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1、植物石蜡切片技术植物石蜡切片技术一、材料的选择一、材料的选择 1选择植物的哪一部分。选择植物的哪一部分。 2选择有代表性的材料。选择有代表性的材料。 3在选择植物器官时，首先确定利用何种在选择植物器官时，首先确定利用何种切面。切面。二、固定二、固定 杀死：指用一种或多种化学药品，迅速地终结杀死：指用一种或多种化学药品，迅速地终结生物组织的生命。这就要求杀死剂要有强的渗生物组织的生命。这就要求杀死剂要有强的渗透力，快的渗透速度。透力，快的渗透速度。 固定：在杀死的基础上，把组织或细胞按生活固定：在杀死的基础上，把组织或细胞按生活状态固定下来，使其在制片的过程中都不发生状态固定下来，使其在制片的过
2、程中都不发生任何变化。任何变化。 保存：材料经杀死、固定后，需要把组织或细保存：材料经杀死、固定后，需要把组织或细胞的结构长久保存下来，不致于发生溶解等现胞的结构长久保存下来，不致于发生溶解等现象。象。常用的固定液：常用的固定液：福尔马林醋酸酒精固定液（福尔马林醋酸酒精固定液（FAA）：）：F福尔马林：福尔马林：5mlA冰醋酸：冰醋酸：. 5mlA酒精酒精: 90ml细嫩材料用细嫩材料用50%的酒精，一般材料用的酒精，一般材料用70%酒精。酒精。适用范围：一般的根、茎、叶、花药、脂肪等适用范围：一般的根、茎、叶、花药、脂肪等切片。切片。固定时间：固定时间：224小时即可，亦可作长久保存。小时即
3、可，亦可作长久保存。三、冲洗三、冲洗所谓冲洗，就是用洗涤剂把材料中的固定液洗所谓冲洗，就是用洗涤剂把材料中的固定液洗去，以便进行染色。去，以便进行染色。 老材料、茎、根等用老材料、茎、根等用50%的酒精洗三次，最的酒精洗三次，最少少1小时，每次最少小时，每次最少10分钟，细嫩材料必须用分钟，细嫩材料必须用水洗，洗三次，共水洗，洗三次，共2小时，每次最少小时，每次最少20分钟，分钟，间隔时间可以不等。间隔时间可以不等。四、染色四、染色 细嫩材料（茎尖、根尖、幼叶初生结构）必须细嫩材料（茎尖、根尖、幼叶初生结构）必须用苏木精染色（苏木精对酒精处理过的材料不用苏木精染色（苏木精对酒精处理过的材料不染
4、色）。用酒精洗的可用番红染色。染色）。用酒精洗的可用番红染色。 苏木精染色苏木精染色1224小时；番红染色最少小时；番红染色最少24小时，小时，可以延长。可以延长。五、脱水五、脱水目的：目的：（1）完全除去材料中的水分，使其它药品能渗）完全除去材料中的水分，使其它药品能渗透到材料中去。透到材料中去。（2）使材料变硬，切片时不变形。）使材料变硬，切片时不变形。程序：程序： 50% 60% 70% 80% 85% 90% 95% 100% 100%2h2h2h2h2h2h2h1h1h六、透明六、透明目的：目的：1、除去材料中的脱水剂，便于封藏。、除去材料中的脱水剂，便于封藏。2、增加组织中的折光率
5、，便于在显微、增加组织中的折光率，便于在显微镜下观察。镜下观察。3、使包埋剂容易渗入植物组织中，便、使包埋剂容易渗入植物组织中，便于包埋及切片。于包埋及切片。程序：程序：酒精酒精 二甲苯二甲苯 纯二纯二 甲苯甲苯 26h26h七、浸蜡七、浸蜡 用道生液（用道生液（dowsons solution)浸蜡，其配方如浸蜡，其配方如下：下： 石蜡石蜡. .1份份 二甲苯二甲苯. .2份份 纯酒精纯酒精3份份&程序：程序：1、材料放入道生液后，加塞、材料放入道生液后，加塞45C下下24h。2、去塞：、去塞：24h温度慢慢升高，最后达温度慢慢升高，最后达56C3、经三级纯蜡杯，每次、经三级纯蜡杯，每次0.
6、5-1h。八、包埋八、包埋包埋：用石蜡将材料包埋于叠好的纸盒中。包埋：用石蜡将材料包埋于叠好的纸盒中。方法：见演示。方法：见演示。分割蜡块、粘蜡块：略分割蜡块、粘蜡块：略九、切片九、切片 把木块固定于切片机的夹物部，使材料把木块固定于切片机的夹物部，使材料的切面与刀口平行，材料的纵轴与刀口的切面与刀口平行，材料的纵轴与刀口垂直。垂直。 调整切片机的厚度，切片时左手握毛笔，调整切片机的厚度，切片时左手握毛笔，右手摇切片机，材料便以连续的蜡带出右手摇切片机，材料便以连续的蜡带出现，等到达到一定的长度后，放入蜡盒现，等到达到一定的长度后，放入蜡盒中。中。十、粘片、展片及烘干十、粘片、展片及烘干滴一滴
7、蛋白甘油于载玻片上，用净小指滴一滴蛋白甘油于载玻片上，用净小指涂匀。涂匀。将蜡带放入将蜡带放入45C的水中展片，然后把材的水中展片，然后把材料粘于载玻片上。料粘于载玻片上。将载片放于将载片放于36C40C的烘箱中烘干，的烘箱中烘干，约一天即可。也可烤干。约一天即可。也可烤干。十二、脱蜡十二、脱蜡 在染色缸内进行，需经过二甲苯在染色缸内进行，需经过二甲苯15min,二甲苯二甲苯25min 。十三、脱水、染色及透明十三、脱水、染色及透明 滴注纯酒精、滴注纯酒精、95%酒精各酒精各45秒，苯胺秒，苯胺固绿染色约固绿染色约12分钟，再滴注分钟，再滴注95%酒精、酒精、纯酒精、纯酒精、1/2纯酒精纯酒精1/2二甲苯，各约二甲苯，各约45秒，再经一次二甲苯，最后置二甲苯秒，再经一次二甲苯，最后置二甲苯缸中透明约缸中透明约5分钟。分钟。十四、封片、贴标签：十四、封片、贴标签： 加拿大树胶封固后贴标签。加拿大树胶封固后贴标签。