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1、精选优质文档-倾情为你奉上利用溶血程度指数法校正溶血标本血清钾离子测定研究钱高潮 黄旭东 丁志祥 金文涛 张琪 常州市中医医院检验科 常州 摘要 目的 对于一些不宜重新抽取血液的溶血标本，通过全自动生化分析仪中血清信息功能溶血程度H与血钾的相关性，探索一种简单方便的校正公式检测溶血标本中血钾浓度，供临床参考。方法 分析溶血程度H与血钾的相关性并建立回归方程，研究不同人群中H=50时血钾浓度是否存在差异并通过外加溶血标准液和制备溶血标本两种方法进行验证。结果 H与K+成正相关（r=0.9996），回归方程y=0.1068H+0.2789,当H在1200（Hb约为95g/L）之间成线性；经单因素方
2、差检验，新生儿、成年男性和成年女性之间差异无统计学意义；两种方法验证均表明计算得到的K+与实际检测值之间差异无统计学意义，理论值平均相对误差3.0%，最大相对误差7.0%。结论 通过全自动生化分析仪中血清信息功能溶血程度H和公式K未=K溶-0.1068H-0.2789能比较准确的测算出溶血标本中真实血钾浓度，这个公式不受患者年龄、性别的影响。关键词 溶血； 溶血程度H；血钾鉴于人红细胞脆性较大,多种原因可使标本发生不同程度的溶血,直接影响测定结果的准确性1-5。溶血会对许多检验结果产生影响，尤其在血钾检测中影响非常明显，因为人体体液中98%的钾分布于细胞内液，细胞外液只占2%，钾在组织细胞内的
3、平均浓度为150mmol/L，红细胞内钾浓度为105mmol/L，血清中钾浓度仅为3.55.5mmol/L，红细胞内钾浓度约为血清钾浓度的20倍，溶血后红细胞中的钾会释放到血清中，引起血钾浓度的升高,因此标本溶血是血钾误差的主要原因之一6-8。溶血标本为一类不合格标本，对于因采集、运输、保存不当等原因造成溶血必须查找原因，避免或降少溶血的发生，而对于容易溶血的标本（如儿科标本）、有红细胞结构异常的标本，血钾的检验结果很难保证。解决该问题的关键在于检验与临床的密切沟通。但有时临床有不方便立即复查的情况，以及其他因素不宜重新抽取血液标本时，如果能探索出一个根据标本异常情况程度对检验结果进行校正的方
4、法，给临床一个比较准确的报告，对临床将非常有意义。溶血后标本血钾的增高主要是由于红细胞被破坏而造成红细胞内的血钾释放所致。血清中血红蛋白的含量能直接反映出标本的溶血程度。如能通过检测血清中血红蛋白的含量，计算出因溶血造成血钾增高的部分，检测的血钾减去因溶血增高的血钾就能消除溶血对血钾的影响。现在配有血清信息功能的生化分析仪(如日立、罗氏、岛津系列生化分析仪)均可通过血清信息中溶血程度（Hemolytic 简写：H）指数法直接测定Hb, 试剂单一稳定, 自动简便9。鉴于上述思路，我们对溶血标本血钾的测定进行了研究，以期找到一种比较方便的检测方法。材料与方法1.1 标本来源 江苏省常州市中医医院2
5、010年6月至2010年12月住院新生儿40例(120天)、成年男性40例（2068岁）、成年女性40例（2173岁）。1.2 试剂与主要仪器：自配Tris-HCl缓冲液（pH7.4）；6.0mmol/LKCl标准液；胆红素标准液（上海生物制品研究所提供）；日立7600全自动生化分析仪；-70冰箱（SANYO） 1.3 溶血程度H及血钾的测定 按日立7600全自动生化分析仪操作说明书要求设定血清信息使用项目样品吸量为10l, Tris-HCl缓冲液吸量为190l, 采用速率法, 反应时间10分钟。设定血清信息参数C=1,B=；血钾的测定选用离子选择电极间接法。1.4 溶血程度H与血钾相关性 取
6、抗凝血，离心去除血浆，用生理盐水洗涤红细胞3次，以压积红细胞的容积为准，加入等体积的生理盐水，-70冻存1小时，立即放入37水箱5分钟，反复冻溶2次，3000转离心5分钟，分离出Hb溶液，并用生理盐水调节至H=200的标准液, 然后用生理盐水稀释成H为150，100，75，50，45，40，35，30，25，20，15，10，8，6，5，4，3，2，1共20种浓度Hb溶液,检测血钾浓度（当H20时，用6.0mmol/L KCL标准液替代生理盐水进行稀释，血钾浓度通过计算得到）。1.5 不同人群红细胞溶血H=50时血钾的测定 选取我院2010年6月至2010年12月住院新生儿40例、成年男性40
7、例、成年女性40例标本，制备Hb方法同上，将H调整为50，检测各标本血钾浓度。1.6 验证试验1 选取上述120例标本（新生儿40例、成年男性40例、成年女性40例标本）进行血清钾浓度检测，制备H=200的Hb标准液，向上述血清中加入不同比例的Hb标准液，检测标本溶血程度H及血钾浓度。1.7 验证试验2 选取上述120例标本（新生儿40例、成年男性40例、成年女性40例标本）进行血钾浓度检测，同时吸取少量红细胞到血清中，反复冻溶2次（方法同上），3000转离心5分钟，吸取上清，检测标本溶血程度H及血钾浓度。1.8 统计学分析采用SPSS 17.0统计软件包对检测结果进行分析。数据资料呈正态分布
8、，以均数标准差表示；多组间比较采用方差分析，组内两两比较采用SNK-q检验，配对资料采用配对t检验，以P0.05为差异有统计学意义。结果 1. 溶血程度H与血钾相关性 以H为横坐标，K+浓度（mmol/L）为纵坐标,经统计学处理H与K+浓度成正相关（r=0.9996），回归方程K+=0.1068H+0.2789,当H在1200（Hb约为95g/L）内成线性，见图1。图1 溶血程度H与血钾相关性2. 不同人群红细胞溶血H=50时血钾的测定 由于H和K+浓度成线性关系，故选择H=50时，检测K+浓度，40例新生儿K+浓度6.020.42；40例成年男性K+浓度5.920.39；40例成年女性K+浓
9、度5.840.34；经单因素方差检验，三组间差异无统计学意义（F=2.306，P=0.104）。3 验证公式1 将H=200的标准Hb液按1：n的比例加入到已知K+浓度的不同血清标本中，按公式K理论= n/(n+1)K+0.1068H+0.2789可得到理论上K+浓度，并将理论上K+与实际检测值之间进行配对t检验，统计结果表明理论上K+与实际检测值基本一致（t=1.263，P=0.209），无统计学差别，理论值平均相对误差3.0%，最大相对误差7.0%。表1为1例标本（K=4.52 mmol/L）加入不同比例H=200的标准Hb液后理论K和实际K的比较，其他标本结果类似。表2为20例不同样本加
10、入1/9体积H=200的标准Hb液后理论K与实际K的比较，其余标本均得到类似结果。表1 H=200的标准Hb液不同稀释度时理论K与实际K浓度的比较nH理论K实际K相对误差%1234567891011121314151617181920986549383228262420191715141312121111101013.0110.238.907.957.467.147.016.866.486.426.246.055.975.895.805.815.725.745.645.6513.3210.259.218.057.167.217.156.96.586.346.155.985.875.555.65
11、5.815.645.595.425.352.360.153.341.20-4.230.921.950.581.48-1.22-1.43-1.22-1.72-6.05-2.62-0.08-1.46-2.61-4.08-5.64注：将H=200的标准Hb液按1：n的比例加入已知K+浓度为4.52mmol/L的血清标本中，理论K+= n/(n+1)K+0.1068H+0.2789表2 不同血清样本中加入标准Hb液后理论K与实际K浓度的比较n标本原始浓度理论K实际K相对误差%12345678910111213141516171819203.455.264.354.655.684.123.893.583
12、.694.234.964.123.673.483.764.354.784.623.954.055.266.886.076.347.265.865.655.375.475.966.615.865.455.285.536.076.456.315.715.805.046.786.216.437.455.765.435.685.526.256.486.285.295.195.655.816.586.125.895.85-4.27-1.532.331.482.52-1.70-4.075.420.894.69-2.076.72-3.08-1.772.05-4.391.95-3.073.140.94注：将H
13、=200的标准Hb液按1：9的比例加入已知K+浓度的20个血清标本中，理论K= 0.9K+ +0.1068H+0.27894 验证公式2 溶血标本中标本原来的血清K+浓度应该为实际测得的K+浓度减去因溶血造成K+浓度升高部分即K未=K溶-0.1068H-0.2789，并将计算得到的校正后血清K+浓度与实际检测值之间进行配对t检验，统计结果表明溶血标本校正后K+浓度与未溶血标本实际测得K+浓度基本一致，差异无统计学意义（t=0.165，P=0.869），校正值平均相对误差2.9%，最大相对误差6.9%。图2 校正后血清K浓度与实际血清K浓度的比较讨 论血清信息是对血清的混浊程度（Lipemi 简
14、写:L）、溶血程度(Hemolytic简写:H)、黄疽程度Icteric 简写:I)的测定,并提供指数的一种功能, 利用无色透明试剂分别与胆红素标准液, 人溶血液标准, 浊度标准液按一定比例混合,用不同波长扫描吸光度。日立7600全自动生化分析仪利用这个原理当采用血清信息功能后仪器在(1/2) 480/505，570/600，660/700(nm)自动测定I、H、L。在570/600 nm处胆红家不干扰Hb的吸收,但混浊则干扰。本法利用一个计算式来校正混浊干扰并计算H指数, 计算式为:H=1/C(EH-BEL),其中的EH,EL分别是570/600, 660/700(nm)处测得的吸光度(AB
15、S104),B是吸收光谱中求出的一种补偿系数,C为H指数的输出系数，当C=1时，H指数为校正混浊后的血浆Hb吸光度。血钾测定对临床疾病的诊治非常重要，常涉及危重病人的处理。临床要求快速而准确地测定钾离子浓度。由于血清中钾浓度为3.55.5mmol/L，范围较窄，许多因素均会引起血钾的明显误差而误导临床医生诊治。其中标本溶血则是血钾误差的主要原因之一。有研究表明红细胞内钾的浓度对血红蛋白的-螺旋和折叠构象及功能有关键作用10。红细胞的钾浓度和血红蛋白含量均较为稳定,红细胞内钾的浓度高于血浆水平近20倍11。标本发生溶血时,血钾增高的误差主要来源于红细胞内钾。故溶血程度与钾的误差值有一定关系。首先
16、我们以H作为溶血程度指标探讨血红蛋白与钾之间相关性,结果证实，H与K+浓度显著相关且成线性关系。当H在1200（Hb约为95g/L）内成线性，可惜仪器给出的H灵敏度（H=1）稍低，不过从回归方程K+=0.1068H+0.2789可以看出H灵敏度对K+浓度影响不大，在0.1mmol/L左右（H=1）,与血清中钾浓度3.55.5mmol/L相比，误差在5%之内，不会造成大的影响。另外需要说明的是由于K+浓度在小于2mmol/L时测量的值已经不准确，因此当H20时，我们采用6.0mmol/LKCL标准液替代生理盐水进行稀释，血钾浓度通过计算得到。H与K+浓度这种线性关系是否受年龄、性别影响，特别是新
17、生儿是否和成年人一样。通过对新生儿、成年男性和成年女性各40例标本进行统计分析它们之间没有差别。说明这个线性公式适合不同的人群。限于贫血种类较多,收集标本数目有限,对于贫血病人未作专门讨论,通过对失血性贫血和缺铁性贫血标本的初步研究H与K+的相关性与正常人相比没有差别,但仍有必要收集更多标本和更多种类贫血作进一步研究。通过外加溶血标准Hb液和制备溶血标本的方法进行验证通过公式计算得到的K+与实际测得的值之间没有统计学差别，说明完全可以通过公式计算来校正溶血标本中K+。通过对大量的生化标本（真空采血管正常采集）进行检测发现H均为0，因此公式K未=K溶-0.1068H-0.2789中H无需纠正。V
18、incenzo Brescia等12近来发表了一篇有关溶血标本血钾检测纠正方法的报道，但其报道的方法需先检测并计算出血浆游离血红蛋白（fsHb）浓度,然后通过公式才能校正血钾浓度，步骤复杂，不易推广12。本文所采用的H测定法,只需在全自动生化分析仪上同时直接测定溶血标本的K+和H值,便可直接在公式K未=K溶-0.1068H-0.2789下计算,无需制备标准液和其它显色剂,价廉、快速、操作简便,且具有较好的重复性和线性范围,对溶血程度的判定尤为适宜。综上所述,如果临床检测血钾的标本为溶血标本,当球形红细胞增多症等易溶因素、凝血机能障碍以及其他因素不宜重新抽取血液标本时,使用公式K未=K溶-0.1
19、068H-0.2789校正,能提供与实际值较为接近的测定结果,可作为一种补救措施。因此,在不便重采标本补测时,数学校正成为提供临床参考的有效方法。参考文献1 Evliyaolu O, Toprak G, Tekin A, et al. Effect of pneumatic tube delivery system rate and distance on hemolysis of blood specimens. J Clin Lab Anal, 2012, 26:66-69. 2 Tiwari AK, Pandey P, Dixit S, et al. Speed of sample tr
20、ansportation by a pneumatic tube system can influence the degree of hemolysis.Clin Chem Lab Med, 2011,Nov 10. Epub ahead of print3 Tamechika Y, Iwatani Y, Tohyama K, et al. Insufficient filling of vacuum tubes as a cause of microhemolysis and elevated serum lactate dehydrogenase levels. Use of a dat
21、a-mining technique in evaluation of questionable laboratory test results. Clin Chem Lab Med, 2006,44:657-561.4 G Lippi, GL Salvagno, M Montagnana, et al. Influence of hemolysis on routine clinical chemistry testing. Clin Chem Lab Med, 2006,44: 311-316. 5 Lippi G, Blanckaert N, Bonini P, et al. Haemo
22、lysis: an overview of the leading cause of unsuitable specimens in clinical laboratories. Clin Chem Lab Med, 2008,46:764-772.6Hawkins RC. Poor knowledge and faulty thinking regarding hemolysis and potassium elevation. Clin Chem Lab Med, 2005,43:216-220.7Hawkins RC. Correction and reporting of potass
23、ium results in haemolysedsamples. Ann Clin Biochem, 2006,43:88-89.8 Hawkins R. Variability in potassium/hemoglobin ratios for hemolysis correction. Clin Chem, 2002,48:796.9 JZ Ji，QH Meng. Evaluation of the interference of hemoglobin, bilirubin, and lipids on Roche Cobas 6000 assays. Clin Chim Acta,
24、2011; 412: 1550-1553.10 , , , et al. Influence of KCl on the interfacial activity and conformation of hemoglobin studied by Langmuir-Blodgett technique. ,2010, 12:1299713006.11 Koeppen BM, Stanton BA. Potassium, calcium and phosphate homeostasis in Berne and Levy, eds. Principles of Physiology. 4th
25、ed. Philadelphia: Mosby, Inc. Editions Similia; 2005.12 Vincenzo Brescia, Marilina Tampoia, Antonella Mileti. Evaluation of Factitious Hyperkalemia in Hemolytic Samples: Impact of the Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration. Lab Med, 2009, 40: 224 - 226. Determination of Plasma Potassium Concentra
26、tion in Hemolytic Specimen by Hemolytic in Automatic AnalyzerQIAN Gaochao, HUANG Xu-dong, DING Zhi-xiang, JING Wen-tao, ZHANG QiDepartment of Clinical laboratory, Changzhou TCM Hospital Affiliated to Nanjing TCM university, No25, Changzhou , China【Abstract】 Objective to explore a simple correction f
27、ormula for detection of actual plasma potassium concentration in hemolysis specimen by the hemolytic(H) in automatic analyzer Methods Studying on the relationship of hemolytic and plasma potassium and establishing an regression equation to analyze potassium concentration in different people when H=5
28、0 and be confirmed by two models. Results H and K+ concentration was significantly correlated (r = 0.9996) and the regression equation y = 0.1068H +0.2789, in which H from 1 to 200 (Hb of about 95g / L) in a linear, and sensitivity to H=1; There was no significant difference in potassium concentrati
29、on when H=50 among newborns、 male and female patients by one-way ANOVA test; It showed that the calculated value of K+ and the actual value of K+ was no significant difference, in which the theoretical value of the average relative error was 3.0% and the maximum relative error was 7.0%. Conclusion Using the formula to correct the test value of plasma potassium can rapidly get actual plasma potassium concentration in hemolytic specimens from different ages and gender.【Key words】 hemolysis; Hemolytic; plasma potassium;专心-专注-专业