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1、项目七 微生物染色 及显微形态观察技术微生物检验技术微生物检验技术显微技术1项目七 微生物染色及显微形态观察技术染色技术2项目七 微生物染色及显微形态观察技术了解微生物的各种染色方法及其原理、用途；掌握普通光学显微镜的结构及基本原理。知识目标知识目标项目七 微生物染色及显微形态观察技术能够正确选择、使用各种染色方法完成工作任务能够正确使用普通光学显微镜进行微生物的形态观察，并进行合理保养。能力目标能力目标项目七 微生物染色及显微形态观察技术微生物是一些形体微小、结构简单低等生物。由于微生物所具有的特殊性，因此需要采用有别于对动植物研究的特殊的一些实验方法。背景知识背景知识一、显微技术显微镜的种
2、类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。图图7-1 7-1 光学显微镜的构造光学显微镜的构造二、染色技术是借助物理因素和化学因素的作用而进行的。影响染色的其它因素，还有菌体细胞的构造和其外膜的通透性。（一）染色的基本原理（一）染色的基本原理二、染色技术用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合，因细菌的蛋由质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料(如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等)使其着色。（二）染料的种类和选择（二）染料的种类和
3、选择二、染色技术染色方法包括单染色法和复染色法两类。单染色法即只用一种染料对细菌着色。此法手续简便，但一般只能显示菌体的形态，功能较单一。复染色法是使用两种及两种以上染料对细菌染色。常用的方法有革兰氏染色法和抗酸染色法等。（三）染色方法（三）染色方法二、染色技术1.简单染色法 2.革兰氏染色法 3.芽孢染色法 4.鞭毛染色法 5.荚膜染色法 6.霉菌的染色（三）染色方法（三）染色方法二、染色技术【任务验收标准】1.了解普通光学显微镜的构造和工作原理；2.掌握普通光学显微镜的使用方法；3.掌握显微镜的保养方法。任务任务7-1 7-1 普通光学显微镜的使用普通光学显微镜的使用二、染色技术【任务完成
4、条件】1.金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)及大肠埃希氏菌(Escherichia coli)的染色涂片；2.显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸等。二、染色技术【工作任务】每位学生独立完成以下操作：1.正确取放显微镜2.用低、高倍镜观察细菌的形态3.用油镜观察细菌的形态二、染色技术【任务指导】（一）显微镜的使用（一）显微镜的使用1.观察前的准备 2.低倍镜观察 3.高倍镜观察4.油镜观察二、染色技术（二）显微镜用毕后的处理（二）显微镜用毕后的处理 1.上升镜筒，取下玻片。2.清洁显微镜 3.搁置物镜 4.去除细菌涂片上的香柏油 二、染色技术【报告内容】1.简述普通光学显微
5、镜的构造及工作原理；2.简述普通光学显微镜的使用过程及保养方法；3.分别绘出你在低倍镜、高倍镜和油镜下观察到的金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏菌的状态，包括在三种情况下视野中的变化，同时注明物镜放大倍数和总放大率。二、染色技术7-2-1 7-2-1 细菌的简单染色法细菌的简单染色法【任务验收标准】1.掌握微生物涂片、简单染色的基本技术；2.初步认识细菌的形态特征；3.巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。 任务任务7-27-2细菌的染色及形态结构观察细菌的染色及形态结构观察二、染色技术【任务完成条件】1.枯草杆菌、 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌；2.吕氏碱性美蓝染液（或草酸铵结晶紫染液）、齐氏石炭
6、酸复红染液 ；3.显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）、擦镜纸、生理盐水等 。二、染色技术【工作任务】每位学生独立完成以下操作任务：1.微生物涂片的基本操作；2.细菌的简单染色操作；3.观察制片并画图。二、染色技术【任务指导】（一）细菌的简单染色操作（一）细菌的简单染色操作（二）清理（二）清理 图图7-2 7-2 染色过程示意图染色过程示意图 1.加水 2.挑菌涂片 3.固定 4.加染色液 5.水洗 6.吸干二、染色技术【报告内容】1.根据观察结果，绘出两种细菌的形态图；2.简述细菌简单染色的主要步骤。二、染色技术7-2-2 7-2-2 细菌的革兰氏染色法细菌的革兰氏染
7、色法【任务验收标准】1.了解革兰氏染色的原理；2.掌握细菌的革兰氏染色的操作要点。二、染色技术【任务完成条件】1.大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌；2.草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95乙醇、0.5番红复染液；3.载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、染色缸、接种针等。二、染色技术【工作任务】每位学生独立完成以下操作任务：1. 微生物涂片的基本操作；2. 革兰氏染色操作；3.观察制片并画图。二、染色技术【任务指导任务指导】（一）革兰氏染色操作（一）革兰氏染色操作 （二）注意事项（二）注意事项 二、染色技术【报告内容】1.结果：在你所作的革兰氏染色制片中，大肠杆菌和枯草芽孢杆菌各染成何色？
8、它们是革兰氏阴性菌还是革兰氏阳性菌？2.根据观察结果，绘出两种细菌的形态图。二、染色技术7-2-37-2-3细菌的荚膜及芽孢染色细菌的荚膜及芽孢染色【任务验收标准】1.掌握细菌荚膜染色的操作要点；2.掌握细菌芽孢染色的操作要点。二、染色技术【任务完成条件】1.培养35天的胶质芽孢杆菌、培养36小时的苏云金杆菌或者枯草杆菌；2.用滤纸过滤后的绘图墨水、复红染色液、黑素、6%葡萄糖水溶液、1%甲基紫水溶液、甲醇、香柏油、二甲苯、5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液；3.载玻片、玻片搁架、小试管（75mm10mm）、烧杯（300mL）、滴管、玻片搁架、接种环、镊子、擦镜纸、显微镜等。二、染色技术【工
9、作任务】1.细菌荚膜染色制片的制作及观察；2.细菌芽孢染色制片的制作及观察。二、染色技术【任务指导】（一）细菌的荚膜染色（一）细菌的荚膜染色1.负染色法2.湿墨水法 3.干墨水法二、染色技术（二）细菌的芽孢染色（二）细菌的芽孢染色1.实验操作2.注意事项 二、染色技术【报告内容报告内容】1.绘出胶质芽孢杆菌的形态图，并注明各部位的名称2.绘出苏云金杆菌或者枯草杆菌的芽孢和菌体的形态图。二、染色技术7-3-17-3-1酵母菌的形态观察酵母菌的形态观察【任务验收标准】1.了解自然存在的酵母菌及其形态结构、出芽生殖方式2.学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法。任务任务7-3 7-3 酵母菌、霉菌的
10、染色及形态结构观察酵母菌、霉菌的染色及形态结构观察二、染色技术【任务完成条件】1.酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、热带假丝酵母(Candidatropicalis)斜面菌种；2.PDA培养基3. 0.05美蓝染色液(以pH 6.0的0.02mol/L磷酸缓冲液配制)、碘液、0.04的中性红染色液； 4.显微镜、载玻片、擦镜纸、盖玻片、接种环等。二、染色技术【工作任务】1.1.观察酵母菌个体形态观察酵母菌个体形态以小组为单位制取菌悬液，每位学生独立完成酵母菌的活体染色观察及死亡率的测定。2.2.观察自然状态的酵母菌观察自然状态的酵母菌以小组为单位培养酵母菌，每位学生独
11、立完成观察任务。二、染色技术【工作任务】1.1.观察酵母菌个体形态观察酵母菌个体形态以小组为单位制取菌悬液，每位学生独立完成酵母菌的活体染色观察及死亡率的测定。2.2.观察自然状态的酵母菌观察自然状态的酵母菌以小组为单位培养酵母菌，每位学生独立完成观察任务。二、染色技术【任务指导】( (一一) )酵母菌形态观察酵母菌形态观察 1酵母菌的活体染色观察及死亡率的测定 死亡率（死亡细胞数死活细胞总数）死亡率（死亡细胞数死活细胞总数）100%100%2酵母菌液泡系的活体观察 3酵母菌细胞中肝糖粒的观察 4自然状态下的酵母菌观察（二）注意事项（二）注意事项 通过微加热增加酵母的死亡率，易于观察死亡细胞。
12、二、染色技术【报告内容】1.绘出你所观察到的数个酵母菌细胞，示观察到的结构；2.记录并计数酵母菌的死亡率 (原始记录及计算结果)二、染色技术7-3-2 7-3-2 霉菌的形态观察霉菌的形态观察【任务验收标准】了解霉菌形态，掌握微生物载玻片湿室培养方法。二、染色技术【任务完成条件】1.产黄青霉、黑曲霉、黑根霉、总状毛霉等斜面菌种2.半固体PDA培养基、乳酸苯酚固定液、棉蓝染色液、20甘油；3.透明胶带、剪刀、培养皿、载玻片、U形玻棒搁架、盖玻片、圆形滤纸片、细口滴管、镊子、显微镜、接种环等。二、染色技术【工作任务】1.霉菌载玻片湿室培养：可4人合作，每人制作一种霉菌载玻片湿室培养片；2.曲霉、青霉、根霉、毛霉形态观察；3.根霉假根的观察。二、染色技术【任务指导】（一）实验准备（一）实验准备 1.霉菌的载玻片湿室培养 2.黑根霉假根的培养（二）镜检观察（二）镜检观察 （三）注意事项（三）注意事项 二、染色技术【报告内容】绘制毛霉、根霉、青霉、曲霉镜检形态图，并示各部。Thank you