《乳品抗生素残留的免疫学快速检测技术及分析研究进展 .docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《乳品抗生素残留的免疫学快速检测技术及分析研究进展 .docx（14页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、精品名师归纳总结可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结摘要 1Abstract1 Keyword2目录关键词 1前言 21、乳品中抗生素残留的缘由 32、乳品中抗生素残留的危害 43、抗生素残留现状 44、抗生素残留的主要检测方法 5可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结4.1 微生物检测法 54.2 理化检测方法 54.3 免疫法 65、免疫学快速检测方法65.1 放射免疫法 65.2 酶联免疫吸附法 75.3 酶联免疫受体法 75.5 胶体金免疫层析法 76、新型免疫学快速检测方法 86.1 免疫传感器 86.2 蛋白芯片 96.3 表面等离子体共振 96.4 快速检测
2、试纸条 97、终止语 108、参考文献 119、致谢 13可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结摘要 ： 近年来，随着食品工业的不断进步，各类食品层出不穷。但食品安全问题却频频发生，特殊是乳品抗生素残留问题，引起了广大消费者的热切关注。如何快速检测乳品中抗生素，降低抗生素残留，排除抗生素对消费者带来的健康威逼，成为乳品企业关注的焦点问题。因此，我们要尽快开发或引进先进的抗生素检测方法，从源头杜绝抗生素，保证乳品的安全。本文归纳了抗生素残留的缘由及危害，具体的介绍了有关乳品抗生素残留免疫学快速检测方法，对乳品抗生素残留的前景进行了展望。关键词： 乳品 抗生素残留免疫学快速检测方法Abs
3、tract :In recent years, along with the advance of the food industry, all kinds of food. But food safety problems occur frequently, especially the milk antibiotic residues, caused the earnest attention ofconsumers. Howto quicklydetecting antibiotics in milk, reduce antibiotic residues, eliminating an
4、tibiotic threat to the health of consumers, become the focus of the dairy companies. Therefore, we should develop as soon as possible or the introduction of advanced detection method of antibiotics, antibiotic and eradicate the source, to ensure the safety of dairy products. This paper summarizes th
5、e reasons and harms of the antibiotic residues, detailed introduces the related rapid immunological milk antibiotic residues detection method, the prospects of antibiotic residues in milk productsKeyword ： ThedairyAntibiotic residuesimmunologyRapid detection methods可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结前言随着经济的进展，
6、人民生活水平的提高，乳品在人们膳食结构中所占的位置越来越重要，人均占有量已达到 21.7kg1。乳品养分素种类齐全，除含有全部的必需氨基酸和丰富的蛋白质外，仍含有部分重要的维生素和必需的微量元素，易被人体吸取。其含有的活性物质能提高人体的免疫力、增强人体体质，被公认为大自然赐予人类最抱负、最接近于母乳的完善自然食品在我国，随着乳制品工业的快速进展，畜牧业也进展迅猛， -内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、氯霉素类、磺胺二甲基嘧啶等抗生素在乳畜饲养业中作为饲料添加剂和动物药物在预防和治疗动物疾病方面的广泛应用，造成乳品中抗生素的残留，给消费者健康带来了威逼，特殊是近年来显现的一系列乳品安
7、全问题，严峻打击了消费者对乳品的信心，抗生素残留就是乳品安全问题中较为突出的一个，已成为公众关注的焦点。 2因此，寻求快速、安全的抗生素残留检测技术成为我国关注的焦点问题。可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结1、乳品中抗生素残留的缘由我国的奶牛饲养主要以自营牛场模式为主，农户饲养奶牛治理意识低下以及经济条件所限，造成奶源质量低、污染物残留量高，同时，兽药治理不严格，使得奶牛乳房炎和其它感染性疾病都明显高于发达国家，因此我国的乳品的抗生素残留问题就特殊严峻。乳品中抗生素的来源最终要追寻到原料生产及其流通过程。其中造成乳品中抗生素残留的缘由有：美国食品和药品治理局 FDA ）调查结果说
8、明，对泌乳期奶牛用药不当是造成乳中抗生素残留的重要缘由。 3 违反国家规定，长期小剂量添加抗生素到饲料中。此类抗生素在动物体内需要一段时间才能完全排除体外，极易在动物体内蓄积，因此造成抗生素残留。给患病奶牛使用过的挤奶工具和贮奶设备，未经完全清洗和消毒就用于其他健康牛只，造成牛奶中抗生素的交叉污染。个别饲养户和经营商 ,为了防止牛奶酸败变质而非法在其中掺入抗生素 ,以使牛奶通过验收而保证其经济利益。利用抗生素治疗乳牛临床型、隐性型乳房炎和子宫内膜炎，其中乳管注药法就是让药物直接注入乳房，通过乳腺管进入某个已感染区进行消炎，乳牛在接受这种治疗后，乳中的药物残留期可延缓到停药 3 5d后。42、乳
9、品中抗生素残留的危害虽然抗生素对人类疾病的预防和治疗以及兽医临床中发挥了庞大的作用， 但长期饮用残留有抗生素的乳品，可造成药物积存，当其达到肯定浓度后，就会对人体产生毒副作用。抗生素对人体会产生以下毒副作用：长期饮用含有抗生素乳品的人易产生耐药性，一旦患者再使用同种抗生素治疗将很难奏效。如消费者长期饮用 含有抗生素的乳品，等于长期服用小剂量的抗生素。对抗生素有过敏体质的人 服用残留有抗生素的牛乳后 ,会发生过敏反应。正常人体内寄生着大量菌群，可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结假如长期饮用含有抗生素的乳品，极易导致微生物平稳破坏，人与动物易发感染性疾病。其他危害有，链霉素可引起肾损
10、害和听力神经受损，四环素引起肝损害，氯霉素残留会对人造成致命后果，引起再生障碍性贫血等。5一些性质稳固的抗生素被排泄到环境中会造成环境污染，破坏生态平稳。抗生素可严峻影响干酪、黄油、发酵乳的起酵和后期风味的形成。6 抗生素的残留会导致乳品品质降低，降低产量和质量，给生产者带来庞大的经济缺失。3、抗生素残留现状一项对我国几个大城市如西宁、南宁、广州、杭州、泉州、北京等城市乳制品质量的检测调查结果显示，在近八百份乳品采样中，抗生素残留超标居不合格工程第一位。 7 从超标的情形看，超标率达10%以上的药物有 10种，超标率达20%以上的药物有8种。乳品中残留的抗生素主要为青霉素类药物和磺胺类药物，其
11、中 CEPA 和PEN-V 残留最为严峻，检出率达 35%以上。 其次是 A 肝、PEN-G、CIF、SD 和SMZ，检出率达 20%以上。 8 我国过去对乳品中抗生素残留卫生指标无明文规定，直到 2001年10月，农业部发布实施了无公害食品生鲜牛乳行业标准，对新食品安全鲜牛 乳的卫生指标明确了 抗生素不得检出 。9 但对于这一行业标准，我国目前并没有严格执行，致使乳品中抗生素残留问题始终未能得到解决，以致引起人们对 乳品安全问题的担忧，并成为越来越受关注的焦点。从以上情形可以看出，我 国乳品中抗生素残留现状并不乐观，有关部门应加强对乳品生产的治理，并对 乳品中的抗生素等药物残留进行检测和监控
12、，以保证人们饮用乳品的卫生和安 全。4、抗生素残留的主要检测方法目前，国内外用于检测乳及乳制品中残留抗生素的方法很多，依据检测原理和使用的仪器可分为：微生物检测法，理化检测法和免疫检测法等。10可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结4.1 微生物检测法微生物检测法是较为广泛应用的最经典方法，测定原理是依据抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用 ,对样品中抗生素残留进行定性或定量检测。其优点是操作简洁，牢靠，费用低，无需高级试验设备，一般试验室及养殖场都能使用。由于牵涉到微生物的培育，所以检测时间相对较长，不能实现定量检测，不能满意某些抗生素最低限的检测。微生物检测法主要有 TTC法
13、氯化三苯基四唑氮法）、 BSDA法嗜热脂肪芽孢杆菌纸片法）、 PD 法 纸片法） 及 STOP法拭子法）等 114.2 理化检测方法理化检测方法是依据抗生素分子理化性质对其进行分别和检测的方法，如色谱法、荧光法、毛细管电泳、色谱质谱联用技术等，理化检测方法分别速度快、效率高和自动化程度高，能检测抗生素的具体含量，敏锐性较高，结果精确，但待检样品需经一系列的预处理，繁琐费时，仍必需有相应的价格昂贵的仪器设备。一般在大型试验室使用，适合于精确测定。4.3 免疫法免疫分析法的基本原理是以抗原或半抗原和抗体特异性结合为抗原 抗体复合物的免疫反应为基础的生化测试技术。这种检测方法可以具体分析是哪种抗生素
14、，由于抗体除了可以针对某类抗生素所共有的结构产生特异抗体外，也可以针对共有结构上的不同修饰基团即不抗生素） 而产生特异性抗体。免疫分析技术最突出的优点是操作简洁、速度快、分析成本低。另外，有些抗生素，如磺胺类抗生素由于采纳微生物检测方法缺乏灵敏度和特异性，所以只有用免疫法才能实现对其快速检测。125、免疫学快速检测方法免疫学快速检测是基于抗原 -可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结抗体特异性反应的检测方法。其分类方法不一而足,一般可分为放射免疫分析、酶免疫分析、荧光免疫分析、发光免疫分析、胶体金免疫分析、仪器免疫分析 和无标记免疫分析等。 1959年建立的放射免疫分析被认为是免疫分
15、析的建立标志13 ,并获得了 1977年的诺贝尔生理学或医学奖。5.1 放射免疫法 RIA ）放射免疫法是一种应用放射性同位素的敏锐性和抗原抗体反应的特异性结 合而成的体外微量分析方法。 RIA 法的优点是灵敏、特异、简便易行、用样量少等，常可测至 pmol 。缺点是使用放射性物质有肯定污染，但由于只是在测试样品时才加入标记的同位素示踪物，且示踪物的放射性强度极低，因此一般不 会对试验者造成辐射损耗。该方法特异性强，且与其他多种抗生素均无交叉反 应。因此，该法能达到牛奶中四环素类抗生素残留的检测要求。5.2 酶联免疫吸附法 ELISA ）ELISA 法是将待测目标物通过固定的抗体或抗原的特异性
16、捕获而结合于固相支持物表面，再将酶标记的抗体或抗原与之反应，利用酶在液相反应中催化 底物显色来达到测定待测目标物含量的目的。最常用的标记酶为辣根过氧化物 酶和碱性磷酸酶。 ELISA 方法把抗原抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用有机的结合起来，目标物既可是抗原，也可是抗体。虽然ELISA 法是目前讨论较多的抗生素挑选检测方法，具有敏锐性高，特异性强，检测量大，无需复杂的样品前处理等优点。但也存在一些问题，如因其载体的材质和包被技术的 局限，在其包被载体孔内 一般为 96孔酶标板），需要大剂量的抗原或抗体，才能达到良好的包被成效。且对显色时间要求较高，结果只能一次性判读等。14ELISA 试
17、剂盒是日前奶牛场和牛奶公司使用最广泛、快速、灵敏的检测青霉素类抗生素残留的方法。可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结5.3 酶联免疫受体法 ELRA ）免疫受体法是目前国际法规认可的一类专利检测法。免疫受体检测法是酶联免疫分析 ELISA）的一个变换形式，基本原理是将特定抗生素类作为靶子， 让固定在肯定基质上的受体捕获。大多数检测法利用竞争性原理，使样品内的抗生素与内置抗生素标志物竞争结合受体，然后进行冲洗和显色。该方法的检测限和灵敏度均与 ELISA 方法相当。5.4 荧光免疫法 , 将金标抗吸附于玻璃纤维棉上, 一端与固定有兽药小分子蛋白质偶连物 检测线和二抗 质控线 的硝酸纤
18、维素膜 NC膜相连 , 另一端与样品垫相连。而后连同其他所需的吸水纤维、支撑材料、掩盖材料等依据设计工艺进行制作和组装 , 制成快速检测试纸。检测样品中不含兽药小分子, 金标抗体就会与兽药小分子蛋白质偶连物反应而被部分截获, 金颗粒富积而显现明显直观的红色条带 , 未完全结合的金标抗体至质控线时同样会显现红色条带。检测样品中含有兽药小分子 , 兽药小分子与兽药小分子蛋白质偶连物竞争性结合金标抗体 , 检测线不显现或显现很弱的红色条带。快速检测试纸检测小分子物质残留, 检测时间仅需数分钟。胶体金快速诊断技术凭借其便利快捷、灵敏度高、稳固性强等特点，在兽可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳
19、总结药残留检测领域中被快速推广，是牛奶抗生素检测商业化应用较广泛的一种检测方法。胶体金免疫层析技术是近些年进展起来的一项新型的检测、诊断技术， 属于依据免疫反应原理开发的检测手段中的一种。但与其他免疫分析法不同的是， 其他多数的免疫检测方法往往需要昂贵的分析设备和仪器，并且要配备专业人员操作检测。虽然这些检测方法具有很高的灵敏度和特异性，但却由于检测设备价格昂贵、操作复杂、 专业性强等缘由， 而无法满意现场大规模检测的需求。 而胶体金免疫层析分析技术除了采纳免疫反应原理外，仍结合了色谱层析的优点，有效突破了上述其他免疫检测方法的不足，具有快速、灵敏、 简洁、 便利等特点。6、新型免疫学快速检测
20、方法6.1 免疫传感器免疫传感器是生物传感器的一种，近年来已取得快速进展 15-17 。传感器的生物敏锐层与复杂样品中特定的目标分析物之间通过抗体与抗原之间的识别反应，产生一些物理化学信号的变化，这些变化通过不同原理的传感器转换成其次信号电信号），经放大后显示或记录。利用兽药与特异性抗体结合反应特性研制出的免疫传感器，检测灵敏，携带便利，可用于相应兽药的快速定性定量检测。6.2 蛋白芯片蛋白质芯片又称蛋白质微阵列protein microar-ray）是在基因芯片之后进展起来的，其原理是在固相支持物表面高密度排列蛋白质探针，可特异的捕获样品中分子，然后用 CCD 相机或激光扫描系统猎取信息，最
21、终用运算机进行定性定量分析。该方法在检测牛奶中抗生素残留上有潜在的庞大作用，可以实现样品用量少，无需样品前处理，高通量，快速检测的目的。可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结6.3 表面等离子体共振 SPR）表面等离子体共振 SPR）是一种物理光学现象。 SPR 对金属表面电介质的折射率特别敏锐，不同电介质其表面等离子体共振角不同，同种电介质，其附着在金属表面的物质的量不同，就SPR 的响应强度不同。基于这种原理的生物传感器通常将一种具特异识别属性的分子即配体固定于金属膜表面，监控溶液 中的被分析物与该配体的结合过程。在复合物形成或解离过程中，金属膜表面 溶液的折射率发生变化，立即被
22、SPR 生物传感器检测出来。该方法优点是无需对样品进行标记处理，可真正实现无标记，在线检测。6.4 快速检测试纸条日前，一项新型食品安全快速检测技术乳制品及畜禽组织中关键抗生素残留快速检测卡问世，让消费者面对乳、畜禽制品等食品的时候能更加放心。该工程填补了国内多种类抗生素类药物同时检测的技术空白，总体达到国际先进水平。 18据介绍，该工程是通过应用单克隆抗体技术和胶体金免疫层析技术自主开发出了- 内酰胺类 &四环素类抗生素快速检测试纸条、 - 内酰胺酶快速检测试纸条、氟喹诺酮类快速检测试纸条和磺胺类快速检测试纸条共四项技术成果。科研人员表示，该项成果的制造性在于：采纳特异性的抗原抗体反应与免疫
23、层析分析技术相结合，大大提高了检测方法的特异性。- 内酰胺类 &四环素类试纸条产品的开发，满意了市场上对头孢类、青霉素类和四环素类同时检测的需求，实现了一卡对多类药物的检测，使产品检测才能从原先的只能检测单一药物到检测一类药物，始终进展到现在的可以同时检测几类药物。此外，该成果检测牛奶样品的试纸条全部采纳裸条进行检测，并配有微孔条，不同于传统的胶体金试纸条。由于微孔条的孔面积比较大，微孔中的金标抗体试剂与被检测的牛奶样品能够充分反应，能明显提高对样本检测的灵敏度。该项成果已通过国家食品质量监督检验中心、中国检科院综合检测中心、北京市兽药监察所、北京出入境检验检疫局以及北京市理化分析测试中心等检
24、可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结测机构复核验证。其实际样本检测后采纳仪器方法进行确证，阳性符合率为100%。7、终止语乳品中抗生素残留是涉及人类健康的公共卫生问题。为了保证人们的身体健康，增强我国乳制品的国际竞争力。第一，我们要重视和加强检测工作，研发快速、便携、简洁和经济的并能对多种抗生素残留进行检测的分析技术，以提高国产试剂盒的研制才能 19 ，其次，要修订、制订乳制品标准，在将抗生素的检测纳入国标体系的基础上，进一步与国际标准接轨，在防控奶制品抗生素 残留过程中，食品安全监督关口同样要严把商品准入市场关，严格食品质量报备制度， 20 杜绝不符合标准的奶流入市场，提高我国奶
25、品的质量，符合WTO的质量技术要求，促进我国奶业向国际化方向进展。寄期望于通过对牛奶中抗生素残留的检测而保证乳制品的安全只是“治 标”，应从抗生素残留产生的源头加以掌握，从而实现对牛奶中抗生素残留的 “标本兼治”。 可从以下几个方面着手。进展高效、低残留的动物专用饲用抗生素是大势所趋。研发替代抗生素的绿色饲料添加剂，如寡糖、微生态制剂、中草药制剂。在乳制品生产中应用危害分析与关键掌握点: 9-10.2 VIEIRA T S W J, RIBEIRO M R, NUNES M P,et al.Detection of antibiotic residues in pasteurized milk
26、 samples from Parana State, Brazil. J.Semina Ciencias AgrariasLondrina,2021,332:791-7953 JONES GM. On -farm test for drug residues in milkJ. Virgina Tech., 1995,25 : 401-404.4 吴瑕，张兰威 .牛乳中抗生素残留及其检测方法的讨论进展J.分析与检测， 2004，30:174-1766 马兆瑞, 祝战斌, 卡尔#莱金特 . 乳和乳制品中残留抗生素的检测方法 J.中国乳品工业 ,2003,314:37-407 王伟 . 乳与乳制
27、品中抗生素残留检测方法的讨论进展J.科技向导，2021，33：239-2408 张彩红 索 宝 李正洪等 . 原料奶中抗生素残留及快速检测方法 J.当代畜禽养殖业， 20217）： 33-369 中华人民共和国农业部 .无公害食品德业标准 S . 2001.可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结1 0Wang S, Zhang HY, Wang L, et al. Analysis of sulphonamide residues in edible animal products: A review. Food Additives And Contaminants, 2006, 2
28、34）: 362-384.11 GB/T4789.27-2021.12 于见亮，李开雄，贺家亮.牛乳中抗生素的残留及其掌握计策J .中国食物与养分， 2006:1648-1649.14 李周敏 , 方惠群 , 许丹科 . 牛奶中残留抗生素免疫检测方法讨论进展 J. 生物技术通报 ,202111： 66-7215 Haasnoot W, Cazemier G, Koets M, et al. Single biosensor immuno- assay for the detection of five aminoglycosides in reconstituted skim- med mil
29、k. Analytica Chimica Acta, 2003, 4881）: 53-60.16Park IS, Kim N. Development of a chemiluminescent immunosensorforchloramphenicol. Analytica Chimica Acta, 2006, 5781）19-24.17Loomans EE, Van WiltenburgJ, Koets M,et al.Neaminas an immunogen for the development of a generic ELISA detecting gentamicin, k
30、anamycin, and neomycin in milk. J Agric Food Chem, 2003, 51A-0419 沈永聪，李守军，杨林 .牛奶中抗生素残留检测技术进展J.畜牧兽医科技信息， 2006:62-67可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结9、致谢经过几个月的劳碌，本次毕业论文已经接近尾声，作为一名专科生，由于缺乏体会，难免有很多考虑不周全的的方。这次论文的顺当完成，第一要感谢我的论文指导老师岳峰，是他的尽心指导与帮忙才能让我顺当的完成本文。期间，岳老师给我提出很多建议，让我能集思广益。老师渊博的学问及谦逊宽厚的处事态度必让我受益终生。另外，要感谢高校三年传授给我学问的老师们，是他们的训练让我懂得很多最终写下本文，最终感谢学校给我们供应的资源，让我可以参考。最终，感谢我的同学们三年来对我的帮忙，感谢我的亲人对我的支持。在此论文完成之际，谨向全部关怀我支持我的老师、同学和亲人表示我最真诚的感谢！可编辑资料 - - - 欢迎下载