《TLC原理及应用.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《TLC原理及应用.doc（14页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流TLC原理及应用.精品文档.吸附剂对不同物质吸附能力不同；展开剂对不同物质溶解度不同，通过展开达到分离的目的。即混合液点在薄层板上时，吸附剂对不同物质有不同程度的吸附，在用溶剂展开时，因薄层上的毛细管效应，溶剂上升，当升到原点时，混合物溶解，溶解后随着不断上升的溶剂上移于原点之上，遇到新的吸附剂又被吸附，接着又溶解、解吸，使斑点不断上移。而在上升过程中，由于有的成分吸附得牢些，即上移速度慢些，反之则快些，从而达到“差速迁移”，当展开至一定距离后，就可达到分离混合物的目的。斑点上升的高度用Rf表示：Rf= 原点至斑点中心的距离 / 原点至溶剂前
2、沿的距离, Rf1 展开剂极性越大，溶质Rf值越大（即爬的越高），但很可能降低分离能力；另外单一溶剂很难分离较复杂的混合物、根据相似相溶原理，要使用多元溶剂体系。留个邮箱吧，我有篇文章是将展开剂的选择，还不错tlc原理与技术(1)有机TLC板显色问题的讨论tlc原理与技术(2)2011-03-21 17:22:50|分类： 默认分类 阅读63 评论0 字号：大中小订阅 三）. 专属性显色剂由于化合物种类繁多，因此专属性显色剂也是很多的，现将在各类化合物中最常用的显色剂列举如下： (1)烃类 硝酸银过氧化氢 检出物：卤代烃类。 溶液：硝酸银O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮
3、稀释至200ml，再加30过氧化氢1滴。 方法：喷后置未过滤的紫外光下照射； 结果：斑点呈暗黑色。 荧光素溴 检出物：不饱和烃。 溶液：I荧光素0.1g溶于乙醇lOOml； 5溴的四氯化碳溶液。 方法：先喷(I)，然后置含溴蒸气容器内，荧光素转变为四溴荧光素(曙红)，荧光消失，不饱和烃斑点由于溴的加成，阻止生成曙红而保留荧光，多数不饱和烃在粉红色背景上呈黄色。 四氯邻苯二甲酸酐检出物：芳香烃。 溶液：2四氯邻苯二甲酸酐的丙酮与氯代苯(10：1)的溶液。 方法：喷后置紫外光下观察。 甲醛硫酸 检出物：多环芳烃。 溶液：37甲醛溶液O.2ml溶于浓硫酸l0ml。 (2)醇类 3，5一二硝基苯酰氯
4、检出物：醇类。 溶液：I2本品甲苯溶液； 0.5氢氧化钠溶液； O.002罗丹明溶液。 方法：先喷(I)，在空气中干燥过夜，用蒸气薰2min，将纸或薄层通过试液()30s，喷水洗，趁湿通过()15s，空气干燥，紫外灯下观察。硝酸铈铵检出物：醇类。溶液：I1硝酸铈铵的0.2molL硝酸溶液； N,N-二甲基-对苯二胺盐酸盐1.5g溶于甲醇、水与乙酸(128m1+25m1+15m1)混合液中，用前将(I)与()等量混合。喷板后于105oC加热5min。 香草醛硫酸 检出物：高级醇、酚、甾类及精油。溶液：香草醛1g溶于硫酸lOOml。方法：喷后于120oC加热至呈色最深。二苯基苦基偕肼 检出物：醇类
5、、萜烯、羰基、酯与醚类。溶液：本品15mg溶于氯仿25ml中。方法：喷后于110oC加热5lOmin。结果：紫色背景呈黄色斑点。(3)醛酮类品红亚硫酸检出物：醛基化合物。溶液：I0.01%品红溶液，通入二氧化硫直至无色； 0.05molL氯化汞溶液； O.05molL硫酸溶液。 方法：将I、以1：1：10混合，用水稀释至l00ml。邻联茴香胺检出物：醛类、酮类。溶液：本品乙酸饱和溶液。2，4-二硝基苯肼检出物：醛基、酮基及酮糖。溶液：I0.4本品的2molL盐酸溶液；本品O.1g溶于乙醇l00ml中，加浓盐酸lml。方法：喷溶液I或后，立即喷铁氰化钾的2molL盐酸溶液。结果：饱和酮立即呈蓝色
6、；饱和醛反应慢，呈橄榄绿色；不饱和羰基化合物不显色。绕丹宁检出物：类胡萝卜素醛类。溶液：I1%5%绕丹宁乙醇溶液； 25%氢氧化铵或27%氢氧化钠溶液。方法：先喷溶液I，再喷溶液，干燥。(4)有机酸类溴甲酚绿检出物：有机酸类。 溶液：溴甲酚绿0.1g溶于乙醇500ml和0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml。方法：浸板。结果：蓝色背景产生黄色斑点。高锰酸钾硫酸检出物：脂肪酸衍生物。溶液：见通用显色剂酸性高锰酸钾。过氧化氢检出物：芳香酸。溶液：0.3%过氧化氢溶液。方法：喷后置紫外光(365nm)下观察。结果：呈强蓝色荧光。2，6-二氯苯酚-靛酚钠检出物：有机酸与酮酸。溶液：0.1%本品的乙醇溶液。
7、方法：喷后微温。结果：蓝色背景呈红色。(5)酚类Emerson 试剂(4-氨基安替比林铁氰化钾()检出物：酚类、芳香胺类及挥发油。溶液：I4-氨基安替比林1g溶于乙醇100ml； 铁氰化钾()4g溶于水50ml，用乙醇稀释至100ml。方法：先喷溶液I，在热空气中干燥5min，再喷溶液，再于热空气中干燥5min，然后将板置含有氨蒸气(25氨溶液)的密闭容器中。结果：斑点呈橙-淡红色。挥发油在亮黄色背景下呈红色斑点。Boute 反应检出物：酚类、氯、溴、烷基代酚。方法：将薄层置有NO2蒸气(含浓硝酸)的容器中310min，再用NH2蒸气(浓氨液)处理。氯醌(四氯代对苯醌)检出物：酚类。溶液：1本
8、品的甲苯溶液。DDQ(二氯二氰基苯醌)试剂检出物：酚类。溶液：2本品的甲苯溶液。TCNE (四氰基乙烯)试剂检出物：酚类、芳香碳氢化物、杂环类、芳香胺类。溶液：0.5%1%本品的甲苯溶液。Gibbs(2，6-二溴苯醌氯亚胺)试剂检出物：酚类。溶液：2%本品的甲醇溶液。氯化铁检出物：酚类、羟酰胺酸。溶液：1%5%氯化铁的0.5molL盐酸溶液。结果：酚类呈蓝色、羟酰胺酸呈红色。(6)含氮化合物FCNP(硝普钠铁氰化物)试剂检出物：脂 肪族含氮化物，如氨基氰、胍、脲与硫脲及其衍生物，肌酸及肌酐。溶液：10氢氧化钠溶液、10硝普钠溶液、10铁氰化钾溶液与水按1：1：1：3混合，在室温至少放置20mi
9、n，冰箱保存数周，用前将混合液与丙酮等体积混合。Dragendorff(碘化铋钾试剂)试剂检出物：芳香族含氮化合物，如生物碱类、抗心律不齐药物。溶液：I碱式硝酸铋0.85g溶于10ml冰醋酸及40ml水中； 碘化钾8g溶于水20ml中。 将上述溶液I及等量混合，置棕色瓶中作为储备液，用前取储备液lml、冰醋酸2ml与水l0ml混合。结果：呈橘红色斑点。4-甲基伞形酮检出物：含氮杂环化合物。溶液：本品0.02g溶于乙醇35ml，加水至100ml。方法：喷板后置25氨水蒸气的容器中,取出后于紫外灯(365nm)下观察。碘铂酸钾检出物：生物碱类及有机含氮化物。溶液：10六氯铂酸溶液3ml与水97ml
10、混合，加6碘化钾溶液，混匀。临用前配制。硫酸高铈铵硫酸检出物：生物碱及含碘有机化物。溶液：硫酸铈1g混悬于4ml水中，加三氯乙酸1g，煮沸，逐滴加入浓硫酸直至混浊消失。方法：喷后薄层于1l0oC加热数分钟。结果：阿朴吗啡、马钱子碱、秋水仙碱、罂粟碱、毒扁豆碱与有机碘化物均能检出。Ehrlich (对二甲氨基苯甲醛盐酸)试剂检出物：吲哚衍生物及胺类。溶液：1本品的浓盐酸溶液与甲醇按1：1混合。方法：喷后板于50oC加热20min。结果：呈不同颜色的斑点。(7)胺类硝酸乙醇检出物：脂肪族胺类。溶液：50滴65硝酸于乙醇100ml中。方法：需要时120oC加热。2，6-二氯醌氯亚胺检出物：抗氧剂、酰
11、胺(辣椒素)、伯、仲脂肪胺、仲、叔芳香胺、芳香碳氢化物、药物、苯氧基乙酸除草剂等。溶液：新鲜制备的0.52本品乙醇溶液。方法：喷后薄层于110oC加热10min，再用氨蒸气处理。茜素检出物：胺类。溶液：O.1本品的乙醇溶液。丁二酮单肟氯化镍检出物：胺类。溶液：I丁二酮单肟1.2g溶于热水35ml中，加氯化镍095g，冷却后加浓氨水2ml； 盐酸羟胺0.12g溶于200ml水中。方法：将溶液I及混合，放置1天，过滤。Pauly (对氨基苯磺酸)试剂检出物：酚类、胺类和能偶合的杂环化合物。溶液：磺酸45g溶于温热的12molL盐酸45ml中，用水稀释至500ml，取lOml于冰中冷却，加45亚硝酸
12、钠冷溶液lOml，于OoC放置15min。用前加等体积10碳酸钠溶液。硫氰酸钴()检出物：生物碱、伯、仲、叔胺类。溶液：硫氰酸铵3g与氯化钴1g溶于水20ml。结果：白色至粉红色背景上呈蓝色斑点，2h后颜色消退。若将薄层喷水或放入饱和水蒸气容器内，可重现色点。1，2-萘醌-4-磺酸钠检出物：芳香胺类。溶液：本品0.5g溶于95ml水，加乙酸5ml，滤去不溶物即得。方法：喷后反应30min显色。葡萄糖磷酸检出物：芳香胺类。溶液：葡萄糖2g溶于85磷酸l0ml与水40ml混合液中，再加乙醇与正丁醇各30ml。方法：喷后于115加热l0min。 (8)硝基及亚硝基化合物-萘胺检出物：3，5一二硝基苯
13、甲酸酯、二硝基苯甲酰胺。溶液：IO5-萘胺乙醇溶液； 10氢氧化钾甲醇溶液。方法：先喷溶液I，再喷溶液。结果：呈红褐色斑点。二苯胺氯化钯检出物：亚硝胺类。溶液：1.5二苯胺乙醇溶液与0.1g氯化钯的0.2氯化钠溶液lOOml，按5：1混合。方法: 喷后置紫外光(254nm)下观察。结果：显紫色斑点。(9)氨基酸及肽类茚三酮检出物：氨基酸、胺与氨基糖类。溶液：本品O.2g溶于乙醇l00ml中。方法：喷后于110oC加热。结果：呈红紫色斑点。茚三酮乙酸镉检出物：氨基酸及杂环胺类。溶液：茚三酮1g及乙酸镉2.5g溶于l0ml冰醋酸中，用乙醇稀释至500ml。方法：喷后于120oC加热20min。1，
14、2-萘醌-4-磺酸钠检出物：氨基酸。溶液：临用前将本品O.02g溶于5%碳酸钠l00ml中。方法：喷后室温干燥。结果：不同氨基酸呈不同色点。靛红乙酸锌检出物：氨基酸与某些肽类。溶液：靛红1g与乙酸锌1g溶于95异丙醇l00ml中，加热至80oC，冷却后加乙酸1ml，冰箱保存。方法：喷后于8085C加热30min。 茚三酮冰醋酸检出物：二肽及三肽。 溶液：1茚三酮吡啶溶液与冰醋酸按5：1混合。方法：喷后于l00oC加热5min。香草醛检出物：氨基酸及胺类。溶液：I本品1g溶于丙醇50ml中; 1molL氢氧化钾溶液lml，用乙醇稀释至lOOml。方法：先喷溶液I后于110oC干燥l0min，再喷
15、溶液，于110oC再干燥l0min，于紫外光(365nm)下观察。(10)甾类香草醛硫酸检出物：甾体激素。溶液：1香草醛浓硫酸溶液。方法：喷后于105加热5min。氯化锰检出物：雌激素类。溶液：氯化锰0.2g溶于含硫酸2ml的甲醇60ml中。方法：喷后置紫外光(365nm)下观察。高氯酸检出物：甾体激素。溶液：5高氯酸甲醇溶液。方法：喷后于110oC加热5min，置紫外光(365nm)下观察。三氯化锑乙酸 检出物：甾类与二萜类。溶液：三氯化锑20g溶于乙酸20ml与氯仿60ml混合液中。方法：喷后于100oC加热5min，紫外光长波下观察。结果：二萜类斑点呈红黄-蓝紫色。对甲苯磺酸检出物：甾族
16、化合物、黄酮类与儿茶酸类。溶液：20本品的氯仿溶液。方法：喷后于100oC加热数分钟，紫外光长波下观察。结果：斑点呈荧光。氯磺酸乙酸检出物：三萜、甾醇与甾族化合物。溶液：氯磺酸5ml在冷却下加乙酸l0ml溶解。方法：喷后于130oC加热5l0min，置紫外光长波下观察。结果；斑点显荧光。(11)糖类茴香胺、邻苯二酸试剂检出物：碳氢化合物。溶液：1.23g茴香胺及1.66g邻苯二酸于l00ml 95乙醇中的溶液。方法：喷雾或浸渍。结果：己糖呈绿色、甲基戊糖呈黄绿色、戊糖呈紫色、糖醛酸呈棕色。四乙酸铅2，7一二氯荧光素检出物：甙类、酚类、糖酸类溶液：I2四乙酸铅的冰醋酸溶液； 12，7一二氯荧光素
17、乙醇溶液。 取溶液I、 各5ml混匀，用干燥的苯或甲苯稀释至200ml，试剂溶液只能稳定2h。方法：浸板。邻氨基联苯磷酸检出物：糖类。溶液：O.3g邻氨基联苯加85磷酸5ml与乙醇95ml。方法：喷板后llOoC加热1520min。结果：斑点呈褐色。苯胺二苯胺磷酸检出物：还原糖。溶液：4g二苯胺、4ml苯胺与20ml 85磷酸共溶于200ml丙酮中。方法：喷后于85加热l0min。结果：产生各种颜色。1，4-己醛糖、低聚糖呈蓝色。双甲酮磷酸检出物：酮糖。溶液：双甲酮(5，5-二甲基环己烷-1，3-二酮)10.3g溶于90ml乙醇与l0ml 85磷酸中。方法：喷板后于110oC加热1520min
18、。结果：日光下观察，白色背景上呈黄色斑点，紫外光长波下呈蓝色荧光。联苯胺三氯乙酸检出物：糖类。溶液：0.5g联苯胺溶于l0ml乙酸，再加10ml40三氯乙酸水溶液，用乙醇稀释至l00ml。方法：喷后置紫外光下照射15min。结果：斑点呈灰棕-红褐色。对二甲氨基苯甲醛乙酰丙酮检出物：氨基糖类。溶液：I. 5ml 50氢氧化钾溶液与20ml乙醇混匀，取此溶液0.5ml，加乙酰丙酮0.5ml与正丁醇50ml的混合液l0ml，此两种溶液均需新鲜配制，临用前混合； . 1g对二甲氨基苯甲醛溶于30ml乙醇中，再加30ml浓盐酸，需要时此溶液可用正丁醇180ml稀释。 方法：先喷I后于105oC加热5mi
19、n，再喷，然后于90干燥5min。结果：斑点呈红色。(12)杀虫剂 甲基黄检出物：氯化杀虫剂及抗菌化合物。 溶液：O.1g甲基黄于70ml乙醇中，加25ml水并用乙醇稀释至l00ml。方法：喷板后于室温干燥，并在无滤光片紫外光下照射5min。 结果：黄色背景上呈红色斑点。 溴四氯化碳 检出物：有机磷杀虫剂。 溶液：10溴的四氯化碳溶液。 方法：薰溴蒸气。 锰水杨醛 检出物：有机硫代磷杀虫剂。 溶液：I100mg氯化锰溶于100ml 80乙醇； 溶解1.3g 2-肼喹啉于小量热乙醇中，溶1g水杨醛于5ml乙醇并加12滴冰醋酸，合并两溶液并回流30min，冷却后析出水杨-2-醛-2-喹啉腙沉淀，并
20、用乙醇重结晶。用50mg此衍生物溶于100ml乙醇中。 方法：等量溶液I及混合后，喷板。 二苯胺氯化锌 检出物：氯化杀虫剂(DDT、CPCA、氯-DDT、克菌丹、甲氧氯、毒杀芬)。 溶液：二苯胺及氯化锌各0.5g溶于100ml丙酮中。 方法：喷后200oC加热5min。 溴荧光素硝酸银 检出物：杀虫剂。 溶液；I5溴的四氯化碳溶液； 1ml 0.25荧光素的二甲基甲酰胺溶液，用乙醇稀释至50ml； 1.7g硝酸银溶于5ml水中，加2-苯氧基乙醇，用丙酮稀释至200ml。 方法：展开后的薄层置试液I容器中薰30s，取出先喷溶液，再喷溶液，再置紫外光下7min。 (13)黄酮类 乙醇胺二苯硼酸盐
21、检出物：黄酮类。 溶液：I. 1乙醇胺二苯硼酸盐的甲醇溶液； . 5聚乙二醇的乙醇溶液。 方法：先喷溶液I，再喷溶液使荧光稳定，再在紫外光长波下照射2min。 结果：紫外灯下观察荧光。 三氯化锑 检出物：黄酮类。 溶液：10三氯化锑的氯仿溶液。 方法：喷板。 结果：紫外光长波下呈荧光。 三氯化铝 检出物：黄酮类。 溶液：1三氯化铝乙醇溶液。 方法：喷板。 结果：紫外光长波下显黄色荧光。 Benedict(硫酸铜枸橼酸钠)试剂 检出物：含邻二羟基的黄酮类及香豆精类。 溶液：1.73g 硫酸铜(CuS04?5H20)：17.3g 枸橼酸钠及10g 无水碳酸钠溶于水并稀释至1 00ml。 方法：喷板
22、。结果：紫外光长波下观察，含邻二羟基的化合物，斑点荧光减弱或猝灭。 (14)含硫化合物 硝普钠检出物：巯基-SH基(半胱氨酸)、双硫化物、-s-s-基(胱氨酸)及精氨酸。溶液：I. 1.5g 硝普钠溶于5ml 2molL盐酸溶液及95ml甲醇中，加10ml 25氢氧化铵溶液，过滤，即得； . 2g氰化钠溶于5ml水，用甲醇稀释至100ml。方法：先喷溶液I、再喷溶液。结果：巯基化合物呈红色；精氨酸由橙变为灰蓝色；双硫化物在黄色背景上显红色。 FCNP(硝普钠铁氰化物)试剂检出物：脂肪族含硫化台物，如氨基氰、硫脲及其衍生物。 溶液：10氢氧化钠溶液、10硝普钠溶液，10铁氰化钾溶液与水按1：1：
23、1：3混合，用前与等体积丙酮混合，用时新鲜配制。 3氯化铁磺基水杨酸 检出物：硫代磷酸酯类。 溶液：I1氯化铁的80乙醇溶液； 1磺基水杨酸的80乙醇溶液， 方法：薄层先置溴蒸气中10min后，喷溶液I，干燥15min，再喷溶液。 结果：紫色背景上呈白色。 、 ： 叠氮化碘 检出物：含硫氨基酸、硫化物与青霉素。 溶液：叠氮碘溶液-叠氮钠3g 溶乎100ml 0.05molL碘溶液中(新鲜配制，固体叠氮碘有爆炸性)。 靛红硫酸 检出物：噻吩衍生物。 溶液；0.4g靛红溶于100ml浓硫酸中。方法：喷板后120oC加热。 结果：呈不同颜色。 (15)类脂化合物 磷钼酸 检出物：胆酸、类脂化物、脂肪
24、酸及甾类。 溶液：250mg 磷钼酸于50ml乙醇中。 方法：唆后予120oC加热。 罗丹明6G 检出物；类脂化物。 溶液：lg 罗丹明6G溶于100ml丙酮中 方法：喷后置紫外光长波下观察。 溴百里酚蓝 检出物：类脂化物。 溶液：O04g溴百里酚蓝溶于100ml O01molL氢氧化钠溶液中。 (16)阳离子 双硫腙 检出物：金属离子。 溶液：20mg双硫腙溶于100ml丙酮中，置棕色瓶中于冰箱内保存。 方法：上述溶液喷板后再喷25氢氧化铵溶液。 红氨酸 (二硫代草酰胺) 检出物：重金属离子。 溶液：0.5红氨酸乙醇溶液。 方法：先喷上述溶液，稍干后置薄层于氨蒸气中。 茜素 检出物：众多阳离
25、子、稀土及铀。 溶液：茜素乙醇饱和溶液。 方法：喷板后直接放入氨蒸气中。 亚铁氰化钾 检出物：Fe3+、Cu2+、Cl、Mo、V、W离子。 溶液：新配制的2亚铁氰化钾溶液。 二苯卡巴肼 检出物：Ag+、pb2+、Hg2+、Cu2+、Sn2+、Mn2+、Zn2+、Ni2+、Co2+及Ca2+离子。 溶液：I12二苯卡巴肼乙醇溶液； 25氢氧化铵溶液。 方法：先喷溶液I，再喷溶液。 结果：Ni2+呈蓝色、Co2+呈橙褐色、Zn2+呈红紫色，Ag+、pb2+、Cu2+、Sn2+、Mn2+呈褐色、乙酸汞加成物于80oC加热片刻，斑点呈蓝色。 (17)阴离子 硝酸银 检出物：含硫阴离子、砷酸盐、亚砷酸盐
26、磷酸盐、亚磷酸盐及除氟外的卤素。 溶液：0.10.5molL硝酸银溶液中加氨水直至沉淀溶解。临用前配制、储存会形成易爆物质。 方法：喷后于110120oC加热l0min，必要时置紫外光下l0min。 硝酸银氢氧化铵荧光素 检出物：卤素离子。 溶液：I1g硝酸银溶于l00ml O.5molL氢氧化铵溶液中； 1g荧光索溶于l00ml乙醇中。 方法：先喷溶液I，稍干，再喷溶液。 钼酸铵亚硫酸钠 检出物：硫化物、硫代硫酸盐与磷酸盐。 ： 溶液：I5钼酸铵的lmolL硫酸溶液； 5亚硫酸钠溶液。 方法：先喷溶液I，再喷溶液，于105加热30min。 结果：硫化物及硫代硫酸盐呈深蓝色，磷酸盐呈蓝灰色。
27、番木鳖碱 检出物：溴酸盐、硝酸盐、氯酸盐。 溶液：I0.02番木鳖碱的lmolL硫酸溶液； 2molL氢氧化钠溶液。 方法：先喷溶液I，再喷溶液。 结果：溴酸盐、氯酸盐呈血红色，硝酸盐呈橙黄色。（四）.其他常用与专用显色剂：碘： 适用于不饱和或者芳香族化合物 配制方法：在100ml 广口瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒。 或者在瓶中，加入10g 碘粒，30g 硅胶高锰酸钾 适用于含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛 配制方法：1.5g KMnO4 + 10g K2CO3 + 1.25mL 10% NaOH +200mL 水. 使用期3 个月磷钼酸(PMA) 广谱 配制方法：10 g of 磷钼酸
28、+100 mL 乙醇 紫外灯 适用于含共轭基团的化合物，芳香化合物硫酸铈： 生物碱 配制方法：10%硫酸铈(IV)+15%硫酸的水溶液氯化铁苯酚类化合物 配制方法：1% FeCl3 + 50% 乙醇水溶液. 桑色素(羟基黄酮) 广谱, 有荧光活性 配制方法：0.1% 桑色素+甲醇茚三酮 适用于氨基酸 配制方法：1.5g 茚三酮+ 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸二硝基苯肼(DNP) 适用于醛和酮 配制方法：12g 二硝基苯肼+ 60mL 浓硫酸+ 80mL 水+ 200mL乙醇香草醛(香兰素) 广谱 配制方法：15g 香草醛+ 250mL 乙醇+2.5mL 浓硫酸溴甲酚绿 适用于羧
29、酸，pKa<=5.0 配制方法：在100ml 乙醇中，加入0.04g 溴甲酚绿，缓慢滴加0.1M的NaOH 水溶液，刚好出现蓝色即至。钼酸铈 广谱 配制方法：235 mL 水+ 12 g 钼酸氨+ 0.5 g 钼酸铈氨+ 15 mL浓硫酸茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1 广谱 配制方法：135 乙醇+ 5 mL 浓硫酸+ 1.5 mL of 冰醋酸+ 3.7 mL茴香醛，剧烈搅拌，使混合均匀.茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2 适用于萜烯，桉树脑(cineoles), withanolides, 出油柑碱(acronycine) 配制方法：茴香醛:HClO4:丙酮:水(1:10:20:80)经常需要利
30、用溶剂的极性大小，对展开剂的极性予以调整。四、薄层层析法具体操作注意事项（一）铺板铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶G:水=1：23，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。通常，板的质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。（二）点样尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1
31、微升的点样管。这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。（三）展开剂配制选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管，移
32、液管应符合计量认证要求，尽管多数时候这不是必须的。（四）展开系统的饱和一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽量轻、快。 温湿度的控制温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响，估计主要是影响薄层板的吸附能力，导致选择性（容量因子）的变化，湿度应根据实际情况确
33、定。温度控制使用空调器或冰柜，湿度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度的硫酸。（五）显色：喷显色剂显色最重要是有好的雾化器五、TLC切记的要点（一）、某种样品在这种展开剂中只显示一个点，并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。因此在寻找展开剂时，多尝试几种比例不同，成分不同的展开剂。展开剂的极性太小，点分不开，极性太大，也分不开.一般以目标产物的Rf值在0.3左右为最佳。 （二）、点不能点得太浓,否则容易重叠,不易判断,因为如果两个点相近的话,一浓就变成一个点了。 （三）、板上点的展开的清晰程度和溶剂的极性和物质在该溶剂中的溶解性有关，只有两者比较合适了，才能有一个交好的分离效果。 选择适当的展开
34、剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷己烷苯乙醚THF乙酸乙酯丙酮乙醇甲醇&NBSP; 使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：Petroleum ether/Ethyl acetate, Petroleum ether/Acetone, Petroleum ether/Ether, Petroleum ether/CH2Cl2, CH2Cl2/ethyl acetate, ethyl acetate/ MeOH, CHCl3/ethyl acetat
35、e 展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。我在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了所有的溶剂用来两两组合后，最后才找到petroleum ether/THF这类不常见的混合溶剂。 一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例,达到最佳效果，如果没有分开的迹象，最好是换溶剂。 对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水，吡啶
36、等碱性物质来中和硅胶的酸性。当然，选择所添加的碱性物质，还必须考虑容易从产品中除去，氨水无疑是较好的选择。 这里要特别强调的一点是：分离效果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系。不同厂家生产的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细程度，酸性强弱不同，从而导致产品在某个厂家的硅胶中分离效果很好，但在另一个厂家的就不行。溶剂的含水量和杂质含量对分离效果都有明显的影响。温度对分离效果影响也很明显。我们实验室没有空调，我在实验过程发现，在夏天分离相同的产品，所需的淋洗剂极性要比在冬天小很多，这一点大家也是可以理解的。 鉴于此，使用的硅胶，不用时一定要密封，防止吸潮。TLC所用的硅胶板一定要保存在干燥器里面，或使
37、用前在红外烘箱里干燥一段时间。 在利用TLC跟踪反应时，在点板的时候往往是反应体系的混和溶液点一个点A，每种难挥发的原料各点一个点B,C, D等等，然后所有的原料和反应体系的混合溶剂再共同点一个混合点X，这些点在板上的位置如图所示： 这样的好处是展开后可以清楚地看见每个点的位置，把A这个点展开后的各个层份的点与B,C,等原料比较，从而判断原料消失没有，点混合点X的目的在于，方便观察，因为有时候，板展开后，各点的位置有些变形，或者由于边缘效应等等，使得判断不易。 利用TLC判断物质的纯度时，往往要和NMR相结合，因为某种样品在这种展开剂中只显示一个点，并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。但有趣
38、的是，由于H1NMR可鉴别的纯度也就在95%左右，有时候H1NMR现示较纯的东西，一点板就会发现有几个点。所以，两者要结合使用。但是自己以前的样品，则可以只通过点板来判断纯度。 （四）纠正以下几个错误：1、 “由于层析柱和薄板的不同，即使两者使用的硅胶都相同，但是在把TLC分析得到的展开剂用在柱层析时，也显得极性偏大，所以要稀释一倍”，如果使用手工铺的TLC摸条件，则不必将洗脱剂的洗脱强度减小一倍，这种说法仅适用于使用预制高效板（HPTLC）的情况。2、 “对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。当然，选择所添加的碱性物质，还必须考虑容易从产品中除去，氨水无疑是较好的选择”，这应区分是柱层还是TLC，对于柱层添加二乙胺比较好，对于分析TLC添加三乙胺或用氨水薰（不是加到展开剂里）都可以。