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1、细胞培养技术何惠娟,细胞培养技术,第一节细胞培养基本知识 第二节细胞培养的基本技术,第一节细胞培养基本知识,一、前言二、培养细胞的特性三、培养细胞的生长过程四、培养细胞生长的条件,一. 前言,1. 细胞培养概念2. 细胞培养的主要优点3. 细胞培养的研究方面4. 细胞培养的应用领域,1. 细胞培养(cell culture)概念,从生物体内取出细胞或组织，在体外模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下进行孵育培养，使之生存和生长并维持其结构和功能的技术。,体内、外细胞的差异,体内细胞：机体神经体液调节 和其他类型细胞影响基因表达受到外来信号调节增殖过程中不断发生着分化 （由一般到特殊
2、）高度特化的结构和功能,体外细胞：失去机体神经体液调节和其他类型细胞影响细胞的许多外来信号被切断特定分化基因表达减弱或停止而进化中保守的增殖活动维持（由特殊到一般）与体内细胞结构和功能的差异特征：失去原有形态，分化特性减弱形态和功能趋于单一一定代数后衰老死亡，或发生转化，获不死性而成为能无限传代,2. 细胞培养的主要优点,研究对象是活的细胞研究的条件可以人为地控制研究的样本，可以达到比较均一性研究的内容便于观察、检测和记录研究的范围比较广泛，多种学科均可利用细胞培养进行研究研究的费用相对较经济,3. 细胞培养的研究方面,1）细胞内的活动：如能量代谢、DNA转录、调亡以及蛋白质的合成2）细胞内部
3、与细胞外界之间的作用：如细胞对外界刺激的反应、药物对细胞的作用、细胞内产物分泌等3）细胞与细胞之间的相互作用：如形态发生、粘着作用、接触抑制、密度抑制等4）细胞内的流动：如信号的转导、钙离子的流动、RNA的移动、激素受体复合物的易位等5）遗传学：如遗传学分析、转染、转化等,4. 细胞培养的应用领域,1）病毒学2）免疫学3）遗传学4）肿瘤学5）分化及发育6）细胞毒试验7）临床医学及生物技术方面的应用,二、培养细胞的特性,培养细胞的生长特点贴附,贴附,贴附是贴附类细胞生长增殖条件之一以成纤维细胞为例，一般在细胞接种后，很快（5-10min）便可见细胞以伪足初期附着，与底物形成一些接触点；接着细胞逐
4、渐呈放射状地伸展开，细胞体的中心部分亦随之扁平；最后细胞成为成纤维细胞的形态。,1. 培养细胞的生长方式及类型,体外培养的细胞，按其生长方式可分为两大类： 贴附型为附着于底物（支持物）表面生长的细胞，生长中形成汇片。大多数细胞属此型。形态上失去在体内特有形态。大致分成以下四型： 成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多形型 悬浮型,悬浮型,少数细胞类型在体外培养时不需要附着于底物而于悬浮状态下即可生长，包括一些取自血、脾或骨髓的培养细胞，尤其是血液白细胞，以及癌肿瘤细胞。细胞在悬浮中生长良好，可以是单个细胞或为细小的细胞团，观察时细胞呈圆形。优点：可大量繁殖细胞、传代方便、易于收获细胞。,三.
5、 培养细胞的生长过程,1.单个细胞的生长过程 ：细胞周期2.细胞系的生长过程3.每代细胞生长过程,1. 细胞系的生长过程,取自动物并置于体外培养中生长的细胞在其传代之前为原代培养或原代细胞。当细胞持续生长繁殖一段时间，到达一定的细胞密度后，就应当将细胞分离成两部分（或更多）至新的培养器皿并补充更新培养液，此即称为传代或再培养。传代生长以后便成为细胞系。体外培养细胞寿命的过程一般可分为三个阶段： 原代培养传代期衰退期,原代培养：从体内取出细胞接种后到第一次传代。一般维持14周。传代期：传代大约数天至1周左右即可重复一次 ，持续数月，一般传1050代。随后细胞增殖缓慢以至完全停止，细胞进入衰退期。
6、衰退期：细胞增殖缓慢以至完全停止，细胞死亡。无限细胞系: 永久增殖。,无限细胞系,多发生在传代期末或衰退期，由于某种因素的影响，细胞可能发生自发转化。转化的标志之一是细胞可能获得永生性或恶性性。细胞永生性也称不死性，即细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群体称无限细胞系，也称连续细胞系。细胞获不死性后，核型大多变成异倍体。细胞转化亦可用人工方法诱发，转化后的细胞也可能具有恶性性质。,2. 每代细胞的生长过程,传代：培养容器中细胞增殖至一定密度后，分离出一部分细胞和更新营养液的过程一代: 细胞接种后到下一次传代的一段时间 在细胞一代中，细胞能倍增36次细胞一代的三个阶段：潜伏期、指数增生期、平台期 实验研究多在指数增长期进行。,