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1、精选优质文档-倾情为你奉上附件一：贵州大学“大学生创新创业训练计划”项目申请书（2012 年）项目名称：提高古尼虫草多糖物质的研究项目类别：创新训练、创业训练、创业实践 项目负责人： 专业名称： 生物科学类 指导教师： 申报单位： 生命科学学院 申报日期： 2012年3月30日 贵州大学教务处填写要求1填写申请书前，请认真查阅关于做好2010年校级、国家级大学生创新性实验计划项目组织申报工作的通知的要求。2申请书按照要求，逐项认真填写，填写内容必须实事求是，表达明确严谨。空缺项要填“无”。3格式要求：申报书中各项内容以Word文档格式填写；表格空间不足的，可以扩展或另附纸张；均用A4纸双面打印
2、，于左侧装订成册。4凡选择性栏目，请在相应的等之上画“P”。5联系单位：教务处实践教学管理中心6联系电话：一、基本情况项目名称提高古尼虫草多糖物质的研究项目类型创新训练项目 创业训练项目 创业实践项目项目来源自立项目 教师科研课题的子项目 其它项目类型实验研究 软件制作 以实验为手段的其他类型经费来源学校资助 学院资助 导师课题资助 企业资助经费额度2500元项目实施时间起始时间：2012 年 04 月 完成时间：2013 年04 月团队角色姓名年级学院专业联系电话E-mail主持人成员指导教师姓名承担课程微生物遗传学、昆虫病原微生物资源及其利用、昆虫病理学及病原微生物利用方向专题讨论等主要研
3、究方向蛹虫草菌种选育及虫草素中试生产工艺研究主要成果科研项目、教改项目、发表文章、指导大学生创新、竞赛等立项或奖励（填写项目不超10项）（3）ZL4.8 红曲协同发酵提高蛹虫草子实体和虫草菌素的产量（4）9.X 提高蛹虫草固体培养基中虫草菌素含量的方法（公开号：CN A）（5）0.5 一种提高蛹虫草液体发酵虫草菌素产量的方法(公开号：CN )（6）4.9 刺梨涂膜保鲜剂的制备与低温保鲜配套工艺（公开号：CN A）（7）9.4 利用酒糟生产畜禽健康养殖绿色饲料添加剂的方法(公开号：CN )（8）2.6 高纯度虫草菌素分离提纯的方法(公开号：CN )1贵州省科技进步三等奖（1项）6.2005年贵州
4、省优秀青年科技人才7.2007年贵州省省管专家二、立论依据2-1项目研究内容简介多糖广泛存在于动物、植物和微生物细胞壁中，它毒性小、安全性高、功能广泛，具有免疫调节、抗肿瘤 、降血糖、降血脂、抗病毒、抗炎症、抗氧化、抗突变、抗菌、抗衰老等生物活性。古尼虫草Cordyceps gunnii （Berk.）Berk. 是虫草菌属中一种大型虫草，主产于澳大利亚、新西兰和我国的贵州、湖南和安徽等省份。具有镇静、镇痛、调节机体免疫力、抗癌、增强记忆等多种药理作用（何劲等，2009）。古尼虫草多糖是古尼虫草的主要活性物质，具有抗癌、调节机体免疫力、抗氧化、抗衰老、增强记忆等生理活性。本项目，拟通过培养条件
5、的优化，对古尼虫草中多糖的含量进行研究，找出提高古尼虫草中多糖的含量的最优组合条件，为古尼虫草的研究开发利用提供科学依据。2-2项目实施的目的、意义（社会调查情况、文献查阅情况、现状分析及独特认识）多糖广泛存在于动物、植物和微生物细胞壁中，是由醛基和酮基通过糖普键连接而成的高分子聚合物，也是构成生命的四大基本物质之一。它毒性小、安全性高、功能广泛，具有非常重要和特殊的生理活性。某些多糖，如纤维素和几丁质，可构成植物或动物骨架；淀粉和糖原等多糖可作为生物体储存能量的物质；有些多糖通过共价键与蛋白质构成蛋白聚糖发挥多种生物学功能，如作为机体润滑剂、识别外来组织的细胞、血型物质的基本成分等。自从20
6、 世纪 5 0 年代发现真菌多糖具有抗癌作用以来,陆续发现多糖类化合物具有免疫调节、抗肿瘤 、降血糖、降血脂、抗病毒、抗炎症、抗氧化、抗突变、抗菌、抗衰老等生物活性。古尼虫草Cordyceps gunnii （Berk.）Berk. 是虫草菌属中一种大型虫草，主产于澳大利亚、新西兰和我国的贵州、湖南和安徽等省份。梁宗琦（1983，1985）教授首次分离、确证其无性型为古尼拟青霉Paecilomyces gunnii Z.Q.Liang。古尼虫草具有镇静、镇痛、调节机体免疫力、抗癌、增强记忆等多种药理作用（何劲等，2009）。古尼虫草古尼虫草多糖是古尼虫草的主要活性物质，具有抗癌、调节机体免疫力
7、、抗氧化、抗衰老、增强记忆等生理活性。具体的分述如下。抗癌。贵州大学梅德强和文庭池等（2006）证实，古尼拟青霉菌丝体多糖MPPG可明显降低肿瘤细胞的免疫抑制作用，间接提高免疫细胞活性，起到抗肿瘤作用。李义勇等(2009)发现古尼虫草在12株供试虫草抗肿瘤活性中表现突出的 2株虫草之一 (包括古尼虫草、戴氏虫草和高雄山虫草等)。李淑芳等用小鼠证实古尼拟青霉，对淋巴内瘤180( S180)、子宫颈癌14 (U14)及肝癌实体型均有明显抑制作用，肿瘤抑制率均大于30%；体外抗癌实验结果亦表明，其能显著降低肿瘤活细胞率。古尼拟青霉水-醇提取液能使小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率、吞噬指数显著增高，能明显
8、增强巨噬细胞的吞噬能力；能使处于免疫抑制状态小鼠的体液免疫功能得以恢复正常。古尼拟青霉菌丝体提取液有诱生及促诱生干扰素的作用，发挥此作用的主要有效成分是多糖；其胞外多糖和解聚后的胞内多糖具有免疫抑制的生物活性。Zhu, ZY（2009）研究表明古尼虫草水溶性多糖有较好的抗癌作用。调节免疫力。肖建辉等（2005）也证实古尼虫草多糖解聚后能明显提高免疫活性古尼拟青霉能显著增强机体的非特异性和特异性免疫功能，对某些过敏反应又有免疫抑制作用，双向调节免疫功能，调节的药化成分可能与多糖组分有关（何劲等，2009）。抗氧化。Zhenyuan ZHU（2011）分离出一种水溶性多糖CPS50-I，用D-半乳
9、糖造模的老鼠模型实验，结果表明其具有显著的抗氧化活性。抗衰老。刘安军（2008）研究表明古尼虫草多糖可提高小鼠脑组织和血清中 SOD ( P0.01 ) 和 GSH-Px ( P 0.01 ) 活力，明显抑制小鼠脑组织和血清中MDA (P0.01 ) 的形成。古尼虫草多糖有很好的抗衰老作用.增强记忆。李淑芳（1991）、张永明（2007）等先后采用动物模型 ( 记忆巩固障碍与记忆再现障碍模型，进行跳台、避暗和迷宫试验)，小鼠皮下给药或灌胃方式，证明古尼拟青霉水溶性提取液、多糖和黄酮均有改善和提高小鼠记忆的功能。其原因可能是古尼多糖和黄酮能够减缓小鼠海马神经细胞凋亡，改善脑供血量，提高大脑蛋白质
10、与超氧化歧化酶含量，降低脑中丙二醛含量等作用有关。目前，对古尼虫草的培养研究很少，仅几篇关于古尼虫草菌丝体的培养研究，还未见对古尼虫草主要活性成分古尼虫草多糖的培养研究。本项目，拟通过培养条件的优化，对古尼虫草中多糖的含量进行研究，找出提高古尼虫草中多糖的含量的最优组合条件，为古尼虫草的研究开发利用提供科学依据。参考文献：1施松善, 王顺春. 多糖生物活性研究进展J. 生命科学,2011,23(7):662-670.2肖建辉, 虫草发酵及其代谢产物的分离与生物活性研究D.上海:华东理工大学,2010.3梁宗琦.中国真菌志第三十二卷虫草属M.北京:科学出版社,2007.4 Zhenyuan ZH
11、U, Chuanling SI, Yueru ZHONG, Changmei ZHU, Jiaping Zhou. The purification and antioxidative activities in D-galactose-induced aging mice of a water-soluble polysaccharide from Cordyceps gunnii (berk.) Berk. Mycelium. Journal of Food Biochemistry. 2011, 35 :303-322.5 Zhu, ZY; Si, CL; Zhang, YM., Pur
12、ification and antitumor activities of a water-soluble polysaccharide isolated from Cordyceps gunnii (berk.) Berk. mycelium, PLANTA MEDICA，2009，75 (9)，942-943,.6梅德强,文庭池,梁宗琦.古尼拟青霉菌丝体多糖( MPPG )对肿瘤细胞产生免疫抑制因子的影响 J. 贵州大学学报,2006 , 23 ( 2) : 191-195 .7何劲,雷帮星,文庭池,等.古尼拟青霉的毒理及药用价值研究概况J. 贵州农业科学,2009, 37(1):87 8
13、9.8肖建辉,梁宗琦,胡锡阶,等.古尼虫草多糖及其解聚物的免疫活性J.免疫学杂志, 2005, 2 1(1) :51-53,58.9李义勇,章卫民,张亚雄.虫草的抗菌抗肿瘤活性研究进展J. 微生物学杂志,2009, 29(6):65-69.10刘安军,祝长美,朱振元,等. 古尼虫草多糖对衰老模型小鼠的影响J. 现代食品科技.2008,24(3):201-203.11李淑芳,鲍淑娟,韩君勇,等古尼拟青霉药理作用研究古尼拟青霉对记亿的促进作用J.贵阳医学院学报.1991,16 (1)：45-46 12张永明古尼虫草的益智作用及其活性物质的相关性研究D.贵阳:贵州大学, 2007. 13张倩,张永明
14、,陆卫群,等. 古尼虫草多糖改善小鼠学习记忆作用的研究J. 营养学报，2007, 29(4):393-395,400 .三、项目研究基础与保障3-1项目研究与实施基础贵州大学生化工程中心是省级重点生化中试基地，2006年6月列入国家教育部“西南特色药用生物资源开发利用教育部工程研究中心”建设项目。拥有国内较先进的研究开发实验室：生物活性成分分离及检测技术研究室，配有较完善先进的研究开发及检测仪器设备：HPLC分析型和制备型、紫外可见分光光度计、真空旋转蒸发器、专用分离柱、超滤装置、微波提取器等20余台件。正在筹建细胞培养室、动物实验室等，有二氧化碳培养箱、小鼠自主活动测试仪等，能完成细胞、动物
15、、组织器官等不同水平的药理实验。实验室长期从事虫草的分类、人工培养、活性物质检测、药理等方面的研究，具备实施本项目所需要的实验条件。3-2学院、指导教师可提供的条件保障指导老师所在的实验室，具有HPLC分析型和制备型、紫外可见分光光度计、真空旋转蒸发器、专用分离柱、超滤装置、微波提取器等20余台件。有二氧化碳培养箱、小鼠自主活动测试仪等，能完成细胞、动物、组织器官等不同水平的药理实验。实验室长期从事虫草的分类、人工培养、活性物质检测、药理等方面的研究，具备实施本项目所需要的实验条件。指导教师所在的研究团队主要是从事虫草的研究工作，完全掌握了本研究所需要的各种实验技术，因此也具备了开展本研究所需
16、要的工作环境，所以可以指导好学生完成本项目，取得项目预期成果。四、项目研究实施方案4-1项目研究的目标、内容和拟解决的关键问题一、目标提高古尼虫草中多糖的含量，找出培养其最优培养条件。二、内容1.文献资料的查阅，准备。2.古尼虫草菌株的搜集。菌株是整个实验的前体基础，有好的菌株会给后续实验打下良好的基础。3.古尼虫草的培养。采用固体或液体发酵培养。用单因素法依次研究不同氮源、碳源，无机盐、生长因子等营养因子对古尼虫草中多糖的含量的影响，找出最适氮源、不同碳源，无机盐、生长因子。再通过正交实验优化生产古尼虫草中多糖各营养因子的最佳配比。4.多糖的检测。（1）葡萄糖标准曲线的建立。（2）多糖这制备
17、。古尼虫草菌丝体低温烘干，60目粉碎，3热水提取，减压浓缩，乙醇沉淀，冲洗，得到古尼虫草多糖。（3）含量测定：用苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法检测三、拟解决的关键问题 1.有合适的菌株，这是整个实验的基础。 2.接种必须注意无菌操作。 3.多糖的检测。4-2项目研究计划、技术线路、进展安排等实施方案（文献查阅、社会调查、实验方案设计、组织设备和材料、实施实验、分析处理数据、研制开发、撰写论文或研究报告、结题和答辩、项目鉴定、成果推广或论文发表、其他等，按所需执行环节填写）本项目计划1年完成。具体计划及预期结果如下：2012年1月至2012年2月：1.项目所需文献资料、仪器设备、药品试剂等相关研究工
18、作的前期准备。2.菌种搜集。2012年3月至2012年9月：古尼虫草多糖的含量提高优化培养，找出其的最佳培养条件。2012年10月至12月：撰写科学论文，在国内核心期刊发表论文1篇。五、预期成果成果研究形式：论文、设计、产品研制、软件开发、专利、研究报告等，至少选其中一项填写在国内核心期刊发表论文1篇,毕业论文23篇。六、经费预算支出科目金额（元）预算根据及理由资料费200资料复印、打印试剂费1300培养虫草所需的试剂、检测剂等论文版面费1000用于发表论文总计2000七、审查意见指导教师意见 指导教师签名： 年 月 日学院意见 负责人签名、公章： 年 月 日学校意见 负责人签名、公章： 年 月 日八、申请者承诺我保证上述填报内容的真实性。如果获得资助，我与本项目组成员将严格遵守学校的有关规定，在不影响课程学习的同时，保证项目研究工作的时间，并按计划认真开展研究工作，在项目研究过程中或结束时，接受学校对本项目的中期检查和结题验收，并按时提交工作总结和结题报告。申请者（签名）： 年 月 日推 荐 书 推荐人签名： 年 月 日注：此表由具有副高以上职称的教师（非指导教师）填写专心-专注-专业