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1、2015本科医学毕业论文范文题目：红芪多糖的纯化及初步构造鉴定论文摘要：目的研究红芪多糖的分离纯化及初步的构造。方法采用超声辅助提取多糖，比拟Sevag法、三氯乙酸法和三氯乙酸-正丁醇法脱蛋白的效果，并用GC、TLC及IR分析多糖的初步构造。结果三氯乙酸-正丁醇法脱蛋白，经SephadexG-25柱层析分离纯化后得红芪多糖2(HPS-2)，HPLC确定为均一多糖，糖含量为98.2%，糖组成分析表明其含有鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖，摩尔比为.3.22.716.12.。结论HPS-2是一种以苷键为主的吡喃型杂多糖。论文关键词：红芪多糖;薄层色谱;构造鉴定红芪(RadixHedysari
2、)，为豆科岩黄芪属植物多序岩黄芪HedysarumpolybotrysHand.-Mazz的枯燥根，为甘肃特产珍贵药材，在临床上主要用于补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌。红芪中含有氨基酸、有机酸、-谷醇、红芪多糖、微量元素等诸多的生物活性物质1。近年来研究发现，红芪多糖的活性成分具有加强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、治疗糖尿病等作用1，2。十分是我们近几年的研究发现，经7%乙醇沉淀部分药理作用尤为明显。由于多糖为大分子化合物，分离纯化比拟困难，而蛋白质的脱除是后期构造鉴定的关键之一，为了提高多糖的得率、纯度及活性，本实验对这部分多糖进行了脱蛋白方法的研究，结合TLC、GC、IR等方法对HPS-
3、2的构造进行了初步的分析，以期为红芪多糖的进一步研究提供理论基础。1材料与仪器红芪，购自甘肃武都;牛血清白蛋白、考马斯亮蓝G-25(西安周鼎国生物技术有限责任公司);单糖对照品(中国药品生物制品检定所);SephadexG-25(上海长征制药厂);硅胶G(青岛海洋化工厂);其它试剂均为分析纯。CR22G型离心机(日本日立);UV-17型紫外仪(日本岛津);GC-Clarus5型气相色谱仪(美国PerkinElmer公司);红外光谱仪(NicoletNEXUS67);BS-1A自动部分收集器、HL-2恒流泵(上海沪西分析仪器厂有限公司);美国Waters6型高效液相色谱仪，配Waters2414
4、型示差折光检测器。2方法2.1红芪多糖的提取纯化道路其流程如下。2.1.1提取红芪药材粉碎超声脱脂热水提取3次合并提取液减压浓缩后离心取上清液乙醇沉淀有机溶剂洗剂透析减压浓缩冷冻枯燥得粗多糖HPS。2.1.2纯化粗多糖液脱蛋白、色素SephadexG-25柱层析洗脱液透析浓缩冷冻枯燥精制红芪多糖HPS-2。2.2蛋白质和多糖含量的测定蛋白质含量测定采用考马氏亮蓝法3，多糖含量采用苯酚-硫酸法4。2.3脱蛋白方法称取一定量的粗多糖，参加适量蒸馏水，6加热溶解，备用。本实验采用3种脱蛋白的方法。2.3.1Sevag法取粗多糖溶液，参加等体积的氯仿-正丁醇(V/V为41)试剂，混合振摇3min，离心
5、除去沉淀，透析后醇沉，冷冻枯燥，即得脱蛋白多糖。2.3.2三氯乙酸法取粗多糖溶液，参加多糖溶液体积.1倍量的三氯乙酸，低温(4)剧烈振摇3min，离心除去沉淀，透析后醇沉，冷冻枯燥，即得脱蛋白多糖。2.3.3三氯乙酸-正丁醇法取粗多糖溶液，参加等体积的三氯乙酸-正丁醇(V/V为11)试剂，振荡1min，静置分层，收集下层水溶液，透析后醇沉，冷冻枯燥，即得脱蛋白多糖。2.4红芪多糖的精制将一定量的脱蛋白多糖，溶解于适量蒸馏水中。过氧化氢除色素，减压浓缩，经醇沉、离心、冷冻枯燥得红芪多糖1(HPS-1)，取适量的HPS-1，蒸馏水溶解后，SephadexG-25柱分离，蒸馏水洗脱，流速.8ml/m
6、in，每3ml收集1份，苯酚-硫酸法跟踪检测，绘制洗脱曲线，合并主峰流出液，减压浓缩至一定体积，冷冻枯燥得HPS-2。2.5纯度鉴定用HPLC法，TSK-gelG25PW色谱柱，示差折光检测器，流动相为双蒸水，流速1.ml/min，检测器温度35，样品浓度4mg/ml，进样量5l。同时取该样品溶液在24nm范围内进行紫外扫描。2.6气相色谱参照文献5，多糖样品经彻底水解后制备糖腈乙酸酯衍生物，以单糖的糖腈乙酸酯衍生物为对照品进行GC分析。色谱条件:OV-11毛细管柱(5m.32mm)，载气为N2，流速5ml/min，分流比41，FID氢火焰检测器，汽化室温度25，检测器温度28。程序升温:11
7、(保持5min)(5/min)28(保持2min)。进样量.4l。2.7薄层色谱6取15mgHPS-2，三氟醋酸彻底水解，水解产物溶于1ml蒸馏水中，以标准单糖为对照，分别取样品水解液和单糖对照液在含磷酸二氢钠的硅胶G薄层板上点样，上行二次展开，展开剂:醋酸乙酯冰醋酸甲醇水=12332(V/V);自然风干后显色，显色剂:苯胺-邻苯二甲酸溶液，烘箱中15加热51min显色。2.8红外光谱测定取2mgHPS-3，KBr压片，测定红外光谱。3结果3.1脱蛋白方法的选择以蛋白脱除率和多糖损失率为指标，比拟Sevag法、三氯乙酸法和三氯乙酸-正丁醇法的脱蛋白效果(见图1)。Sevag法的多糖损失率最低，
8、但脱蛋白率也最低;三氯乙酸-正丁醇法的脱蛋白率最高，多糖损失率最低;三氯乙酸法的脱蛋白率达3%以上，但多糖损失最高。综合各方面的因素，本实验选取三氯乙酸-正丁醇法脱除红芪多糖中的.蛋白质。3.2红芪多糖分离纯化红芪多糖经SephadexG-25柱层析纯化分离的洗脱曲线(见图2)。仅出现1个洗脱峰，收集主峰，透析，浓缩，冷冻枯燥，得到HPS-2。3.3纯度鉴定HPS-2的紫外扫描在2628nm处吸收峰消失，三酮反响呈阴性，讲明样品中的蛋白质基本除尽，也无核酸存在;碘-碘化钾反响呈阴性，表明样品为非淀粉多糖;经HPLC凝胶色谱后为单一对称峰。表明其为均一组分;苯酚-硫酸法测定HPS-2的糖含量为9
9、8.6%。3.4红芪多糖的构造分析3.4.1气相色谱分析气相色谱分析(见图3)。比拟标准品和样品的保留时间，可见多糖HPS-2由鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖5种单糖组成。其摩尔组成比例为.3.22.716.12.。3.4.2薄层色谱分析HPS-2经薄层色谱(见图4)。检出半乳糖(Rf对=Rf样=.4)、葡萄糖(Rf对=Rf样=.3)、阿拉伯糖(Rf对=.2，Rf样=.19)、木糖(Rf对=Rf样=.62)和鼠李糖(Rf对=Rf样=.77)，其中木糖和鼠李糖含量较低，斑点不明显。这与气相色谱结果一致。3.4.3红外分析从IR谱图由图5可见，HPS-2在3632cm-1、328cm-1和
10、1412cm-1处均具有多糖的特征吸收峰。1154、18、124cm-1处为-吡喃糖基的振动峰7;898cm-1为-糖苷键的吸收峰，82cm-1处为-吡喃糖的吸收峰，讲明多糖HPS-2中存在和两种类型的苷键，并以吡喃型糖为主。4结论本实验比拟了3种脱蛋白方法，三氯乙酸-正丁醇法脱蛋白效果最好，脱除率达37.2%，多糖损失率少。利用葡聚糖凝胶SephadexG-25柱层析分离纯化红芪多糖得HPS-2，经HPLC及紫外扫描为均一多糖，不含蛋白质和核酸。GC、TLC及IR分析HPS-2的糖基组成和构造为，主要由鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖5种单糖组成，其摩尔比为.3.22.716.12.，
11、单糖主要为吡喃糖，异头碳以型为主，并有少量的型。这为红芪多糖的深化研究打下了理论基础，十分为其组成的快速分析提供了可靠的方法。参考文献 1权菊香.红芪的药理研究进展J.时珍国药研究，1997，8(2):178. 2金智生，汝亚琴.中药红芪的实验研究进展J.甘肃中医学院学报，23，2(4):52. 3李知敏，王伯初，周菁，等.植物多糖提取液的几种脱蛋白方法的比拟分析J.重庆大学学报，24，27(8):57. 4董群，郑丽伊，方积年.改进的苯酚-硫酸法测定多糖和寡糖含量的研究J.中国药学杂志，1996，31:55. 5康学军，曲见松.白芷多糖中单糖组成的气相色谱分析J.药物分析杂志，26，26(7):891. 6张维杰.复合多糖生化研究技术M.上海:上海科学技术出版社，1987:1.【2015本科医学毕业论文范文】