《种子检验程序(共23页).doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《种子检验程序(共23页).doc（23页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、精选优质文档-倾情为你奉上第五章 种子检验【前言】种子检验(seed testing)是保证种子质量(种子品质)的重要关键，特别是把种子作为商品流通后，种子检验工作就显得更为重要，所有种子的生产、加工、销售全部过程的质量，都须通过对种子进行检验确定（图版4）。种子检验的内容种子检验是应用科学的方法对农业生产上的种子品质(seed quality)进行细致的检验、分析、鉴定，以判断其品质优劣的一门学科或技术。种子品质是由种子不同特性综合而成的概念；包括品种品质和播种品质两方面内容。品种品质(genetic quality)是指与遗传特性有关的品质(即种子内在品质)，可用真、纯两个字概括。播种品质
2、(sowing quality)是指种子播种后与田间出苗有关的品质(即种子外在品质)，可用净、壮、饱、健、干五个字概括。“真”是指种子真实可靠的程度，可用真实性表示。“纯”是指品种典型一致的程度，可用品种纯度表示。“净”是指种子清洁干净的程度，可用净度表示。“壮”是指种子发芽出苗齐壮的程度，可用发芽力、生活力、活力表示。“饱”是指种子充实饱满的程度，可用千粒重(和容重)表示。“健”是指种子健全完善的程度，通常用病虫感染率表示。“干”是指种子干燥耐藏的程度，可用种子含水百分率表示。综上所述种子检验的内容包括种子真实性、品种纯度、净度、发芽力(生活力)、活力、千粒重、种子水分和健康状况等。其中，纯
3、度、净度、发芽率和水分四项指标为种子质量分级的主要标准，是种子收购、种子贸易和经营分级定价的依据。种子检验的方法、步骤和程序种子检验分为田间检验和室内检验两部分。田间检验是在作物生育期间，在采种田的田间取样分析鉴定，主要包括检验种子真实度和品种纯度，病虫感染率，杂草与异作物混杂程度和生育情况。以品种纯度为主要检验项目。室内检验是在种子收获脱粒以后，到现场或仓库直至销售播种前抽取样品进行检验。在种子脱粒、贮藏运输和播种前，由于种种原因都有可能使种子品质发生变化。因此，必须定期对种子品质进行全面检验。检验内容包括种子真实度、品种纯度、净度、发芽力、生活力、千粒重、含水量、病虫害等。种子入库前，要重
4、点检验种子含水量、种子真实度。种子调运，播种前，重点检查发芽力等。种子检验的主要步骤可分为取样、检验和签证。（一）取样：按一定规则和手续从大量的种子(或材料)中插取小部分有代表性的样品，作检验品质之用。（二）检验：采用科学方法和必要的仪器和药品对种子各项品质进行分析鉴定，力求获得正确的检验结果。（三）签证：将所检各项结果填入种子检验单内，检验合格的种子发给合格证明书，并定出等级，不合格的签发不合格证书并提出处理意见。种子田间检验与室内检验的内容很多，必须按一定程序进行(如图5-1)。品种纯度的检验品种纯度(cultivar purity)和种子真实性(seed genuineness)是鉴定种
5、子质量的首要指标。种子真实性是指一批种子所属种类品种与所附文件的说明是否一致。如不进行种子真实性检验，投入生产的不是所需种类、品种，往往给农业生产带来不可弥补的损失。如杂交水稻生产中，错把不育系当杂交种播种造成颗粒无收，这样的教训屡见不鲜。在蔬菜生产中，错将弱冬性的甘兰品种当强冬性品种而作春甘兰栽培，就很易发生未熟抽苔，严重的会使整个生产将会损失殆尽。凡此种种不胜枚举。品种纯度是指品种典型一致的程度，即样品中本品种的种子数(或植株数)占供检样品种子总粒数(或总株数)的百分率。品种纯度高的种子，因保证了群体优良特性的一致性，能充分发挥品种的遗传潜力，得到高产优质的产品；而品种纯度低，则常常表现植
6、株生长不整齐，既减少优质产品的产量又延误农时。品种纯度检验的方法有田间检验和室内检验两种。目前，纯度的检验仍以田间为主，室内检验为辅。一、品种纯度的田间检验（一）田间检验时期田间检验(field inspection)应在品种特征特性表现最明显的时期进行，一般一年生作物可分苗期、开花期、果实成熟期三个阶段，二年生作物可分为苗期、食用部分发育初期、食用部分成熟期、抽苔期和开花期五个阶段。绝大多数蔬菜作物的食用部分成熟期是田间检验的关键时期，这些食用部分(器官)的形状、大小、色泽及其他特征特性是鉴别的主要性状。（二）田间检验的方法田间检验分取样、检验、签证三个步骤。1.取样 取样前要了解良种繁殖田
7、块面积、耕作制度、种子播前处理，检查品种证明书、种子来源、保管、品质等情况，并检查繁育技术、隔离情况，以及被检验品种的特征特性和在当地的表现。然后进行划区设点。凡同一品种、同一来源、同一繁殖世代、同一栽培条件的相连田块为一个检验区。一个检验区的最大面积为500亩。设点取样量主要取决于作物种类、田块面积(表5-1)。取样点要均匀设置，按田块和面积大小的不同，采用如下方式(图5-2)：A.对角线式 取样点分布在一条或两条对角线上，等距设点，适用于方形或长方形地块。B.梅花形式 在田块四角、中心共设5点，适用于较小的方形或长方形地块。C.棋盘式 在田块的纵横每隔一定距离设1点，适用于不规则地块。D.
8、大垄(畦)取样 在垄(畦)作地块，先数总垄数，再按比例每隔一定的垄(畦)上设1点，各垄(畦)的取样点要错开。2.检验 设点取样后，根据鉴定时品种应具备的主要特征特性逐点逐株观察分析鉴定。将本品种、异品种、异作物、有害杂草、感染病虫株数分别记载，然后计算百分率。 本品种株(穗)数品种纯度(%)= 100供检本作物总株(穗)数异品种株(穗)数异品种(%)= 100供检本作物总株(穗)数异作物株(穗)数异作物(%)= 100供检本作物总株(穗)数+异作物株(穗)数杂草株(穗)数杂草(%)= 100供检本作物(穗数)+杂草株(穗)数杂交制种田，应计算父、母本杂株散粉率及母本散粉株率：母本散粉株数母本散
9、粉株(%)= 100供检母本总株数父(母)本散粉杂株数父(母)本散粉杂株(%)= 100供检父(母)本株数)在检验点外，有零星发生的检疫性杂草，病虫感染株，要单独记载。3.签证 分析鉴定完毕后，将每个检验点的各个检验项目的平均结果，填写在田间检验结果单上(表5-2)，并按种子分级标准提出种子的等级。如果是原种或杂种品种的亲本，则应提出建议，表明能繁殖，去杂株后可繁殖以及不能留种三种具体意见。二、品种纯度的室内检验品种纯度的室内检验(laboratory test)对保证原种和良种的质量也是很重要的。因为在原种的繁殖过程中，虽然逐株进行了鉴定，保证了原原种植株是高纯度的，但隔离条件收获、脱粒、贮
10、藏等方面，都不易得到绝对的保证。良种虽然直接用于商品生产，不影响下一代，但如果在良种采收或采收后的一系列过程中，发生了生物学和机械混杂而未及时检验出来，同样将会给生产造成不可估量的损失。（一）传统的鉴定技术1.种子形态鉴定种子形态鉴定是用肉眼或借助放大镜观察种子的形状、大小、色泽、花纹和种皮表面结构特征(光滑与粗糙，有无突起，脊及多少，有无刺毛及多少等)。鉴定时须有标准品种的样品或标准品种种子彩色图谱及描述作依据。一般可以鉴定至种，少数可以鉴定至变种，个别的也能鉴定至品种。2.幼苗形态鉴定各类种子都可利用幼苗形态鉴定法进行品种纯度检验。禾谷类可利用芽鞘颜色等性状；十字花科可利用子叶形态，真叶形
11、状和茸毛以及颜色等性状。鉴定时，随机取100粒种子，2-4次重复进行光下发芽培养，待幼苗出现固有色泽和特征时，鉴定和计算品种纯度。3.解剖鉴定各种作物不同种或品种类型的种子，其种皮细胞结构、形态和大小等均有不同。据此可采用解剖法加以鉴别。如豆类种子可从种皮栅状细胞大小鉴别品种；十字花科芸苔属可根据纵切片和横切片细胞形状和大小鉴别不同的种；萝卜可根据第一层表皮细胞形状、大小鉴别品种；葱类可根据表皮细胞外形的波纹鉴定不同的种。据郑成超、张宪曾报道（1989），将小麦品种种被厚度、糊粉层厚度、种被糊粉层厚度和种被 /糊粉层厚度4项指标结合可将各品种分开。（二）现代鉴定技术1.化学鉴定(1)石炭酸(C
12、65)染色法 石炭酸又名苯酚，其染色的原理是单酚、双酚、多酚在酚酶的作用下氧化成为黑素(C77985514)，由于每个品种皮壳内酚酶活性不同，在石炭酸作用下呈现深浅不同的颜色。该法主要适用于小麦和水稻。(2)愈创木酚(C782)法 其原理是豆类种子的种皮内有过氧化物酶，能使过氧化氢分解而放出氧，使愈创木酚氧化而产生红棕色的4-邻甲氧基酚，由于不同品种过氧化物酶的活性不同，溶液颜色也有深浅之分。(3)碱液(NaOH或KOH)处理 可用于十字花科种子真实性鉴定。取试样两份，各100粒，分别放在直径8mm的小试管中，加入10%NaOH或KOH溶液3滴，使种子浸泡在溶液中，然后将试管放在2528温度下
13、，经2小时，会显出不同的颜色，根据标准品种的显色情况统计本品种种子数，并计算品种纯度。2.荧光鉴定荧光分析法的原理是利用紫外线具有光激发现象，即紫外线照射物体后将不可见的短光波转变为可见的长光波。其发光的持久性有两种类型：一种叫荧光现象，紫外光连续照射后物体能发光，当停止照射时，被激发的光也随着停止。另一种叫磷光现象，当紫外线停止照射后，激发生成的光在或长或短时期内可继续发光。由于不同种类或品种种子的组织结构和化学成分的不同，紫外线照射时发出可见光的颜色和紫外线停止后可见光持续的时间是不同的，可以用此原理来判断种子的品种纯度。3.电泳鉴定近年来，电泳法发展较快，应用广，准确度高，已成为种子纯度
14、鉴定的主流，有较强的生命力。电泳法最初采用淀粉凝胶电泳（SGE）。近年来发展到利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）。最近，等电聚焦（IEF）电泳技术又得到迅速发展。聚丙烯酰胺凝胶电泳是从种子中提取的醇溶蛋白在PH为3.2条件下进行电泳分析，如小麦、大麦，用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离，产生的蛋白质条带与遗传基因有关，即指纹（fingerprints），由单粒种子所产生的指纹可鉴定品种的真实性和纯度。等电聚焦电泳法是用等电聚焦电泳分离种子蛋白的印渍来鉴定品种纯度的一条新途径。将非变性等电聚焦电泳凝胶分离种子蛋白酶，然后将这些电泳分离出来的种子蛋白吸附在可移动的膜上形成印渍。一次电泳即可进行多种酶的染
15、色分析。电泳法的基本原理是利用不同带电质点在一定电场中迁移速度不同进行分离。凝胶电泳除电荷效应外，还有分子筛效应，使颗粒小、形状为圆球形的分子移动快，而颗粒大、形状不规则的分子不易通过凝胶孔洞则移动缓慢。因此，不同大小形状的分子就固定在支持物(凝胶)的不同部位，形成了一定的谱带。用电泳法鉴定品种纯度的关键是要找到本品种典型的标志谱带（图53）。 4.高效液相色谱鉴定电泳技术在多种作物纯度检测中得到广泛应用。但对于那些亲缘关系较近的品种之间，如大白菜的一些品种，电泳法较难得到满意效果。而利用高效液相色谱法可得到理想结果。原理是使具有一定遗传特性的品种组成蛋白质，在色谱上形成了保留时间和大小不同的
16、峰构成的指纹，不同品种间遗传特性差异使其具有不同的图谱，从而把品种区别开来。5.分子生物学鉴定分子生物学实验技术的发展使种子纯度鉴定进入了基因水平。它以种子的DNA片段（基因）直接作为检测对象，有很高的准确性、稳定性和重复性。其中以RFLP、PCR、RAPD、单克隆抗体等实验技术有较好的应用前景。RFLP（Restriction Fragment Length Polymorphism）法，即限制性片段长度多态性。其原理是，不同遗传特性植物、DNA不同部位具有多态性，这些专一碱基序可被限制内切酶所识别。RFLP技术同生理生化技术鉴定品种及其纯度相比具有这样一些相似的特点。如共显性，缺乏环境效应
17、和基因多效性对农艺性状的影响。然而，它的特殊优点在于：首先，植株的任何组织在任何发育时期均可用于分析。其次，既能探索品种间细胞核基因方面的差异，又能揭示母体细胞质方面的非孟德尔遗传因子的影响；每一位点存在多型性，遗传稳定。第三，由于探针数目和内切酶种类组合方式理论上不可计数，因而其潜在鉴别能力是不可估量的。第四，分离的DNA在适宜条件下几年内稳定不变，从而有可能从标准对照品种制备大量DNA，以供长期使用。DNA样品储藏期远远长于个体生活史，这对于作追溯性或仲裁性鉴定大有益处。此法的不足之处是客观存在的。比如缺乏适宜的探针，以“探测”植物染色体组中变异丰富的区域。另外，这种方法比较繁琐，价格昂贵
18、，而且需要较多的设备和技术水平高的分析人员，因此不适于推广应用以及批量商品种子的纯度鉴定。PCR（Polymerase Chain Reaction）法，即聚合酶链式反应，又叫特异性DNA倍增技术，由于此法不需要放射性标记（探针），能够从复杂的DNA分子群体中选择性地复制一段特异的序列，使某一DNA片段得到特异性的扩增。这一方法在很大程度是改变了科研中DNA分析的方法，是DNA研究方法的一次革命。近年来，这一技术得到了不断的完善和越来越广泛的应用，并已经成为种子纯度鉴定的一种非常有效的工具。扩增后的DNA片段经琼脂糖电泳进行分离，比较来自不同品种的电泳谱带，或与标准品种进行比较，即能鉴别品种和
19、纯度检测。用PCR技术检测种子纯度与RFLP技术相比，具有快速、简便、廉价（不需放射性标记）、特异性高的优点。RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA）法，是用随机序列的910个核苷酸的引物，对基因组的DNA进行PCR扩增，再通过PAGE或琼脂糖凝胶电泳分离，经溴化乙锭（EB）染色来检测扩增产物DNA片段的多态性。RAPD所用的引物序列各不相同，对于任一特定引物，当它在植物DNA的两条链上找到同源区域时，会与之结合并在PCR反应中扩增基因组DNA。由于不同植物DNA与引物结合的区域以及这些区域间的距离不同，PCR扩增产物的片断大小表现为多态性。提供的信息可作为
20、基因鉴定的客观标记。与PCR相比，RAPD技术可以在对品种（或植物）没有任何分子生物学研究的情况下，对其进行DNA多态性扩增。RAPD图谱与RFLP相比也有明显的优点，比如人工合成的随机引物可在实验室间进行交换，这要比克隆DNA片段作为探针要容易和迅速得多；可以免去分子杂交手续；操作可采用自动化，因而RAPD指纹图谱技术应用范围广，近年来已经得到迅速发展和应用，为高精度种子检测展示了美好的前景。但是，由于种子纯度检测的特殊性逐粒分析，也使得其和RFLP一样显得繁琐和昂贵（图54）。种子播种品质的检验一、扦样扦样(sampling)又称取样或抽样。扦样是种子室内检验的首要环节，扦样的目的是从一批
21、大量的种子中，扦取适当数量的有代表性的送验样品供检验之用。扦样是否正确，样品是否有代表性，直接影响到种子检验结果的正确性。（一）样品的组成扦取后的样品按其组成不同，可分为初次样品、混合样品、送验样品和试验样品。初次样品(primary samples)又称小样，是指从一批种子的某个点，用扦样器或徒手每次扦出来的少量种子。混合样品(composite samples)又称原始样品，是指从一批种子中所扦出来的全部初次样品合并混和而成的样品。送验样品(submitted sample)又称平均样品，是指从混合样品中分取一部分相当数量作检验用的样品。试验样品(working sample)简称试样，由
22、送验样品中分出一定量种子，供检验种子品质的个别项目用的样品。（二）扦样方法1. 扦样原则：样品必须由检验人员亲自扦取，扦取前必须了解种子来源、产地、品种、运输和保管情况，供分批时参考。2.种子批和检验单位的划分：所谓“一批”种子，必须是属于同一品种，同年同季收获，同一繁殖世代和同一产地且品质状况基本一致者。一批种子(不再分检验单位的)只扦取一个平均样品。当一批种子数量过大时，则应划分成若干个检验单位。一个检验单位分别扦取一个平均样品。3. 扦取初次样品：在批和检验单位划分后，根据一批或一个检验单位的种子数量，首先决定应扦取样品的数量，再按种子的存放情况，决定扦样的部位和每一部位扦样点数，最后从
23、各个部位点扦取初次样品。(1)袋装种子扦样法 扦样的袋数(扦样点数)取决于总袋数，如表5-3所示。在调种数量多，时间紧迫时，可酌情减少扦样袋数，但不能少于总袋数的5%。种子袋堆垛时，各扦样点应均匀地分布在上、中、下各层，一般分布形式如图55。种子袋不是堆垛而是平放时，可间隔一定袋数确定各取样袋。 扦样时，中小粒种子用袋装扦样器从袋口的一角斜插向袋的对角。大粒种子可采用相适应的扦样器或倒包，徒手扦样等方法扦样。徒手扦样时应注意每次用手取种子的数量，以保证各个初次样品的量大致相等。(2)散装种子扦样法 在已划分的检验单位内，按种子堆的大小划分检验区，每区面积不得超过25m2。每区的中心和四角(距边
24、沿50cm)各设一点，共5个扦样点，同一检验单位内的相邻区的角点可以共同，如图56。（三）样品的配制1.混合样品的配制 在各点扦取若干初次样品时，注意观察每次扦取的初次样品在纯度、净度、颜色、气味和水分等方面有无明显差异，如无差异就可将一个检验单位的全部初次样品均匀混合在一起，便组成了混合样品，如发现初次样品间的品质有差异，则应作为不同的检验单位处理，即分别将有差异的若干初次样品组成不同的混合样品。2.送验样品的配制 各种作物送验样品的规定量不同，并且往往小于混合样品，这就要求从混合样品中分出缩小的样品来。从混合样品中分出一定数量送检验室供各项检验分析用的种子，即送验样品。当混合样品较少而与规
25、定的送检样品数量相符时，就可把此样品作为送验样品。种子批（seed lot）和样品的重量规定见单克隆抗体法是根据蛋白质与其抗体之间免疫反应专一性来鉴别不同遗传性的种子。基本方法是电泳分离种子蛋白，纯化某一品种的专一的种子蛋白组分。从免疫动物脾脏中分离出能合成抗体的淋巴细胞分别培养为细胞株。筛选出合成该专一蛋白的细胞株，大量繁殖得到有能量的单克隆抗体，用此单克隆抗体处理硝酸纤维素膜，将待鉴定的种子蛋白液直接点在这种硝酸纤维膜上，经酶标第二抗体处理，酶染色即显示专一蛋白带。此种方法不足之处是，单克隆抗体细胞株筛选繁琐，但一经筛选成功，即可快速、方便鉴定种子纯度。由此可见，随着科学技术的进步，尤其是
26、生物化学和分子生物学的发展，种子纯度检验方法已经从传统的形态解剖鉴别发展到分子水平和基因水平，经历了一个由表到里、由粗到细、由简单到复杂而精确的过程，检验技术向深入细致和综合技术应用的方向发展。可以这样讲，对于任何一个品种或杂交种，其真实性和纯度都能被鉴定出来。但在一般的种子检验中，有时用一种方法往往难以准确鉴定或把几个品种分开，若选用数种方法组合起来，可能比较容易获得成功。任何方法在应用中都表现出明显的优点和不足之处，关键是选用适当的方法。鉴定品种的方法要求简单、快速、廉价、准确，但并不是同等重要，关键是准确，同时应根据具体情况各有所侧重。只要是能够准确进行品种鉴定的方法，都是好方法，因此传
27、统的鉴定法并不过时。在种子纯度检验工作中，目前最有推广价值的是种子蛋白质电泳法，对于那些因亲缘关系近用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）不能鉴别的品种，可用等电聚焦或双向电泳方法进一步检验。对于经过检验，种子交易双方仍有较大争议，或出现重大种子纯度责任事故而需进行仲裁的，目前既可以通过规范的田间小区种植，也可以通过RAPD技术提供检验依据。分取送验样品有分样器法和分样板法。分样器有钟鼎式和横格式分样器，前者适用于小粒种子，后者对大小不同的种子均适用。分样板法也叫四分法。无论采用哪种分样方法，目的是既分样均匀有代表性，又达到规定的数量。每个混合样品分取两份送验样品，一份供检验净度(包括纯度、发
28、芽力、生活力、活力、千粒重等)用，可装入布装或纸袋内；另一份供水分、病虫害测定和保留样品用，其重量可比净度检验少一半，该份样品应密封包装，并置于防湿的容器内。容器应贴好标签。送验样品连同扦样证明书(表55)在24小时内送验。种子堆高不足2m时，分上下两层；堆高2-3m时，分上、中、下三层。上层距顶部10-20cm，中层在种子堆中部，下层距底部5-10cm。分层定点后，用散装扦样器由上到下逐层扦取。二、种子净度分析种子净度(seed cleanliness)是指样品中除去杂质和其它植物种子后，留下的本作物(种)净种子重量占种子样品总重量的百分率。种子的净度是种子播种品质的重要指标之一，是种子分级
29、的依据。净度分析的目的首先是要了解一批种子的真实重量，为计算种子用价(种子用价=净度发芽率)提供一项指标。其次是了解一批种子中其它植物种子及无生命杂质的种类和含量，以便采取适当的清理方法，提高种子批的播种品质。净度分析有关标准见表56。三、种子发芽力、生活力、活力和千粒重检验种子发芽力(germinability)、生活力(viability)、活力(vigour)均是种子生命状况的表现。干粒重则间接地反应了种子的生命状况。发芽力高、生活力、活力强的种子一般千粒重也高。（一）种子发芽力检验种子发芽力是指种子在适宜条件下发芽并长成正常植株的能力，通常用发芽势(germinating enery)
30、和发芽率(germinating percentage)表示。发芽势是指发芽试验初期(规定日期内)正常发芽的种子数占供试种子数的百分率。种子发芽率是指发芽试验终期(规定日期内)全部正常发芽种子数占供试种子数的百分率。种子发芽势高，表示种子活力强，发芽整齐，田间出苗一致。种子发芽率高，表示有活力的种子多，播种后出苗率可能高。发芽试验通常是在实验室条件下进行的。因为在田间条件下试验受环境影响大，其试验结果重演性差。而在实验室可控制适宜的标准化条件，使试验结果准确可靠。（二）种子生活力检验种子生活力是指种子发芽的潜在能力或种胚所具有的生命力。一般情况下，种子生活力可以通过发芽力表示。但是由于低温潮湿
31、条件下收获的某些作物(如黄瓜、甜瓜等)往往未达生理成熟，还处于生理休眠状态，某些作物种子的种被或稃壳不透气(如禾本科)和种皮不透水(如小粒豆科种子、棉子等)，使得在一般发芽条件下具有生命力的种子也不能及时发芽。因此通过一定的技术手段来测定种子的生活力，具有实践意义。种子生活力测定的方法较多，归纳起来有三类：1.物理和化学法，包括凡是能够使种子潜在的发芽力发挥出来，促使种子萌发的各项措施，如干热处理、低温处理、温汤浸种、急剧变温处理，剥去稃壳和果种皮、机械损伤种皮，硫酸处理、过氧化氢处理、硝酸和硝酸钾处理、赤霉素(GA3)处理、预先洗涤处理等，均可作为测定种子生活力的预措方式。针对种子不能及时萌
32、发的原因，采用相应的预处理后再于标准的发芽条件下让其萌发，这就可以避免由于各种原因造成的有生命力种子不能萌发的情况。2.生物化学方法。此法的原理是利用活种子与死种子其细胞的化学成分功能上的差别，以特定的化学药剂处理，从生化反应的结果来间接判别死种子与活种子。生物化学方法主要有四唑染色法和靛红染色法。(1)四唑法测定的原理是胚的活细胞里含有脱氢酶，具有脱氢还原的作用，被种子吸收的C19H15N4Cl2，3，5-氯化三苯四氮唑，简称四唑(TTC或TZ)，为白色或淡黄色的粉剂，有微毒，对光敏感，容易被光所分解，故应用棕色瓶装盛，并用黑纸包装参与了活细胞的还原作用，被还原成为红色、稳定、不扩散和不溶于
33、水的基甲月替 ，而无生活力的种子则无此反应而不染色。由此可按胚组织的染色情况区别有生活力和无生活力的种子。(2)靛红染色法的原理是由于胚的活细胞原生质具有选择透性，靛红C16H8O2N2C（O3Na）2，不能渗入活细胞内部而不着色，死细胞原生质则无功能而被染成蓝色，因此可根据染色情况判断种子生活力的有无或强弱。靛红染色法适用于豆类、谷类、棉花、瓜类和林木等大粒种子种类。3.软X-射线造影法。此法的原理是根据活组织细胞膜具有选择透性，可阻止重金属(Ba+)渗入，而死伤组织则失去选择透性的能力，重金属（Ba+）能渗入。把这种渗钡状况不同的种子置于软X-射线下照射造影时，在荧光屏上，凡是死伤组织，由
34、于渗入的钡离子吸收了X-射线，而呈现不透明的暗影，活组织则较透明且较亮。经显影定影后，在底片(负片)上死组织则较为透明，而活组织较为黑暗。在印成相片后，则死伤组织较为黑暗，而活组织较为白亮，借此可以鉴别死活，测定种子生活力。（三）种子活力检验种子活力的概念是指种子抵抗不利环境和生长潜力的特性。种子活力是种子质量的一个综合指标，是种子所有生理特性的总和。由于各种类型种子其单粒重、种皮厚度、发芽速度差异较大，因此，测定方法也有所不同。目前，国内外主要有以下几种：1.外部形态法（目测法）根据种子的特点，观察其饱满度、色泽、气味、千粒重等。颗粒饱满、千粒重大、外观色泽光亮、呈现其固有色泽、无任何异味、
35、胚呈乳白色，一般为活力强的种子。2.逆境试验法原理是在非最适条件下或逆境条件下，高活力种子表现出较高生命力。Woodstock(1976),Jekrony and Egli(1977)用加速老化法预测种子活力，即在高温高湿（4045、100RH）条件下将种子处理一定时间后进行发芽试验。在这种情况下，只有活力高的种子发芽并形成正常幼苗。冷冻试验是模拟早春田间条件，先把种子低温（10）下培养一段时间，然后转移到良好条件下发芽，经冷冻处理后，低活力种子受低温抑制作用较敏感而遭冻害，也易受真菌危害，高活力种子抵抗能力强，冷冻处理后仍能出苗。3.荧光法种子在老化过程中会产生一系列生化变化，导致种子化学成
36、分在质和量上发生变化。不同活力的种子在紫外线激发下会产生不同荧光反应。紫外荧光法所用的仪器简单，只需一台紫外荧光灯就可以进行，不需试剂，适于检测寿命短、活力差别较大的种子。 4.软X-射线造影法此法不仅可检测种子生活力，而且可根据显影后图像的完整度、清晰度来鉴别种子活力的高低。活力高的种子，图像完整、清晰。5.乙烯含量法把种子浸泡在密闭容器中，24h后用注射器抽取一定体积的浸泡液，用气相色谱仪测定乙烯含量，含量越高，活性越强。6.电导法电导法是一种最快速、简便的测定种子活力的方法，活力不同的种子，细胞膜透性有差异。浸泡一定时间后，由于种子质量不同，内含物渗出量不同。活力低的种子渗出液多，电导率
37、高。活力高的种子，细胞膜控制能力强，外渗液少，电导率低。因为细胞膜系统的完整性是种子活力基础，物质交换、能量传递等重要生化现象都在细胞膜上进行，膜结构完整性丧失，必然引起种子电解质渗漏。种子变劣时，细胞膜损伤大，浸泡后析出电解质多，因而测得电导率高，电导率大小与种子活力呈负相关。7.呼吸强度法种子吸胀24h后，用呼吸计或氧电极测定种子CO2的呼吸量或CO2的放出量，计算呼吸强度，强度越高，活力越高。8.ATP含量法种子萌发时呼吸旺盛，因而分解产生ATP多，种子活力越高，ATP产量越大。所以，用荧光光度计测定ATP含量，可以测定种子活力。9.四唑测定法四唑法不仅能测定种子生活力，而且可以根据胚部
38、染色部位以及染色程度的不同来判断种子活力的高低，这种四唑染色法称为“四唑定位图形法”(topographic tetrazolium test)。这种方法简便、准确，还可避开环境的影响，也不受休眠的限制。Moore(1973)认为，四唑染色的所在部位比范围大小更重要。因为在主要部位即使损伤的范围很小，但种子的劣变程度是相当严重的。在种子活力测定的各种方法中，物理方法简便、快速、对种子损坏轻且用种量少。生理方法中，电导法快速可同时测大量样品。发芽试验法比较直观，指标明确，但需时间长。生化法速度快、准确、精度高，不受时间、季节限制。逆境试验不是一个孤立的方法，处理本身得不到指标而是为了加大种子活力
39、差异，便于测定。可见，不同种子活力测定方法各有特点，在生产中应根据不同情况选择应用。（四）千粒重测定千粒重是指含有规定水分的1000粒种子的重量，以克为单位。千粒重是种子充实、饱满、大小、均匀度的综合表现。千粒重可用于计算单位重量粒数和播种量等。1-实测水分%千粒重(规定水分)(g)=实测千粒重(g)1-规定水分%四、种子水分和种子健康测定种子水分和种子健康测定所用试样均取自于密封好的平均样品。（一）种子水分测定种子水分(seed moisture content)又称种子含水量，是指种子样品中所含水分的重量占样品重量的百分率。种子含水量与种子有效贮藏年限有直接的关系，超过安全含水量的种子在贮
40、藏期间，会因呼吸旺盛消耗养分，造成发芽，同时因为发热使微生物大量繁殖，导致种子霉变等。因此必须将种子含水量控制在安全范围内。种子水分的测定方法很多，目前常用烘干减重法和电子仪器测定法。（二）种子健康测定种子健康测定(seed health testing)的目的是了解种子样品的健康状况，并由此推知种子批的健康状况，从而比较不同批的价值和有目的地控制危害性病虫害的蔓延。1.肉眼检验 从平均样品中取出一半种子作试样，放在白纸或玻璃板上，用肉眼或5-10倍的扩大镜检查，取出病原体、害虫或病粒、虫蛀粒，称其重或计其粒数，按下列公式计算病害感染率，虫害种子百分率及每公斤种子中害虫的头数。病粒或病原体重量
41、(g)感染病害(%)= 100试样重量(g)被虫蛀食或损伤的种子数虫害种子(%)= 100供检种子粒数 拣出害虫头数种子害虫数(头/Kg)= 1000供检试样重量(g)此法适用于有较大病原体或种子外表有明显症状的病害。如小麦赤霉病、水稻稻瘟病、马铃薯晚疫病等。适用于害虫自由活动在种子堆中或种子受害虫损伤后有明显特征的虫害测定。2.过筛检验 从平均样品中取出一半种子作试样，用规定孔径的筛子过筛，不同作物种子所用筛孔不同(表5-7)。表57取筛子按孔径大小叠好(孔径上层大，下层小)，将试样倒入上层筛内，筛理2min，最好用电动筛选器进行。然后将各层筛上物倒入白瓷盆内，用肉眼或10-15倍扩大镜检查
42、。将底层的细小筛出物倒于黑底玻璃板上，用50-60倍双目扩大镜检查。最后计算病、虫害感染率和每公斤含量。病原体重量(g)病原体含量(%)= 100试样重量(g)拣出害虫头数种子害虫(头数/Kg)= 1000试样重量(g)此法适用于较大病原体，其形状、大小与种子不同。如菌瘿、病核、虫瘿及赤霉病粒等。凡是成虫或幼虫散布在种子中间的害虫适用。3.剖粒检验 取试样5-10g(玉米、豌豆等大粒种子10g，稻、麦等中粒种子5g)，用刀开或切开种子的被害或可疑部分，检查害虫头数，包括隐蔽害虫的卵、幼虫、蛹及成虫。计算出每公斤种子害虫头数或虫害种子百分率。此法适用于隐藏在种子内部的害虫测定，如蚕豆象、豌豆象等
43、。4.染色检验 利用染料或化学试剂处理种子，使被虫害种子的孔口更明显，易于鉴别。主要染色检验方法有高锰酸钾染色法和碘或碘化钾染色法：(1)高锰酸钾染色法 取试样15g，除去杂质倒入铜丝网中，浸于30水中1min，再移入1%高锰酸钾溶液1min，然后用清水洗涤，倒在白色吸水纸上，用扩大镜检查，被害种子表面带有直径0.5mm突起的黑色斑点。如再用过氧化氢和硫酸混合液(100ml的1%硫酸加1ml3%过氧化氢)洗涤则黑色斑点更为明显，结合剖粒检验，计算害虫含量(头/Kg)。此法适用于检查米象、谷蠹为害的孔口。(2)碘或碘化钾染色法 取试样50g，除去杂质放入钢丝网中或用纱布包好，浸于1%碘化钾或2%
44、碘酒中1-1.5min，取出移于盛有0.5%的氢氧化钠溶液中浸30s，取出用清水洗涤15-20s，立即检查。豆粒表面有1-2mm直径的黑色圆形斑点的，为豆象感染过的种子，结合剖粒检验，计算害虫含量(头/Kg)。5.比重检验 取试样100g，除去杂质倒入饱和食盐溶液中(20条件下，100ml水中溶入35g食盐)，充分搅拌10-15min，静止1-2min，将浮在上层的种子取出，结合剖粒检验，计算害虫含量(头/Kg)。6.洗涤检验 取试样两份，每份5g，分别倒入小三角瓶内，加蒸馏水10ml，加以剧烈振荡，光滑种子振荡5min，粗糙种子振荡10min，接着用每分钟1000-1500的转速离心3-5m
45、in，吸去上清液，留1ml悬浮液于管底，稍加振荡，分别滴在5-10片载玻片上，盖上盖玻片，逐片用400-500倍的显微镜检查，每片检查10个视野，记载病原体种类及每视野的孢子数，并计算每粒种子孢子负荷量。一个视野内平均孢子数1张盖玻片内视野数1ml悬浮液的滴数每粒种子孢子负荷量 5g种子的粒数此法多用于种子表面带病而肉眼看不见的种子病害，如麦类腥黑穗病、稻粒黑粉病、棉花炭疽病等。7.滤纸培养检验 取试样400粒，置于2-3层湿润滤纸上，种子间保持一定距离。检查种子内部病菌时，种子应进行表面消毒，即用1%有效氯的次氯酸钠浸种10min，然后置于消毒过的培养皿和湿润滤纸上，在2025的保温箱或发芽
46、箱内培养4-7天检查。根据种子和幼苗病斑、病症、腐烂情况鉴定或用显微镜检查病原菌种类。此法常用于稻瘟病、甘蓝黑腐病、各种作物炭疽病等的检验。8.琼脂培养检验 取试样400粒，根据种子带菌特点，用不同方法进行分离培养。将洗涤或消毒过的种子播于琼脂培养基上，并将培养皿置于20-22的保温箱内5-7天检查，根据菌落和子实体的颜色，外表性状鉴定种子带菌的种类。此法适用于发育较慢的潜伏在种子内部的病原菌，如豌豆褐斑病、小麦斑点病等。9.荧光反应检验 在黑暗中用400毫微米波长以下的紫外线照射植物组织，常呈现出各种颜色的荧光。各种细菌、病毒、真菌也都有荧光反应，而且发光能力比正常组织的荧光反应要强若干倍。据这一原理可以测定马铃薯块茎是否感染环腐病。凡感染环腐病的马铃薯块茎切面均呈现绿色的荧光，凡无病的薯块则呈现紫色荧光；而革兰氏阳性细菌为害的薯块都为黄色、蓝色或绿色。菜豆日烧病菌和菜豆细菌性疫病菌在浮白色或浅黄色豆粒上产生蓝白色荧光。10.漏斗分离检验 将样品放在漏斗内的过滤纸上，在漏斗的排水口处套一像皮管，其上装有螺旋节流夹，将种子用恒温细喷雾24小时，多余的水会自种子与漏斗的边缘流掉，这样线虫通过滤纸下沉到螺旋夹以上的橡皮管内，然后打开螺旋节流夹搜集下沿液，便可检验出线虫并计算出含量。此法专门用于检验洋葱等病原线虫病。专心-专注-专业