA提取及琼脂糖凝胶电泳分析42研究创新性必修技术基础用细胞裂解液裂解细胞膜，收集细胞核，加入SDS破裂核膜，用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并从DNA上解离下来，经苯酚氯仿抽提去除蛋白质，无水乙醇沉淀DNA，75%乙醇洗涤DNA沉淀，真空干燥后，溶解于TE中即得到高分子量的DNA。然后经1.0%琼脂糖凝胶电泳分析DNA的质量。2质粒DNA的提取及电泳分析42研究创新性必修技术基础采用碱裂解法小量提取质粒DNA。首先收获过夜培养的细菌，然后通过在低盐、高pH值情况下的变性和高盐、低pH值情况下的复性，以及通过苯酚、氯仿去除蛋白质等过程将质粒DNA分离、
26、纯化。并用1.0%琼脂糖凝胶电泳分析质粒DNA。3PCR及其产物电泳分析42研究创新性必修技术基础PCR反应是在耐热的DNA聚合酶作用下，催化一对特异引物之间DNA片段合成的基因扩增技术。由变性、退火、延伸三个步骤组成一个循环周期。每个周期的产物又可作为下一周期的模板，如此循环往复，经过一定次数循环后，目的DNA分子的拷贝数大量增加。4DNA的限制性酶切及电泳分析实验考查312研究创新性必修技术基础限制性核酸内切酶能够识别双链DNA中特定的碱基顺序，EcoRI酶的识别切割顺序为 5GAATTC 3, 切割后产生3粘性末端；实验所用的重组质粒为我系构建，用EcoRI酶切割重组质粒，琼脂糖凝胶电泳
27、分析酶切结果，如果切下的片段和插入的片段基本相符，说明克隆基本成功，最后还需测序验证。五、课程学时分配内容总学时理论学时实验学时备注绪论220基因与基因组844基因表达的调控440DNA损伤与修复220基因结构与表达分析的基本策略1064基因工程与基因体外表达1064蛋白质组学的研究方法和进展220疾病产生的分子基础743基因诊断440基因治疗原理与研究进展440考试321总计564016六、考核1、考核方式：闭卷考试。2、成绩构成：成绩由理论成绩和实验成绩两部分构成。实验成绩由实验作业、 平时考查、 实验考查三部分组成。（1）理论考试：占总成绩的80。学习完成后以笔试闭卷考核的方式组织考试，成绩按百分制计算。（2）实验考试：占总成绩的20。 由实验作业20%、 平时考查20%、 实验考查60% 三部分组成。平时考查标准：组号姓名出勤衣着实验操作实验结果纪律卫生总评满勤迟到缺席优良一般不合格10.500.561.510.500.50.510一二实验考查：主要考核实验原理、实验结果、实验技能、实验关键试剂的作用等知识。七、制订执笔者： 审核者（教研室主任或研究所所长）：批准者（教学院长）：