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1、精选优质文档-倾情为你奉上2.3.2脂肪酶酶活的测定采用橄榄油乳化法测定。 酶活定义：脂肪酶在40 ，pH8.0水解橄榄油乳化液每分钟产生1mol的脂肪酸所耗的酶量，即为1个脂肪酶活力单位。（1） 底物的制备： A称取PVA 20g，加入800mL水，在沸水中加热搅拌，直至全部溶解，冷却后定容至1000mL，得2%PVA溶液。以干净的双层纱布过滤，取滤液备用。 B量取2%PVA溶液150mL，加橄榄油50 mL，用高速组织捣碎机处理6min，即成乳白色PVA溶液，该溶液现配现用，冷藏有效期为1周。（2） 测定方法： 取两个150mL的锥形瓶，编号为空白A和样品B。分别于A和B中各加入5 mL底
2、物溶液和4mLpH8.0的磷酸缓冲液，再向A中加入20 mL无水乙醇。将A、B于40 水浴5min，然后向A、B中各加入待测酶液1 mL，立即混匀计时，40 水浴10min后，向B中补加20 mL无水乙醇终止反应，取出。将A和B中加两滴酚酞，用0.05mol/LNaOH溶液滴定，直至微红色并保持30秒不褪色为终点，记录耗NaOH溶液的体积。 脂肪酶活力=（b-a）NF/T式中：b样品耗NaOH溶液毫升数； a空白耗NaOH溶液毫升数； N每毫升NaOH的微摩尔数； F稀释倍数； T反应时间（min）。 由于缓冲液离子强度低，为减小误差，反应后净耗0.05mol/LNaOH溶液体积为1.52.5mL为宜。专心-专注-专业